Qui, presentiamo un protocollo per la sintesi del peptide di associazione placentare condroitina solfato A (plCSA-BP)-coniugato del lipido-polimero nanoparticelle via passo singolo sonicazione e bioconjugate tecniche. Queste particelle costituiscono un nuovo strumento per la somministrazione mirata di terapeutica di tumori più umani e trofoblasto placentare per trattare tumori e disturbi placentare.
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
Sintesi e caratterizzazione di placenta condroitina solfato un (plCSA) - Targeting del lipido - nanoparticelle polimeriche
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
Un metodo terapeutico del cancro efficace riduce ed Elimina i tumori con minima tossicità sistemica. Le nanoparticelle attivamente targeting offrono un approccio promettente per la terapia del cancro. Il solfato della condroitina placentare glycosaminoglycan un (plCSA) è espresso su una vasta gamma di cellule tumorali e trofoblasto placentare e malarica proteine che var2csa in particolare può essere associato a plCSA. Un peptide di associazione segnalata placentare condroitina solfato A (plCSA-BP), derivato dalla proteina malarica VAR2CSA, specificamente anche possibile associare a plCSA sulle cellule tumorali e trofoblasto placentare. Quindi, plCSA-BP-coniugato nanoparticelle potrebbero essere usate come uno strumento per somministrazione di farmaci mirati a cancri umani e trofoblasto placentare. In questo protocollo, descriviamo un metodo per sintetizzare nanoparticelle plCSA-BP-coniugato del lipido-polimero caricate con doxorubicina (plCSA-DNPs); il metodo consiste in un singolo sonicazione passo e bioconjugate tecniche. Inoltre, sono descritti diversi metodi per la caratterizzazione plCSA-DNPs, compresa la determinazione di loro proprietà fisico-chimiche e l'assorbimento cellulare di cellule placentari coriocarcinoma (JEG3).
Introduzione
Un metodo terapeutico del cancro efficace riduce ed Elimina i tumori con minima tossicità sistemica. Quindi, targeting tumorale selettiva è la chiave per esplorare metodi di successo terapeutici. Le nanoparticelle offrono un'opportunità promettente per la terapia del cancro, e molecolare assembly con diversi gruppi funzionali saranno che permettono di migliorare l'efficacia dei farmaci e ridurre gli effetti collaterali associati1,2. Inoltre, i sistemi di nanoparticella utilizzano principalmente attivi e passivi di targeting per raggiungere target tumori3.
Pas....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Protocollo
1. preparazione delle soluzioni madri
- Preparare una soluzione acquosa di etanolo al 4% diluendo 4 mL di etanolo assoluto con 100 mL di acqua ultrapura. Conservare la soluzione a 4 ° C.
Nota: Acqua ultrapura è definita come acqua senza contaminanti come batteri, particelle, ioni o nucleasi. Acqua ultrapura è stata ottenuta da un sistema di purificazione dell'acqua con una resistività di destinazione di mΩ·cm fino a 18,2, che significa bassa contaminazione anionici. - Preparare un 1 mg/mL di soluzione madre di lecitina di soia sciogliendo 20 mg di lecitina di soia in 20 mL di soluzione acquosa di etanolo al 4%. Conservare la soluzione stock di lecit....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Risultati
In questo protocollo, PLGA, DSPE-PEG-COOH e soia lecitina sono un polimero rappresentativo, coniugato del lipido-PEG-COOH e lipidi, rispettivamente. La sintesi di nanoparticelle plCSA-mirati del lipido-polimero tramite un singolo passaggio sonicazione metodo e una tecnica EDC/NHS è illustrata nella Figura 1. In primo luogo, in condizioni di sonicazione, lecitina di soia, PLGA e DSPE-PEG-COOH si autoassemblano per formare nucleo-conchiglia strutturato.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Discussione
Questo protocollo fornisce un metodo efficace e riproducibile per la sintesi di nanoparticelle plCSA-BP-coniugato del lipido-polimero. Il metodo di passo singolo sonicazione per preparare nanoparticelle lipidiche-polimero è veloce, riproducibile e diverso dai metodi di nanoprecipitazione tipici che coinvolgono riscaldamento, Vortex o evaporazione. Quindi, il metodo sviluppato riduce significativamente il tempo di sintesi. Inoltre, l'EDC/NHS bioconjugate utilizzato in questo protocollo è una tecnica comunemente usata e co.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Dichiarazioni
X.F. e B.Z. sono gli inventori il brevetto PCT/CN2017/108646 e 201710906587.6 inviato da SIAT che copre un metodo di sintesi di nanoparticelle plCSA-mirati e applicazione. Nessun potenziali conflitti di interesse sono stati divulgati dagli altri autori.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto da sovvenzioni da nazionali chiave della ricerca e sviluppo programma della Cina (2016YFC1000402), la Fondazione nazionale di scienze naturali (81571445 e 81771617) e la Fondazione con scienze naturali della provincia di Guangdong (2016A030313178) per Il fondo di ricerca di Shenzhen Basic (JCYJ20170413165233512) a X.F. e X.F.
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| plCSA peptide | Shanghai GL Biochem | 573518 | per la sintesi di peptidi |
| Etanolo assoluto | Sinopharm 10009218 | chimico per la sintesi di nanoparticelle | |
| Lecitina di soia | Avanti Polar Lipids | 441601 | per la sintesi di nanoparticelle |
| DSPE-PEG-COOH | Avanti Polar Lipids | 880125 | per la sintesi |
| di nanoparticelleDoxorubicina | JKC 113424 chimico | per la sintesi di nanoparticelle | |
| Acetonitrile | Shanghai Lingfeng | 1008621 | per la sintesi di nanoparticelle |
| PLGA | Sigma-Aldrich 719897 | per la sintesi di nanoparticelle | |
| Processore ad ultrasuoni | Sonics | VCX130 | per la sintesi di nanoparticelle |
| Filtro centrifugo (MWCO 10 kDa) | Millipore | UFC801024 | per centrifuga di purificazione di nanoparticelle |
| Sigma | 3-18KS | per purificazione di nanoparticelle | |
| 2-[morfolino]acido etansolfonico (MES) | Sigma-Aldrich | M3671 | per coniugazione di peptidi |
| 1-etil-3-(3-dimetilamminopropil) cloridrato di carbodiimmide (EDC) | Sigma-Aldrich | 3450 | per coniugazione di peptidi |
| N-idrossisuccinimide (NHS) | Sigma-Aldrich | 56480 | per coniugazione di peptidi |
| , Sacche per dialisi, | Spectrum | 132592T | per la purificazione di nanoparticelle |
| PBS | Hyclone | SH30028.01 | per colture cellulari |
| , provette da centrifuga da 10 mL, polipropilene | Aladdin | S-025 | per la sintesi di nanoparticelle |
| , provette da centrifuga da 15 mL, polipropilene | Corning | 430791 | per varie applicazioni |
| 0,22 μ m filtro siringa sterile | Millipore | SLGV033RB | per la purificazione di nanoparticelle |
| siringa da 1 ml, polipropilene | BD | 328421 | per la sintesi di nanoparticelle |
| Malvern Zetasizer | Malvern | Nano ZS | per analizzatore granulometrico |
| Acido | per TEM | ||
| Griglia TEM | EMCN | BZ10024a | per TEM |
| Spettrometro UV-VIS | Leagene | DZ0035 | per TEM |
| Trasmissione microscopio elettronico | JEOL JEM-100CXII | per analizzatore granulometrico | |
| Reagente BCA A | Thermo Fisher Scientific | 23228 | per saggio BCA |
| Reagente BCA B | Thermo Fisher Scientific | 23224 | per saggio BCA |
| Piastre a 96 pozzetti | Corning | 3599 | per BCA |
| test Lettore di piastre | Thermo Fisher Scientific | Multiskan™ GO | per il test BCA |
| Piastre a 12 pozzetti | Corning | 3513 | per colture cellulari |
| JEG3 Banca | cellulare dell'Accademia cinese delle scienze | TCHu195 | Planta umana |
| DMEM/F12 | Hyclone | SH30272.01 | fenolo privo di rosso |
| Siero fetale bovino (FBS) | GIBCO | 10100 | per colture cellulari |
| Penicillina/streptomicina | GIBCO | 15070063 | per coltura cellulare |
| Microscopio a fluorescenza | OLYMPUS | CKK53 | per captazione cellulare |
| Paraformaldeide | Shanghai Lingfeng | 1372021 | per captazione cellulare |
| DAPI | Sangon Biotech | A606584 | per captazione cellulare |
| Substrato di montaggio | Life | P36961 | per captazione cellulare |
Riferimenti
- Davis, M. E., Shin, D. M. Nanoparticle therapeutics: an emerging treatment modality for cancer. Nature Reviews Drug Discovery. 7 (9), 771(2008).
- Nie, S., Xing, Y., Kim, G. J., Simons, J. W. Nanotechnology applications in cancer. Annual Review of Biomedical Engineering. 9, 257-288 (2007).
- Jabir, N. R., et al.
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Ristampe e permessi
