Qui presentiamo un protocollo dettagliato per fare in modo efficiente omo - e heterografts tra anguria e zucca bottiglia, oltre ai metodi di campionamento del tessuto, generazione di dati e analisi dei dati, per l'indagine dei microRNA freddo-sensible a reagire.
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Articolo metodologico
Generazione di omo - e Heterografts tra anguria e zucca bottiglia per lo studio dei microRNA freddo-sensible a reagire
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
I microRNA (Mirna) sono piccoli RNA non codificanti di circa 20-24 endogeni nt, conosciuto per svolgere un ruolo importante nello sviluppo di pianta e di adattamento. C'è un'evidenza accumula mostrando che le espressioni di alcuni miRNA sono alterate quando l'innesto, una pratica agricola comunemente utilizzata dagli agricoltori per migliorare la tolleranza delle colture agli stress biotici e abiotici. Zucca del Pellegrino è una coltura intrinsecamente clima-resiliente rispetto a molte altre cucurbitacee principali, tra cui anguria, rendendolo uno dei portinnesti più ampiamente usati per quest'ultimo. Il recente progresso delle tecnologie di sequenziamento ad alte prestazioni ha fornito grandi opportunità per indagare Mirna freddo-sensible a reagire e i loro contributi ai vantaggi heterograft; Eppure, adeguate procedure sperimentali sono un prerequisito per questo scopo. Qui, presentiamo un protocollo dettagliato per la generazione efficiente di omo - e heterografts tra l'anguria fredda-sensibili e la zucca bottiglia fredda-tollerante, oltre ai metodi di campionamento del tessuto, generazione di dati e analisi dei dati. I metodi presentati sono anche utili per altri sistemi di impianto-innesto, per interrogare miRNA regolamenti sotto vari stress ambientali, quali calore, siccità e salinità.
Introduzione
L'innesto è stato impiegato a lungo come una tecnica agricola per migliorare la produzione vegetale e la tolleranza agli stress biotici e abiotici1,2,3. Nei sistemi heterografting, portinnesti d'eliti possono migliorare l'assorbimento di acqua e sostanze nutritive delle piante, rafforzare la resistenza ai patogeni del suolo e limitare gli effetti negativi della tossicità del metallo4,5, che possono conferire una maggiore gli innesti vigore di crescita e una maggiore tolleranza agli stress ambientali. In molti casi, he....
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Protocollo
1. sterilizzazione e germinazione del seme
- Per la sterilizzazione superficiale, immergere i semi di zucca bottiglia in un becher da 500 mL con acqua a 58 ° C con agitazione occasionale, fino a quando la temperatura dell'acqua scende a 40 ° C.
- Nel frattempo, mettere 3 kg di terreno della torba in un sacchetto di nylon e, per sterilizzare, autoclave a 120 ° C/0.5 MPa per 20 min.
- Tenete in ammollo i semi di zucca bottiglia per 4-5 h più con nessuna agitazione.
- Una volta che l'acqua raggiunga la temperatura ambiente, sciacquare i semi 2 x - 3 volte con acqua distillata.
- Scolare l'acqua in eccesso e permettere i semi a germo....
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Risultati
Figura 2: fenotipi di vari innesti a temperatura ambiente e condizioni di freddo-sollecitato. (un) questo pannello mostra omo - e piantine di heterografted a temperatura ambiente come il controllo. (b) questo pannello mostra omo - ed heterografted piantine dopo 48 h di trattamento a freddo.
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Discussione
In questo protocollo, abbiamo descritto in dettaglio un metodo altamente efficace e riproducibile per rendere omo - e heterografts tra anguria e zucca del Pellegrino. Questo metodo, che richiedono senza attrezzature specifiche, è molto facile da usare e in genere ha un tasso di sopravvivenza molto alta di innesto. Il metodo è utilizzabile anche per fare innesti per altre cucurbitacee, come tra anguria, cetriolo e zucca.
Vale la pena notare che la dimensione relativa (età) del portainnesto e Ma.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla a rivelare. I dati di sequenziamento di RNA piccoli viene depositati in GenBank sotto il numero di adesione SRP136842.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato supportato da National Natural Science Foundation of China (31772191), il progetto di ricerca di interesse pubblico nella provincia di Zhejiang (2017C 32027), la chiave scienza progetto di allevamento vegetale in Zhejiang (2016C 02051) e il programma nazionale per il supporto di prim'ordine giovani professionisti (per spaccio).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Reagente TRIzol | Invitrogen | 15596026 | |
| senza RNA DNasi I | Takara | D2270A | |
| Truseq Kit di preparazione del campione di RNA piccolo | Illumina | RS-200-0012 | |
| 2100 Bionalyser | Agilent | 5067 | |
| DNA polimerasi | Thermo Fisher Scientific | F530S | |
| UEA sRNA workbench versione da 2,4 piante (Software) | NA | NA | http://srna-workbench.cmp.uea.ac.uk/ |
| Rfam 11.0 database ( sito web) | NA | NA | http://rfam.janelia.org |
| miRBase 22.0 ( sito web) | NA | NA | http://www.mirbase.org/ |
| MIREAP(software) | NA | NA https://sourceforge.net/projects/mireap/ | |
| TargetFinder ( software) | NA | NA | http://targetfinder.org/ |
Riferimenti
- Schwarz, D., Rouphael, Y., Colla, G., Venema, J. H. Grafting as a tool to improve tolerance of vegetables to abiotic stresses: Thermal stress, water stress and organic pollutants. Scientia Horticulturae. 127, 162-171 (2010).
- Li, Y., et al. Mechanisms of tolerance differences in cucumber seedlings grafted on rootstocks with different tolerance to low temperature and weak light stresses. Turkish Journal of Botany. 39 (4), 606-614 (2015).<....
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Ristampe e permessi
Tag
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