Infezioni da arbovirus come strumenti di Screening per l'identificazione di fattori virali immunomodulatori e Host antivirale

Emily A. Rex; Dahee Seo; Don B. Gammon

doi:10.3791/58244

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Articolo metodologico

Infezioni da arbovirus come strumenti di Screening per l'identificazione di fattori virali immunomodulatori e Host antivirale

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DOI:

10.3791/58244

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13 settembre 2018

Emily A. Rex¹ , Dahee Seo¹ , Don B. Gammon¹

¹Department of Microbiology, University of Texas Southwestern Medical Center

In questo articolo

Sommario

Qui, presentiamo i protocolli per identificare gli immunomodulatori 1) virus-messo che promuovono la replica da arbovirus e fattori ospite 2) eucariotica che limitano la replica da arbovirus. Questi metodi basati su fluorescenza e luminescenza permettono ai ricercatori di ottenere rapidamente letture quantitative della replica da arbovirus nelle analisi semplicistiche con bassi rapporti segnale-rumore.

Abstract

Interferenza di RNA - e genoma editing basato su piattaforme di screening sono stati ampiamente usati per identificare fattori di cellula ospite che limitano la replicazione del virus. Tuttavia, questi schermi sono in genere condotti in cellule che sono naturalmente permissive al patogeno virale in fase di studio. Di conseguenza, la robusta replicazione del virus in condizioni di controllo può limitare la gamma dinamica di queste schermate. Inoltre, questi schermi potrebbero essere Impossibile identificare facilmente i percorsi di difesa cellulare che limitano la replicazione del virus, se il virus è in grado di contrastare le difese antivirali e ben adattati all'host. In questo articolo, descriviamo un nuovo paradigma per esplorare le interazioni virus-ospite attraverso l'uso di schermi che centro a naturalmente abortite infezioni da arbovirus come virus della stomatite vescicolare (VSV). Nonostante la capacità di riprodursi in una vasta gamma di insetti Ditteri e ospita mammiferi dei VSV, VSV subisce un'infezione post-voce, abortita in una varietà di linee cellulari derivate da lepidotteri insetti come il bombice dispari (Lymantria dispar). Tuttavia, queste infezioni VSV abortive possono essere "salvate" quando le difese antivirali di cellula ospite sono compromesse. Descriviamo come VSV ceppi codifica geni reporter conveniente e restrittive dispar L. linee cellulari possono essere accoppiate agli schermi di messa a punto per identificare fattori dell'ospite coinvolti nella restrizione da arbovirus. Inoltre, mostriamo anche l'utilità di questi strumenti di screening nell'identificazione dei fattori viralmente codificati che replica VSV durante il coinfection o attraverso l'espressione ectopica, compresi quelli codificati dal virus dei mammiferi di soccorso. La limitazione naturale della replica di VSV in dispar L. cellule fornisce un elevato rapporto segnale-rumore quando lo screening per le condizioni che favoriscono il salvataggio VSV, consentendo in tal modo l'uso di metodi semplicistici luminescenza e fluorescenza-basata per monitorare le modifiche nella replica di VSV. Queste metodologie sono utili per comprendere l'interazione tra risposte antivirali ospite e fattori virali evasione immune.

Introduzione

La capacità di un virus di replicare in modo produttivo in un particolare host è in parte regolata dalla disponibilità di fattori di cellula ospite che supportano entrata virale e replica¹. La gamma di virus-ospite può essere dettata anche dalla capacità di un virus a contatore antivirale le difese cellulari che altrimenti impedirebbero la replicazione virale²^,³. Esso è il risultato di queste interazioni virus-ospite complessi che in ultima analisi, decidere se un virus sarà in grado di completare il suo ciclo di vita in un particolare host. Dato le conseguenze potenzialmente patogene p....