Articolo metodologico

Apparato per la raccolta del tessuto microcolonne

DOI:

10.3791/58289

⸱

25 ottobre 2018

 ,  ,  , 
1Wellman Center for Photomedicine, Massachusetts General Hospital, 2Department of Dermatology, Harvard Medical School

In questo articolo

Sommario

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Qui descriviamo un protocollo per la produzione di raccolta aghi che possono essere utilizzati per raccogliere il tessuto della pelle di pieno-spessore senza causare donatore sito cicatrici. Gli aghi possono essere combinati con un sistema di raccolta semplice raggiungere alti volumi di raccolta.

Abstract

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Questo manoscritto descrive il processo di produzione per un apparecchio da laboratorio, costituito da componenti standard, che possono essere utilizzati per raccogliere microcolonne del tessuto della pelle di pieno-spessore. Le piccole dimensioni delle microcolonne permettono donatore siti di guarire rapidamente senza causare sito donatore cicatrici, durante la raccolta del tessuto di pieno-spessore consente l'inserimento di tutti i componenti cellulari ed extracellulari del tessuto della pelle, compresi quelli associato con aree cutanee più profonde e le strutture adnexal della pelle, che devono ancora essere riprodotto con successo mediante tecniche di ingegneria tissutale convenzionali. Le microcolonne possono essere applicate direttamente sulle ferite di pelle per aumentare la guarigione, o può essere utilizzati come origine delle cellule/tessuto autologo per altri approcci di ingegneria dei tessuti. Il raccolto aghi sono fatti modificando gli aghi ipodermici standard, e può essere usati da solo per la raccolta di piccole quantità di tessuto o accoppiati con un sistema di raccolta basato su aspirazione semplice (anche fatto da forniture di laboratorio comunemente disponibili) per volumi elevati di raccolta per facilitare studi in modelli animali di grandi dimensioni.

Introduzione

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Innesto cutaneo autologo è il cardine della riparazione della ferita, ma è limitato dalla scarsità di sito donatore e morbosità, che conduce a sforzi concertati negli ultimi decenni per sviluppare nuove opzioni terapeutiche per sostituire convenzionali l'innesto di pelle1,2 . Recentemente abbiamo sviluppato un metodo alternativo di raccolta della pelle per sfruttare i vantaggi dell'innesto di pelle di pieno-spessore, riducendo al minimo la morbilità del sito donatore. Attraverso la raccolta di pelle di pieno-spessore sotto forma di piccolo (~0.5 mm di diametro) "microcolonne", sono in grado di guarire rapidame....

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Protocollo

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Tutti i lavori che coinvolgono animali vivi e campioni di tessuto animale sono stati approvati dal Massachusetts General Hospital istituzionale Animal Care e uso Committee (IACUC).

1. produzione di raccolta aghi

  1. Installazione della fase di produzione
    1. Garantire un raccordo luer lock femmina su un post e montare il post su un palcoscenico di rotazione in modo che luer lock è al centro del palco (Figura 1A).
    2. Posizionare questa prima fase di rotazione verticale e montarlo perpendicolarmente su una fase di rotazione orizzontale, secondo (Figura 1

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Risultati

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Gli aghi raccolto dovrebbero essere in grado di raccogliere microcolonne del tessuto della pelle di pieno-spessore con circa un tasso di successo di 80-90%, e ogni microcolonna dovrebbe contenere epidermide, derma e qualche grasso sottocutaneo (Figura 4). Se il tasso di successo della raccolta è basso, o se diventa difficile inserire un ago nel tessuto, quindi un nuovo ago è probabilmente necessaria. Se il tasso di successo per la raccolta è sempre basso, anc.......

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Discussione

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I metodi descritti qui sono destinati a consentire la raccolta di tessuto microcolonne in quantità sufficienti per in vivo grandi studi sugli animali, utilizzando strumenti realizzati da forniture di laboratorio disponibili in commercio. Questo apparecchio è stato utilizzato in precedenza nella raccolta del tessuto da pelle umana asportata4,9 , nonché suini vivi pelle3. I parametri specifici descritti sono quelli che sono stati tr.......

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Dichiarazioni

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Gli autori sono co-inventori su brevetti relativi alla tecnologia descritta in questo articolo, da cui hanno ricevuto licenze e royalty ricavi attraverso la loro istituzione, il Massachusetts General Hospital. J. Tam consulta anche per Medline Industries, Inc., che detiene la licenza commerciale per questa tecnologia.

Ringraziamenti

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Questo lavoro è stato supportato in parte di esercito, Marina, NIH, aeronautica, VA e Health Affairs per sostenere lo sforzo di AFIRM II, con il Premio n. W81XWH-13-2-0054. L'US Army Medical acquisizione attività di ricerca, 820 Chandler Street, Fort Detrick, MD 21702-5014 è l'ufficio di acquisizione di aggiudicazione e amministrazione. Opinioni, interpretazioni, conclusioni e raccomandazioni sono quelle dell'autore e non sono necessariamente approvati dal dipartimento della difesa.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Mola diamantataDremel545
Ago ipodermico (19G)Fisher Scientific14-840-98Potrebbero essere utilizzate altre misure di aghi, a seconda delle esigenze sperimentali
Ruota di pietraDremel540
Siringa (20mL con luer lock)Fisher Scientific22-124-967
Adattatore di aspirazioneTulip MedicalPA20BDOpzionale, per la raccolta di grandi volumi
Contenitore di aspirazioneFisher Scientific19-898-212Opzionale, per la raccolta di grandi volumi. Sterilizzare prima dell'uso.
Tubo di aspirazioneMedlineDYND50216HOptional, per la raccolta di grandi volumi

Riferimenti

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  1. Sun, B. K., Siprashvili, Z., Khavari, P. A. Advances in skin grafting and treatment of cutaneous wounds. Science. 346 (6212), 941-945 (2014).
  2. Singh, M., et al. Challenging the Conventional Therapy: Emerging Skin Graft Techniques for Wound Heali....

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