Monitoraggio non invasivo della dimensione della lesione in un modello murino eterologo di endometriosi

Jessica Martinez; Viviana Bisbal; Nerea Marin; Antonio Cano; Raul Gómez

doi:10.3791/58358

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Articolo metodologico

Monitoraggio non invasivo della dimensione della lesione in un modello murino eterologo di endometriosi

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DOI:

10.3791/58358

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26 febbraio 2019

Jessica Martinez¹ , Viviana Bisbal² , Nerea Marin² , Antonio Cano¹^,³^,⁴ , Raul Gómez¹

¹Instituto de Investigación Sanitaria, ²Unidad de Animalario del Centro de Investigación Príncipe Felipe (CIPF), ³Departamento de Pediatría, Obstetricia y Ginecología, Universidad de Valencia, ⁴Servicio de Obstetricia y Ginecología, Hospital Clínico Universitario de Valencia

In questo articolo

Sommario

Qui, presentiamo un protocollo per l'imaging di vivere di frammenti endometriali umane fluorescente contrassegnati innestate nei topi. Il metodo permette di studiare gli effetti dei farmaci di scelta sulla dimensione della lesione endometriotic attraverso il monitoraggio e la quantificazione della fluorescenza emessa dal reporter fluorescente in tempo reale

Abstract

Qui, descriviamo un protocollo per l'attuazione di un modello di topo eterologo in cui progressione di endometriosi può essere valutata in tempo reale attraverso il monitoraggio non invasivo della fluorescenza emessa dal tessuto dell'endometrio umano ectopico impiantato. Per questo scopo, le biopsie dell'endometrio umano vengono ottenute dalla donazione di ovociti in corso donne di donatore. Frammenti dell'endometrio umani sono coltivate in presenza di adenovirus progettato per esprimere cDNA per il reporter proteina fluorescente mCherry. Al momento della visualizzazione, etichettato tessuti con un tasso ottimo di fluorescenza dopo infezione successivamente vengono scelti per l'impianto in topi destinatari. Una settimana prima dell'intervento di impianto, destinatari topi sono oophorectomized e pallini di estradiolo sono posizionati per via sottocutanea per sostenere la sopravvivenza e la crescita delle lesioni. Il giorno dell'intervento, i topi sono anestetizzate e peritoneale cavità accessibili attraverso un'incisione di piccole dimensioni (1,5 cm) da linea-alba. Impianti fluorescente contrassegnati sono tweezed, brevemente imbevuti di colla e attaccati allo strato peritoneale. Incisioni sono suturate e gli animali lasciati a recuperare per un paio di giorni. Fluorescenza emessa da impianti endometriosici solitamente non invasivo è monitorata ogni 3 giorni per 4 settimane con un sistema di imaging in vivo. Variazioni nelle dimensioni di impianti endometriosici possono essere stimate in tempo reale mediante la quantificazione del segnale mCherry e normalizzazione contro il tempo-punto iniziale che mostra l'intensità di fluorescenza massima.

Roditori tradizionale preclinici di modelli di endometriosi non consentono il monitoraggio non invasivo della lesione in tempo reale, ma piuttosto consentono la valutazione degli effetti di farmaci dosati al punto finale. Questo protocollo permette di tenere traccia di lesioni in tempo reale ed è più utile per esplorare il potenziale terapeutico di farmaci in modelli preclinici di endometriosi. Il limite principale del modello così generato è che il monitoraggio non invasivo non è possibile per lunghi periodi di tempo a causa dell'espressione episomal del annuncio-virus.

Introduzione

L'endometriosi è un disturbo ginecologico cronico avviato tramite l'impianto dell'endometrio funzionale di fuori della cavità uterina. Le lesioni ectopiche crescono e inducono processi infiammatori che conduce a dolore e sterilità pelvica cronica¹. Si stima che fino a 10-15% delle donne dell'età riproduttiva sono affetti da endometriosis2, ed è presente in circa il 40-50% delle donne infertili³. Gli attuali trattamenti farmacologici per endometriosi sono in grado di eliminare completamente le lesioni e non privo di effetti collaterali⁴^,⁵. La ricerca di terapie pi....