Vi presentiamo un protocollo per indurre e rilevare CMHs causato da iniezione dei LPS in ratti Sprague-Dawley, che può essere utilizzato in futuro le indagini di ricerca sulla patogenesi di CMHs.
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Articolo metodologico
Sub-acuta microemorragie cerebrale indotta tramite l'iniezione del Lipopolysaccharide in ratti
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
Microemorragie cerebrali (CMHs) sono comuni in pazienti invecchiati e sono correlati a vari disordini neuropsichiatrici. L'eziologia di CMHs è complessa e neuroinfiammazione è osservato spesso come un co-avvenimento. Qui, descriviamo una sub-acuta CMHs modello di ratto indotta dall'iniezione di lipopolisaccaride (LPS), come pure un metodo per la rilevazione di iniezione CMHs. sistemica LPS è relativamente semplice, economico e conveniente. Uno dei principali vantaggi di iniezione dei LPS è la sua stabilità per indurre l'infiammazione. CMHs causato da iniezione dei LPS potrebbe essere rilevata da osservazione lordo, ematossilina ed eosina (HE), di Perl macchiatura prussiano, doppia marcatura blu di Evans (EB) e tecnologia di imaging a risonanza magnetica-suscettibilità weighted imaging (MRI-SWI). Infine, altri metodi di sviluppare modelli animali CMHs, compresi i loro vantaggi e/o svantaggi, inoltre sono discussi in questo rapporto.
Introduzione
Microemorragie cerebrali classiche (CMHs) riferiscono a perivascolare piccoli depositi di prodotti di degradazione del sangue come emosiderina dai globuli rossi nel cervello1. Secondo lo studio di Rotterdam Scan, CMHs potrebbe essere trovato in quasi il 17,8% di persone di età 60-69 anni e 38,3% in quelli oltre 80 anni2. La prevalenza di CMHs negli anziani è relativamente alta, e una correlazione tra l'accumulo di CMHs e disfunzione conoscitiva e neuropsichiatrica è stata stabilita3,4. Diversi modelli animali di CMHs recentemente sono stati segnalati, tra cui mod....
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Protocollo
Tutti i metodi descritti qui sono stati approvati dalla cura degli animali e uso Comitato (ACUC) dell'ospedale generale dell'esercito di PLA.
1. materiali
- Preparazione dell'iniezione dei LPS
- Aggiungere 25 mL di acqua distillata a 25 mg di polvere di LPS derivata da S. typhimurium ad una concentrazione finale di 1 mg/mL. Memorizzare l'iniezione in una provetta sterile a 4 ° C.
Attenzione: LPS è tossico. - Preparare una soluzione EB 2% in soluzione fisiologica 0,9% normale per mantenere iniezione EB alla concentrazione di lavoro.
- Aggiungere 25 mL di acqua distillata a 25 mg di polvere di LPS derivata da S. typhimurium ad una concentrazione finale di 1 mg/mL. Memorizzare l'iniezione in una provetta sterile a 4 ° C.
2. gli animali
- Amm....
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Risultati
CMHs può essere rilevato utilizzando vari approcci. I metodi più ben accettati sono i seguenti: (1) lordo osservazione e valutazione della superficie CMHs (illustrato nella Figura 1, pannello superiore); (2) egli macchiando per la rilevazione di cellule di anima rosse (mostrato in Figura 2A, pannello superiore) o prussiano macchiatura rilevazione ferro ferrico derivato dalla lisi dei globuli rossi (Figura 2A<.......
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Discussione
Studi di ricerca su CMHs sono aumentati negli ultimi anni. Tuttavia, il meccanismo di CMHs rimane poco chiaro, spingente gli scienziati a stabilire modelli animali che simulano questa particolare condizione. Per esempio, Hoffmann et al. sviluppato un modello di mouse CMHs indotta da ipossia che mostra che CMHs sono causati da ipossia e la rottura di autoregolamento cerebrovascolare12. Reuter et al. 5 hanno stabilito un modello CMHs in topi transgenici APP2.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Ringraziamenti
Ringraziamo insegnante Jian Feng Lei e i colleghi di università medica di capitale per l'orientamento durante risonanza magnetica. Ringraziamo anche Jing Zeng dal dipartimento di neurologia, ospedale di Yichang del popolo secondo per la fornitura di supporto tecnico.
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| LPS | Sigma-Aldrich | L-2630 | per l'induzione dell'infiammazione |
| EB | Sigma-aldrich | E2129 | per il rilevamento di perdite EB |
| Soluzione di tintura DAPI | Servicbio | G1012 | terreno di conteggio per IF |
| Perl' s Colorazione prussiana | Solarbio | G1424 | Kit per la colorazione prussiana |
| Colorazione HE | Solarbio | G1120 | Kit per la colorazione HE |
| idrato di cloralio | Sigma-Aldrich | 47335U | Per anestesia |
| tampone fosfato soluzione salina (PBS) | Solarbio | P1022 | un tipo di soluzione tampone comunemente usata nell'esperimento |
| Soluzione | salina allo 0,9%Hainan DonglianChangfu Pharmaceutical Co., Ltd., Cina | soluzione per | |
| perfusione paraformaldeide | Sigma-Aldrich | 158127 | un tipo di soluzione comunemente usata per la fissazione |
| soluzione di saccarosio al 20% | Solarbio | G2461 | un tipo di soluzione comunemente usata per la fissazione |
| saccarosio al 30% | Solarbio | G2460 | un tipo di soluzione comunemente usata per la fissazione |
| unguento veterinario | Solcoseryl gel per gli occhi, Bacel, Svizzera | per la protezione degli occhi dei ratti |
Riferimenti
- Sumbria, R. K., et al. A murine model of inflammation-induced cerebral microbleeds. J Neuroinflammation. 13 (1), 218(2016).
- Vernooij, M. W., et al. Prevalence and risk factors of cerebral microbleeds the Rotterdam Scan Study. Neurology. 70....
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Ristampe e permessi
