Induzione e la valutazione di Inbreeding croci utilizzando la formica, Vollenhovia Emeryi

Sommario

In questo protocollo, vengono descritti metodi per lo svolgimento di consanguineità croci e per valutare il successo di quelle croci, per la formica Vollenhovia emeryi. Questi protocolli sono importanti per esperimenti volti a comprendere le basi genetiche dei sistemi di determinazione del sesso in imenotteri.

Abstract

Le componenti genetiche e molecolari della cascata della determinazione del sesso sono stati studiati estesamente nell'ape da miele, mellifera di Apis, un organismo di modello dell'ordine dei Hymenoptera. Tuttavia, piccolo è conosciuto circa i meccanismi di determinazione del sesso trovati altri taxa dell'ordine dei Hymenoptera non-modello, quali le formiche. A causa della natura complessa dei cicli di vita che si sono evoluti in specie dell'ordine dei Hymenoptera, è difficile da mantenere e condurre incroci sperimentali tra questi organismi in laboratorio. Qui, descriviamo i metodi per lo svolgimento di consanguineità croci e per valutare il successo di quelle croci in formica Vollenhovia emeryi. Indurre la consanguineità in laboratorio utilizzando V. emeryi, è relativamente semplice a causa della biologia unica della specie. In particolare, questa specie produce androgenetica maschi e femminile coevoluzione polimorfismo di ala, che semplifica l'identificazione dei fenotipi in incroci genetici per mostre. Inoltre, valutare il successo di consanguineità è semplice come i maschi possono essere prodotte continuamente di consanguineità croci, mentre maschi normali appaiono solo durante la stagione riproduttiva ben definita nel campo. Il nostro protocollo consentono utilizzando V. emeryi come un modello per studiare la base genetica e molecolare del sistema di determinazione del sesso nella specie di formiche.

Introduzione

Taxa eusociali artropodi, come le formiche e le API, hanno evoluto un sistema di sesso-determinazione di haplodiploid in cui gli individui che sono eterozigoti alla determinazione del sesso complementare uno o più loci (CSD) diventano femmine, mentre quelli che sono omo - o hemizygous diventare maschi (Figura 1A)¹.

Componenti genetiche e molecolari coinvolti nella cascata di determinazione del sesso sono state ben studiate nell'ape da miele, mellifera di Apis, un modello dell'ordine dei Hymenoptera organismo^2,....

Protocollo

1. raccolta e manutenzione delle colonie di V. Emeryi nel laboratorio di campo

Nota: Nidi di V. emeryi si trovano in putrefazione decadente caduti foreste secondarie branchesin albero in tutto il Giappone e registri. Questa specie presenta due tipi di colonie, vale a dire, (1) colonie producendo solo regine dalle ali lunghe e (2) le colonie producono principalmente breve-alato regine oltre al piccolo numero di regine dalle ali lunghe^8,14. In questo protocollo, abbiamo raccolto quest'ultimo tipo di colonie nella Prefettura di Ishikawa, Giappone.

1. R....

Risultati

Analisi del microsatellite utilizzando F₀ e F₁ generazioni è emerso che la consanguineità croci sono state prodotte con successo (Figura 4)⁶. Come risultato di consanguineità croci, regine accoppiate sono state ottenute entro un mese di stabilire colonie incrocio sperimentale. Un quarto (27,1 ± 8,91% SD) di tutta la prole (F₂) dalle croci di consanguineità era maschio, mentre il resto era donna (lavorat.......

Discussione

Questo articolo viene illustrato protocolli che possono essere utilizzati per indurre la consanguineità croci e valutare l'avvenimento di inincroci avvenuti nella formica V. emeryi. Negli esperimenti, genotipizzazione degli individui utilizzati per gli incroci è necessaria garantire che la consanguineità Croci hanno avuto successo. Tuttavia, l'efficacia di questi test di incrocio è chiaramente evidente come maschi diploidi possono essere prodotta durante tutto l'anno, mentre i maschi aploidi possono essere prodo.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Polvere di gesso	N/A	N/A	Qualsiasi marca può essere utilizzata
Carbone, attivato, polvere	Wako	033-02117,037-02115
Vetrino	scorrevole N/A	N/A	Qualsiasi marca può essere utilizzata
Dieta del grillo secco	N/A	N/A	Qualsiasi marca può essere utilizzata
Brown shuger	N/A	N/A	Qualsiasi marca può essere utilizzata
Custodia di forma quadrata in stirene	AS ONE	Qualsiasi dimensione	La dimensione varia in base al numero di formiche
Incbator			Qualsiasi marca può essere utilizzata
Bagno a blocchi di alluminio Unità termica a secco DTU-1B	TAITEC	0014035-000
1.5mL Hyper Microtube, trasparente, fondo rotondo	WATSON	131-715CS
Etanolo (99.5)	Wako	054-07225
Microscopio stereoscopico	N/A	N/A	Qualsiasi marca può essere utilizzata
Forseps	DUMONT	0108-5-PO
Chelex 100 sodio forma	SIGMA	11139-85-8
Soluzione salina tampone fosfato (PBS) compresse, pH7.4	TaKaRa	T9181
Paraformaldeide	Wako	162-16065
-Cellstain- Soluzione DAPI	Dojindo Molecular Technologies	D523
ABI 3100xl Analizzatore Genetico	Applied Biosystems		Contatta direttamente il costruttore per maggiori informazioni.
Microscopio confocale a scansione laser Leica TCS SP8	Leica		Contatta direttamente il costruttore per maggiori informazioni.
HC PL APO CS2 20x/0.75 IMM	Leica		Contatta direttamente il costruttore per maggiori informazioni.
HC PL APO CS2 63x/1.20 WATER	Leica		Contatta direttamente il costruttore per maggiori informazioni.
Leica HyDTM	Leica		Contatta direttamente il costruttore per maggiori informazioni.
Leica Application Suite X (LAS X)	Leica		Contatta direttamente il costruttore per maggiori informazioni.