Articolo metodologico

Uno studio di Immunohistopathologic per profilare il folato recettore Beta macrofago e microambiente vascolare immuni nella arterite a cellule giganti

DOI:

10.3791/58713

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8 febbraio 2019

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1Department of Medicine, Penn State University, 2Department of Pathology, Penn State University, 3Penn State College of Medicine, 4Department of Oncology, Wayne State University School of Medicine

In questo articolo

Sommario

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Il protocollo viene illustrato l'utilizzo dell'esame istopatologico e immunohistochemistry al profilo il macrofago di folato recettore beta e il suo rapporto con il totale delle cellule immuni infiltrarsi in biopsie temporali dell'arteria in arteritis gigante delle cellule.

Abstract

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Arteritis gigante delle cellule (GCA) è un'immuno-mediata malattia cronica delle arterie di dimensioni medio-grandi che colpisce gli adulti più anziani. GCA manifesti con artrite e occlusivi sintomi di mal di testa, colpo o perdita della vista. Macrofagi e linfociti T-helper infiltrano nella parete vascolare e producono una risposta pro-infiammatoria che conducono a danno del vaso e ischemia. Ad oggi, non c'è nessun biomarcatore di GCA che può controllare la malattia attività e guida risposta terapeutica.

Folato del recettore beta (FRB) è una proteina di glicosilfosfatidilinositolo che è ancorata sulle membrane cellulari e normalmente espressi nella stirpe myelomonocytic e nella maggior parte delle cellule di leucemia mieloide pure come nel tumore e macrofagi sinoviali reumatoidi, dove la sua espressione correla con la severità di malattia. La capacità di associare composti di folati, acido folico-coniugati e droghe antifolati FRB ha reso una destinazione trattabili in cancro e la malattia infiammatoria ricerca. Questo rapporto descrive i metodi istopatologici e immunohistochemical, utilizzati per valutare l'espressione e la distribuzione di FRB in relazione GCAimmunopathology.

Le biopsie dell'arteria temporale formalina-fisso e paraffina-incastonati da GCA e comandi normali erano macchiate con ematossilina ed eosina per rivedere l'istologia del tessuto e identificare caratteristiche patognomoniche. Immunohistochemistry è stato usato per rilevare l'espressione FRB, CD68 e CD3. Stata effettuata un'analisi microscopica per quantificare il numero di celle positivamente macchiate in 10 sezioni selezionate di high-power-campo e nelle rispettive posizioni nella parete arteriosa.

L'infiammazione lymphohistiocytic (LH) accompagnato da iperplasia intimale e perturbata lamina elastica è stata veduta nel GCA con nessuno trovato nei controlli. L'infiltrazione di LH era composta di circa il 60% di linfociti e il 40% di macrofagi. Espressione di FRB era limitata ai macrofagi, che comprende il 31% della popolazione di macrofagi CD68 + totale e localizzato ai media e avventizia. Nessun FRB è stato visto nei controlli.

Questo protocollo ha dimostrato un modello distinto di numerico e spaziale del macrofago FRB rispetto al microambiente immune vascolare nel GCA.

Introduzione

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Arteritis gigante delle cellule (GCA) è una malattia infiammatoria delle medio-grandi arterie, l'aorta ed i relativi rami di targeting e che interessa gli adulti più anziani. Si presenta con lievi a gravi complicanze ischemiche quali mal di testa, perdita della vista, dolore alla mascella, gangrene del colpo e del tessuto. La diagnosi è confermata dall'alti indicatori infiammatori come tasso di sedimentazione dell'eritrocito (ESR) e un modello istopatologico distinto sull'arteria temporale biopsia (scheda)1. GCA è la più comune vasculite adulta, e l'accessibilità dell'arteria temporale ottenuta per diagnosi presenta un vantaggio rispetto altre ....

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Protocollo

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Tutti i metodi descritti sono stati approvati da Penn State Institutional Review Board.

1. istopatologico preparazione ed elaborazione previa biopsia dell'arteria temporale

Nota: La biopsia dell'arteria temporale (scheda) viene eseguita in anestesia locale e condizioni sterili di un chirurgo certificato. Dopo aver ottenuto chirurgicamente una sezione arteriosa di 3 cm dal lato più commovente, l'esemplare è fissato in formalina immediatamente per 24 h, diviso in sezioni da 3 a 4 mm e inclusi in paraffina, prestando molta attenzione all'allineamento corretto del tessuto nel blocco che allora è conser....

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Risultati

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Risultati istopatologici

La H & E macchie in anatomia arteriosa normale dimostrata di esemplari normali con le cellule endoteliali in tonaca intima, cellule di muscolo liscio nella tunica media, e una matrice di collagene eterogenea che fibroblasti e vasi dell'alimentatore sono chiamati vasa vasorum nel adventitia di tunica. Non c'è nessun infiltrato infiammatorio identificato. Arterie temporali positive GCA.......

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Discussione

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GCA è la vasculite più comune negli adulti, e relativo marchio di garanzia patologico esemplifica una potente combinazione di linfociti T helper e macrofagi che possono essere trovati anche in altre malattie granulomatose o vasculopatie come sarcoidosi attivati e granulomatosa polyangiitis2,3. Nel GCA, l'arteria temporale fornisce una buona rappresentazione di un'arteria di dimensione medio-grandi e la biopsia TA dà un esempio considerevole che possa essere memor.......

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Dichiarazioni

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Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Ringraziamenti

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Questo lavoro è stato reso possibile dal supporto del Dr. Douglas Stairs, Marianne Klinger, Ann Benko, il divisione di reumatologia/dipartimento di medicina e molecolare e istopatologici Core laboratorio, Penn State University College of Medicine, Hershey PA.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
MicrotomoReichert-Jung
vetrini per microscopio lisci e smerigliatiFisher Scientific 
Cremagliera verticaleFisher Scientific 
Microscopio otticoMicroscopio Olympus BX60 
Xilene
Acetone in acquaconcentrazioni 100%, 90%, 70%
Soluzione salina tamponata con tris (TBS) Dako Wash BufferS3006
Perossido di idrogeno al 3% in TBS
Diaminobenzidina (DAB)Sigma Fast Tablet set
Chemical Permount  Supporto di montaggioFisher Scientific SP-15-100
Harleco Gill's III HematoxylinFiisher Scientific 23-750-019
Harleco Eosin Y 1% soluzione alcolica FisherScientific 23-749-977
10 mM acido citrico monoidrato (pH 6,0)
Recettore anti-folato di coniglio policlonale beta Manohar Ratnamottimizzato a 1:800
Topo monoclonale anti-umano CD68Dako M071801ottimizzato a 1:200
Coniglio policlonale anti-CD3Agilent DakoA0452ottimizzato a 1:100
Polimero capra anticorpo secondario coniglio/topoDako
Tessuto per controllo positivo FRB
distillata placentare

Riferimenti

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  1. Klippel, J. H., Stone, J. H., White, P. H. Primer on the rheumatic diseases. , Springer Science & Business Media. (2008).
  2. Weyand, C. M., Goronzy, J. J. Immune mechanisms in medium and large-vessel vasculitis. Nature Reviews Rheumatol. 9 (12), 731-740 (2013).
  3. Weyand, C. M., Liao, Y. J., Goronzy, J. J.

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Tag

ImmunoistochimicaBiopsia dell arteria temporaleMacrofagi CD68Linfociti CD3Ematossilina EosinaRecupero dell antigeneSubstrato DABMicroscopia ottica

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