Qui, presentiamo un protocollo per ottenere frazione vascolari stromali da tessuto adiposo attraverso una serie di processi meccanici, che includono emulsificazione e centrifugazioni multiple.
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Articolo metodologico
Micronizzazione meccanici di Lipoaspirates per la terapia rigenerativa
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
Frazione vascolare stromal (SVF) è diventato uno strumento rigenerativo per varie malattie; Tuttavia, la legislazione disciplina rigorosamente l'applicazione clinica dei prodotti delle cellule usando collagenosi. Qui, presentiamo un protocollo per generare una miscela iniettabile di SVF cellule e matrice extracellulare nativa dal tessuto adiposo di un processo puramente meccanico. Lipoaspirates sono messi in una centrifuga e filata a 1.200 x g per 3 min. Lo strato intermedio è raccolto e separato in due strati (ad alta densità grasso nella parte inferiore) e grasso a bassa densità in alto a sinistra. Lo strato superiore è emulsionato direttamente spostando intersyringe, ad un tasso di 20 mL/s per 6 x a 8 x. Il grasso emulsionato viene centrifugato a 2.000 x g per 3 min, e la sostanza appiccicosa sotto lo strato di olio è raccolto e definita come la matrice extracellulare (ECM) / SVF-gel. L'olio sullo strato superiore è raccolto. Circa 5 mL di olio è aggiunto a 15 mL di grasso ad alta densità ed emulsionati spostando intersyringe, ad un tasso di 20 mL/s per 6 x a 8 x. Il grasso emulsionato viene centrifugato a 2.000 x g per 3 min, e la sostanza appiccicosa è anche ECM/SVF-gel. Dopo il trapianto di ECM/SVF-gel in topi nudi, l'innesto è raccolto e valutato da esame istologico. Il risultato mostra che questo prodotto ha il potenziale per rigenerare nel normale tessuto adiposo. Questa procedura è una procedura di dissociazione meccanica semplice ed efficace per condensare le cellule SVF incorporate nel loro naturale ECM solidale per scopi rigenerativi.
Introduzione
Terapie con cellule staminali forniscono un cambio di paradigma per la rigenerazione e riparazione tissutale, affinché possano offrire un regime terapeutico alternativo per varie malattie1. Cellule staminali (ad es., cellule staminali pluripotenti indotte e cellule staminali embrionali) hanno un grande potenziale terapeutico, ma sono limitate a causa di regolazione cellulare e considerazioni etiche. Adiposo-derivate mesenchimali stromali/cellule staminali (ASCs) sono facili da ottenere da lipoaspirates e non sono soggetti alle stesse restrizioni; così, è diventata un tipo di cellula ideale per la pratica della medicina rigenerativa
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Protocollo
Questa ricerca è stata approvata dal comitato etico recensione in Nanfang Hospital, Guangzhou, Cina. Il tessuto adiposo è stato raccolto da donatori sani che ha dato il consenso informato scritti di prendere parte allo studio. Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati approvati dal comitato di uso e Nanfang Hospital istituzionale Animal Care ed eseguiti secondo le direttive del National Health and Medical Research Council (Cina).
1. preparazione ECM/SVF-gel
- Raccogli grasso.
- Eseguire la liposuzione su un essere umano con una cannula multiporta di 3 mm, che contiene diversi fori taglienti laterali di 1 mm di diametro, a....
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Risultati
Dopo aver elaborato il grasso di Coleman a ECM/SVF-gel, il volume di olio scartato occupa 80% del volume finale, e solo il 20% del tessuto adiposo conservato sotto lo strato di olio è considerato come ECM/SVF-gel (Figura 1A). ECM/SVF-gel ha una consistenza morbida simil-liquido che permette di passare attraverso un ago sottile 27 G; Tuttavia, Coleman grasso è composto da una struttura adiposa integrale con grandi fibre e può passare solo attr.......
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Discussione
Terapia rigenerativa basata su cellule staminali ha mostrato un grande potenziale beneficio in diverse malattie. ASC sono i candidati terapeutici eccezionali perché sono facili da ottenere e avere la capacità di riparazione dei tessuti e la rigenerazione di tessuti romanzo15. Tuttavia, esistono limitazioni ad espandere la sua applicazione clinica, poiché richiede complicate procedure per isolare le cellule e la collagenosi per l'elaborazione di6. Quindi, è essenziale per sv.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato supportato dalla Fondazione di scienza natura nazionale della Cina (81471881, 81601702, 81671931), il fondamento di scienza naturale della provincia di Guangdong (2014A030310155) e l'amministratore Foundation di Nanfang Hospital (2014B009, 2015Z002, 2016Z010, 2016B001).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Alexa Fluor 488-isolectina coniugata GS-IB4 | Sonde molecolari | I21411 | |
| cavia anti-topo perilipina | Progen | GP29 | |
| DAPI | Thermofisher | D1306 | |
| pipetta a punta larga | Celltreat | 229211B | |
| Microscopio confocale | Leica | TCS SP2 | |
| nudo bello | Southern Mdical University | / | |
| microscopio ottico | Tubo Olympus | / | |
| 50 mL | Cornig | 430828 | |
| sacca sterile | Laishi | / | |
| microtomo | Leica | Centrifuga CM1900 | |
| Heraus |
Riferimenti
- Bateman, M. E., et al. Using Fat to Fight Disease: A Systematic Review of Non-Homologous Adipose-Derived Stromal/Stem Cell Therapies. Stem Cells. 36 (9), 1311-1328 (2018).
- Baer, P. C., Geiger, H.
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Ristampe e permessi
