Questo protocollo descrive il processo di immunocolorazione delle biopsie di aspirazione rettale per la calretinina, la proteina S100 e il gene proteico prodotto 9,5. Questo nuovo metodo diagnostico adiuvante per la malattia di Hirschsprung ha un tasso di sensibilità e specificità preferibile.
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Articolo metodologico
Diagnosi di malattia di Hirschsprung da immunostaining biopsie di aspirazione rettale per calretinina, S100 proteina e proteina gene prodotto 9,5
In questo articolo
Sommario
Abstract
La malattia di Hirschsprung (HD) è una malattia intestinale congenita che si manifesta clinicamente come incapacità di passare il meconio nei neonati o come stipsi a lungo termine nei bambini. La biopsia di aspirazione rettale (RSB) per determinare l'assenza di cellule di ganglio e ipertrofia neurale è il test più accurato per la diagnosi di MH al momento. Colorazione ematossilina-eosina tradizionale manca di sensibilità e specificità. La colorazione dell'acetilcolinesterasi non può essere ampiamente utilizzata a causa del suo complesso processo. Il nostro nuovo protocollo di immunocolorazione per calretinina, proteina S100 e proteina genica prodotto 9,5 (PGP 9.5), che abbiamo condotto su rsbs, presenta elevati tassi di sensibilità e specificità di 96,49% (intervallo di confidenza 95%, 0,88-0,99) e 100% (95% di confidenza intervallo di frequenza, 0,97-1,00), rispettivamente. I segmenti affetti da MH spesso presentano l'assenza dell'espressione di calretinina, proteina S100 e PGP 9.5, che sono marcatori di ipertrofia neurale nel tessuto sottomucoso. Questo protocollo descrive il processo operativo dettagliato di questo nuovo metodo diagnostico.
Introduzione
La malattia di Hirschsprung (HD) è un disturbo intestinale congenito comune caratterizzato da una mancanza di cellule di ganglio in diversi segmenti del tratto intestinale distale1. Il sistema nervoso enterico umano si forma quando l'invasione delle cellule neurali embrionali è completata. Se c'è un disturbo del processo e l'invasione non riesce a completare, l'intestino distale del neonato diventa aganglionic2. Questa condizione potenzialmente fatale è chiamata malattia di Hirschsprung. La proliferazione, la motilità e la crescita intestinale sono i tre componenti principali della colonizzazione di successo.
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Protocollo
Questo protocollo è stato approvato dal Consiglio etico di ricerca dell'ospedale dell'Unione di Huazhong Università della scienza e della tecnologia.
1. biopsia di aspirazione rettale
- Eseguire la biopsia di aspirazione rettale da un chirurgo pediatrico ben addestrato e un assistente utilizzando un sistema di biopsia rettale di aspirazione Rbi2 dopo aver ottenuto il consenso informato dal tutore.
- Eseguire RSB su pazienti che hanno le seguenti indicazioni: incapacità di passare meconio nei neonati o gonfiore a lungo termine con o senza stitichezza nei bambini; bambini con costipazione a lungo termine che necessitano di olio ....
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Risultati
In totale, 318 pazienti sono stati arruolati nel nostro studio. Tutti i pazienti erano sottoposti a RSB e i tessuti erano macchiati per calretinina, S100 e PGP 9.5. La diagnosi basata sul nostro nuovo protocollo è stata la MH in 97 casi, non HD in 213 casi, e sospetta MH in 8 casi. Tra i 132 pazienti chirurgici, 99 pazienti sono stati diagnosticati con MH mediante immunocolorazione di campioni a pieno spessore dopo l'intervento chirurgico. La colorazione S100 e PGP 9.5 ha mostrato che il .......
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Discussione
Qui abbiamo descritto una procedura che utilizza tre diversi anticorpi immunoistochimici per macchiare le sezioni RBS per la diagnosi di MH. La sensibilità del nostro protocollo diagnostico era 96,49% (95% CI, 0,88-0,99), e la specificità era 100% (95% CI, 0,97-1.00).
Le fasi più critiche del protocollo sono RSB e reazione di antigene-anticorpo. La dimensione della biopsia determina l'accuratezza della colorazione. Una piccola biopsia non fornirà abbastanza tessuto per fare una diagnosi precis.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Gli autori ringraziano weibing Tang per il suo grande aiuto nel fornire il laboratorio di riprese. Questo articolo è supportato dalla ricerca sul benessere pubblico, e sono stati ricevuti fondi speciali dalla pianificazione nazionale della salute e della famiglia della Cina (Grant No. 201402007).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| anticorpo alla calretinina | MXB Biotechnologies | MAB-0716 170416405c | anticorpo: anticorpo primario |
| Anticorpo S-100 MXB | Biotechnologies | Kit-0007 | anticorpo: anticorpo primario |
| PGP9.5 anticorpo | Shanghai long island antibody Co. Ltd | R-0457-03 | di anticorpi primari |
| MXB Biotechnologies | KIT-9902-A 170416405a | anticorpo: anticorpo secondario A | |
| Capra anti-coniglio/topo IgG Anticorpo secondario | MXB Biotechnologies | KIT-9902-B | anticorpo: anticorpo secondario B |
| Kit di colorazione DAB (contenente reagenti A, B e C) | MXB Biotechnologies | Kit di colorazione DAB-0031 | Incubatore |
| termico | Shanghai yiheng instrument Co. Ltd | DHP-9082 | strumento |
| Rbi2 aspirazione biopsia rettale sistema | Aus Systems Pty Ltd, South Australia, Australia | CP1200 HP1000 SS1000 | |
| strumento microtomo | Leica | leica RM2016 | strumento |
| acido citrico citrato di sodio tampone (100X) | MXB Biotechnologies | MVS-0101 | tampone per il recupero dell'antigene |
| disidratatore tissutale patologico | wuhan junjie electronic Co. Ltd | JT-12F | strumento |
Riferimenti
- Tam, P. K. Hirschsprung's disease: A bridge for science and surgery. Journal of Pediatric Surgery. 51 (1), 18-22 (2016).
- Heanue, T. A., Pachnis, V. Enteric nervous system development and Hirschsprung's disease: advance....
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Ristampe e permessi
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