In questo protocollo, si descrive il processo completo di occhiali di incentivo in topi facendo uso di nuova concepito sperimentale miopia e la tecnica necessaria per il raggiungimento di risultati stabili e riproducibili in misure di parametri oculari.
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
Incentivo e la valutazione di un modello murino di miopia sperimentale
In questo articolo
Sommario
Abstract
Modello murino della miopia può essere un potente strumento per la ricerca di miopia a causa della manipolazione genetica relativamente facile. Un modo per indurre la miopia negli animali è di mettere chiaro meno lenti davanti gli occhi per settimane (miopia indotta da lente, LIM). Tuttavia, ancora esistenti protocolli di incitamento e di valutazione variano da laboratorio a laboratorio. Qui, abbiamo descritto un metodo altamente pratico e riproducibile per indurre gli occhiali LIM in topi facendo uso di nuova concepito. Le correzioni di metodo la lente stabilmente davanti all'occhio del mouse mentre consente l'obiettivo di essere tolto per la pulizia o d'attualità droga amministrazione. Il fenotipo è robusto ed efficiente, e la varianza è piccola. Il metodo qui descritto può essere applicato ai topi subito dopo lo svezzamento che estende la durata possibile per esperimenti. Abbiamo anche dato tecnico fornisce consulenza per il raggiungimento di risultati riproducibili in rifrazione e misurazioni di lunghezza assiale. Ci auguriamo che il protocollo passo dopo passo descritto qui e l'articolo dettagliato può aiutare i ricercatori a eseguire esperimenti di miopia con miopia più scorrevole e rendere i dati comparabili attraverso laboratori.
Introduzione
La prevalenza della miopia è aumentato drammaticamente recentemente, mentre il meccanismo di insorgenza e progressione sono ancora in gran parte sconosciuto1. Il fenotipo più caratteristico della miopia è l'allungamento della lunghezza assiale (AL), che aumenta il rischio per le complicazioni retiniche o persino cecità2. Per meglio comprendere la patogenesi della miopia e sviluppare trattamenti efficaci, modelli animali miope robusti e stabile fenotipo valutazione sono necessari.
In breve, esistono due metodi per indurre stati miopi negli animali: miopia forma-privazione (FDM) e miopia indotta....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Protocollo
Tutte le procedure sono state approvate dal comitato etico sulla ricerca animale della scuola di medicina dell'Università di Keio aderito all'ARVO istruzione per l'uso degli animali in oftalmica e Vision Research, le linee guida istituzionali sulla sperimentazione animale presso Keio Università e la ricerca di animale: Reporting di In Vivo esperimenti (arrivo) linee guida per l'uso di animali nella ricerca.
1. montaggio degli occhiali per topi
- Preparare le parti necessarie per il montaggio degli occhiali (Figura 1a). Per ogni mouse, preparare tutti i followings: bastone un nylon testa-montata, uno sup....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Risultati
Al momento del check in primo luogo, se tutte le parti necessarie sono preparate (Figura 1a). Un esempio di un pezzo di eyeglasses assemblato è mostrato in Figura 1b. Fatta eccezione per il corpo principale dei telai e il dado, tutte le altre parti sono USA e gettare per ogni mouse. Un insieme degli occhiali completati è illustrato nella Figura 1 c. Modificare l'angolo tra i due telai per adattare il.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Discussione
Per assicurarsi che gli occhiali per essere fissato stabilmente sulla testa del mouse, alcuni passaggi in questo protocollo devono essere prestato grande attenzione. Il periostio deve essere rimosso completamente prima di utilizzare il sistema adesivo dentale. Il sangue sul cranio anche bisogno di essere ripulito con cura. Mentre una regolazione fine poco è accettabile subito dopo l'applicazione dell'adesivo, non muovere lo stick frequentemente prima che il sistema adesivo asciugare. Seguire le istruzioni del sistema ade.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Dichiarazioni
Il design dell'occhiale del mouse è stato applicato per un brevetto (domanda n. 201741349).
Ringraziamenti
Ringraziamo M.T. Pardue per consigli su SDOCT, F. Schaeffel per consigli sulle misure di rifrazione e della curvatura corneale, il signor Sanshouo per ricreare i dati della struttura tridimensionale, Miyauchi M.; K. Tsubota; Y. Tanaka; S. Kondo; C. Shoda; M. Ibuki; Y. Miwa; Y. Hagiwara; R. Ishida; Y. Tomita; Y. Katada; E. Yotsukura; K. Takahashi; e Y. Wang per discussioni critiche. Questo lavoro è stato supportato da inAid di sovvenzioni per la ricerca scientifica (KAKENHI, numero 15K 10881) dal Ministero della pubblica istruzione, cultura, sport, scienza e tecnologia (MEXT) di TK. Questo lavoro è anche supportato dalla concessione per la ricerca di miopia da laborato....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| vite | NBK | SNZS-M1.4-10 | |
| rondella | MonotaRO | dado 42166397 | |
| MonotaRO | bastone 42214243 | ||
| DMM Make | nessuno | progettato da autori e prodotto dalla stampante 3D noleggiata da DMM Make. | |
| telaio | DMM Make | non | progettato da autori e prodotto dalla stampante 3D noleggiata da DMM Make. |
| lenti | LENTI A CONTATTO ARCOBALENO | nessuna | personalizzata per uso topi dall'azienda |
| colla cianoacrilica | OK MODEL | MP 20g | |
| adesivo dentale resina cemente | SUN MEDICAL | super bond | contiene il liquido mordenzante utilizzato per la rimozione del periostio del cranio del topo |
| fotorifrattore a infrarossi | Steinbeis Transfer Center | nessuno | progettato e offerto dal Dr. Frank Schaeffel dell'università di Tü bingen |
| Dominio spettrale OCT | Leica | R4310 | |
| Tropicamide, penilefrina cloridrato soluzione | Santen | Mydrin-P | |
| midazolam | Sandoz K.K. | Componenti SANDOZ | per l'anestetico |
| medetomidina | Orion Corporation | Componenti Domitor | per l'anestetico |
| butorfanolo tartrato | Meiji Seika Pharma | Vetorphale | componenti per l'anestetico |
| 0,1% ialuronato di sodio purificato | Santen | Hyalein | |
| atipamezolo cloridrato | Zenoaq | antisedan |
Riferimenti
- Dolgin, E. The myopia boom. Nature. 519 (7543), 276-278 (2015).
- Ohno-Matsui, K. Pathologic Myopia. Asia-Pacific Journal of Ophthalmology (Philadelphia, Pa). 5 (6), 415-423 (2016).
- Morgan, I. G., Ashby, R. S., Nickla, D. L.
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Ristampe e permessi
