Metodo di impalamento dei microelettrodi per registrare il potenziale della membrana da un'arteria cerebrale media cannulata

Summary

L'obiettivo principale di questo articolo è quello difornire dettagli su come registrare il potenziale della membrana (V m) dall'arteria cerebrale media utilizzando il metodo di impalamento dei microelettrodi. L'arteria cerebrale media cannulata è equilibrata per ottenere un tono miogenico, e la parete del vaso è impalato utilizzando microelettrodi ad alta resistenza.

Abstract

Il potenzialedi membrana (V m) delle cellule muscolari limpiche vascolari determina il tono del vaso e quindi il flusso sanguigno a un organo. Cambiamenti nell'espressione e nella funzione dei canali ionici e delle pompe elettrogeniche che regolano V_m in condizioni di malattia potrebbero potenzialmente alterare V_m, tono vascolare e flusso sanguigno. Pertanto, una comprensione di base dell'elettrofisiologia e dei metodi necessari per registrare con precisione V_m in stati sani e malati sono essenziali. Questo metodo permetterà la modulazione V_m utilizzando diversi agenti farmacologici per ripristinare V_m. Anche se ci sono diversi metodi, ognuno con i suoi vantaggi e svantaggi, questo articolo fornisce protocolli per registrare V_m da vasi di resistenza cannulati come l'arteria cerebrale media utilizzando il metodo di impalamento dei microelettrodi. Le arterie cerebrali medie sono autorizzate a ottenere un tono miogenico in una camera miografica, e la parete del vaso è impalato utilizzando microelettrodi ad alta resistenza. Il segnale V_m viene raccolto attraverso un elettrometro, digitalizzato e analizzato. Questo metodo fornisce una lettura accurata del V_m di una parete del vaso senza danneggiare le cellule e senza modificare la resistenza della membrana.

Introduction

Il potenziale della membrana (V_m) di una cellula si riferisce alla differenza relativa della carica ionica attraverso la membrana plasmatica e alla relativa permeabilità della membrana a questi ioni. Il V_m è generato dalla distribuzione differenziale degli ioni ed è mantenuto da canali ionici e pompe. I canali ionicicome K^,Na , e Cl^, contribuiscono in modo sostanziale al V_ma riposo. Le cellule muscolari limpiche (VSMC) esprimono più di quattro diversi tipi di canali K¹, due tipi di canali Ca^{2 ,} gated tensione (VGCC)², più di due tipi ....

Protocol

I ratti maschi sono stati alloggiati presso l'Animal Care Facility dell'UMMC, approvato dall'Associazione per la valutazione e l'accreditamento della cura degli animali di laboratorio (AAALAC). Gli animali hanno avuto libero accesso al cibo e all'acqua durante tutto lo studio. Gli animali sono stati mantenuti in un ambiente controllato con temperatura a 24 , 2 gradi centigradi, livelli di umidità del 60-80% e cicli di luce/buio di 12 h. Tutti i protocolli sono stati approvati dall'Animal Care and Use Committee dell'UMMC.

1. Preparazione dell'attrezzatura

1. Posizionare un amplificatore elettrometro differenziale a doppio canale (vede....

Results

Il metodo presentato può essere utilizzato in modo affidabile per registrare V_m in vasi cannulati. Una breve procedura che descrive come isolare MCA dal cervello è presentato in Figura 1A. Dopo aver diviso il cervello dal cranio, l'MCA è stato sezionato e posto in un piatto Petri contenente PSS a basso calcio. Parte del tessuto connettivo che è stato attaccato è stato anche sezionato insieme a MCA utilizzando forbici a molla e pinze per evitare dan.......

Discussion

Questo articolo fornisce i passaggi necessari su come utilizzare un metodo di impalamento a microelettrodo affilato per registrare V_m dalla preparazione di un vaso cannulato. Questo metodo è ampiamente utilizzato e offre registrazioni coerenti e di alta qualità di V_m che rispondono a una vasta gamma di domande sperimentali.

Alcune considerazioni critiche e procedure per la risoluzione dei problemi sono descritte di seguito per garantire l'esito positivo del metodo. La qua.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Strumenti di dissezione
Vaporizzatore anestetico	Parkland scientific	V3000PK
Microscopio di dissezione	Nikon Instruments Inc., NY	Eclipse Ti-S
Kleine Guillotine Type 7575	Harvard Apparatus, MA	73-198
Littauer Bone Cutter	Strumenti	per la scienza fine16152-15
Moria MC40 Pinza ultra fine	Strumenti per la scienza fine	11370-40
Forbici chirurgiche Sharp-Blunt	Strumenti per la scienza fine	14008-14
Sutura	Apparato Harvard	72-3287
Forbici a molla Vannas	Strumenti per la scienza	15018-10
Strumenti per elettrofisiologia
Telecamera per dispositivo ad accoppiamento di carica	Qimaging, , BC	Retiga 2000R
Amplificatore per elettrometro differenziale	WPI	FD223A
Trasduttore di pressione in linea	Harvard Apparatus, MA	MA1 72-4496
Micromanipolatore	Thor labs	PCS-5400
Microelettrodi	Warner Instruments LLC, CT	G200-6,
Micro Fil (siringa in microfibra)	WPI	MF28G67-5
Supporto per microelettrodo	WPI	MEH1SF
Myograph	Living Systems Instrumentation, VT	CH-1-SH
Estrattore	Sutter Instrument, San Rafael, CA	P-97
Tavolo senza vibrazioni	TMC	3435-14
< strong>Softwares
Clampex 10	Dispositivi
p Clamp 10	Dispositivi
Software di imaging	Nikon, NY	NIS-elements
Chemicals
NaCl	Sigma	S7653
KCl	Sigma	P4504
MgSO4	Sigma	M7506
CaCl2	Sigma	C3881
HEPES	Sigma	H7006
Glucosio	Sigma	G7021
NaH2PO4	Sigma	S0751
NaHCO3	Sigma	S5761