Induzione e punteggio della malattia di Graft-Versus-Host in un modello di Murine Xenogeneico e quantificazione delle cellule T umane nei tessuti del topo utilizzando pcR digitale

Amara Seng; Mary  A. Markiewicz

doi:10.3791/59107

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Articolo metodologico

Induzione e punteggio della malattia di Graft-Versus-Host in un modello di Murine Xenogeneico e quantificazione delle cellule T umane nei tessuti del topo utilizzando pcR digitale

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DOI:

10.3791/59107

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23 maggio 2019

Amara Seng¹ , Mary A. Markiewicz¹

¹Department of Microbiology, Molecular Genetics, and Immunology, University of Kansas Medical Center

In questo articolo

Sommario

Qui, presentiamo un protocollo per indurre e segnare la malattia in un modello di malattia xenogeneica innesto contro ospite (xenoGVHD). xenoGVHD fornisce un modello in vivo per studiare l'immunosoppressione delle cellule T umane. Inoltre, descriviamo come rilevare le cellule T umane nei tessuti con la PCR digitale come strumento per quantificare l'immunosoppressione.

Abstract

La malattia acuta di innesto contro ospite (GVHD) è una limitazione significativa per i pazienti sottoposti a trapianto di cellule staminali ematopoietiche come terapia per carenze ematologiche e neoplasie. Il GVHD acuto si verifica quando le cellule T donatrici riconoscono i tessuti ospiti come un antigene estraneo e montano una risposta immunitaria all'ospite. Gli attuali trattamenti riguardano farmaci immunosoppressori tossici che rendono i pazienti suscettibili di infezione e recidiva. Così, C'è ricerca in corso per fornire una terapia acuta GVHD che può efficacemente indirizzare le cellule T del donatore e ridurre gli effetti collaterali. Gran parte di questo lavoro pre-clinico utilizza il modello murino xenogeno GVHD (xenoGVHD) che consente di testare le terapie immunosoppressive sulle cellule umane piuttosto che murine cellule in un sistema in vivo. Questo protocollo descrive come indurre xenoGVHD e come accecare e standardizzare il punteggio clinico per garantire risultati coerenti. Inoltre, questo protocollo descrive come utilizzare la PCR digitale per rilevare le cellule T umane nei tessuti dei topi, che possono essere successivamente utilizzate per quantificare l'efficacia delle terapie testate. Il modello xenoGVHD non solo fornisce un modello per testare le terapie GVHD, ma qualsiasi terapia che può sopprimere le cellule T umane, che potrebbe quindi essere applicata a molte malattie infiammatorie.

Introduzione

Il trapianto di cellule staminali ematopoietiche allogeniche (HSCT) è diventato un trattamento di routine per i pazienti affetti da neoplasie ematologiche come la leucemia con prognosi infausta. Una complicazione significativa dell'HSCT è la malattia acuta di innesto contro l'ospite (GVHD). Uno studio del 2012 ha riferito che il GVHD acuto si è sviluppato nel 39% dei pazienti con HSCT che hanno ricevuto trapianti da donatori fratelli e 59% dei pazienti sottoposti a trapianto da donatori non correlati¹. Il GVHD acuto si verifica quando le cellule T derivate dal donatore attaccano gli organi del destinatario. L'unica terapia di successo per gVHD ....