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Articolo metodologico

Misurazione del cortisolo a Koala (Phascolarctos cinereus) Pelliccia

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DOI:

10.3791/59216

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23 agosto 2019

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In questo articolo

Sommario

Vi presentiamo un protocollo per determinare il solvente di estrazione ottimale per misurare il cortisolo dalla pelliccia di koala. I solventi utilizzati in questo protocollo sono metanolo, etanolo e isopropanolo. Determinare un solvente di estrazione ottimale aiuterà a misurare in modo affidabile la pelliccia per determinare l'impatto dello stress cronico sui koala.

Abstract

I metodi ottimali di estrazione degli ormoni utilizzati per misurare lo stress negli animali tra i tipi di campione non sono sempre gli stessi. L'iconica specie marsupiale australiana, il koala (Phascolarctos cinereus), deve affrontare un'esposizione prolungata a fattori di stress antropogenici e la valutazione dello stress cronico nelle popolazioni selvatiche è urgentemente giustificata. Uno dei modi più efficaci per misurare lo stress cronico è attraverso l'analisi dell'ormone glucocorticoide cortisolo nei capelli o pelliccia, in quanto supporta le risposte fisiologiche e comportamentali. Questo studio di convalida di laboratorio ha lo scopo di testare le tecniche attuali per convalidare un metodo ottimale di estrazione dell'ormone da utilizzare come misura non invasiva del cortisolo nella pelliccia di koala. È riconosciuto che l'utilizzo di tecniche non invasive per misurare gli ormoni dello stress è preferito rispetto alle tecniche tradizionali ed invasive a causa delle loro ideali punti di vista pratici ed etici. Inoltre, è relativamente più facile acquisire pelliccia dai koala che acquisire campioni del loro sangue. Questo studio ha utilizzato campioni di pelliccia di koala acquisita dall'Adelaide Koala e dal Wildlife Hospital per eseguire una serie di tecniche di estrazione ormonale nel tentativo di convalidare un metodo ottimale di estrazione del cortisolo. I risultati hanno mostrato che il metanolo al 100% ha fornito l'estrazione del solvente più ottimale rispetto al 100% di etanolo o al 100% dell'isopropanolo sulla base dei risultati del parallelismo. In conclusione, questo metodo di estrazione del cortisolo dalla pelliccia di koala ha fornito un saggio affidabile non invasivo che potrebbe essere utilizzato per studiare lo stress cronico nei koala.

Introduzione

Gli ecosistemi australiani sostengono la vita umana attraverso la fornitura di servizi tra cui cibo e fibra tra molte altre interazioni dinamiche1. Ironia della sorte, è l'attività umana che opera come il motore dominante della perturbazione dell'ecosistema attraverso il cambiamento della biodiversità2. La frammentazione degli habitat, noto come processo di divisione di grandi habitat continui in piccole macchie di terra, isolate l'una dall'altra, è il principale cambiamento di biodiversità antropogenica che minaccia gli ecosistemi australiani2. La frammentazione dell'habitat modifica la struttura....

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Protocollo

Questo progetto è stato eseguito secondo severe linee guida per la cura degli animali e dell'uomo. L'etica animale è stata concessa dalla Western Sydney University (A12373). Inoltre, una valutazione del rischio di laboratorio e un modulo di biosicurezza e radiazioni sono stati inviati e accettati dalla Western Sydney University per intraprendere in modo sicuro questa ricerca (B12366).

NOTA: I campioni di pelliccia di Koala per questo progetto sono stati ottenuti dall'Adelaide Koala and Wildlife Hospital, situato al 282 di Anzac Highway, Plympton South Australia. La pelliccia è stata prelevata da un koala che era stato ricoverato in ospedale....

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Risultati

Il rilevamento di analisi dei metaboliti ormonali di interesse è determinato utilizzando il parallelismo. Utilizzando una curva di parallelismo, il punto di rilegatura del 50% determina anche il fattore di diluizione del campione sulla curva standard (Figura 1). Come mostrato nel grafico del parallelismo (Figura 1), gli estratti di etanolo al 100% e 100% isopropanol non hanno fornito uno spostamento parallelo rispetto allo standard cortisolo. Tuttavia, l'estratto di metanolo 100% ha forn.......

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Discussione

Ci sono una serie di studi che utilizzano una serie di tecniche per rilevare cortisolo nella pelliccia di mammifero. Questo studio presenta i risultati per la rilevazione del cortisolo nella pelliccia raccolta da un koala selvatico esposto allo stress antropogenico corrente. Questo studio innovativo usato pelliccia per testare quale dei tre solventi comunemente utilizzati sono meglio per estrarre cortisolo, una misura di stress cronico, dalla pelliccia koala. I risultati hanno mostrato che il metanolo al 100% era il solv.......

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Ringraziamenti

Questo lavoro è stato sostenuto attraverso finanziamenti di ricerca per le start-up per Edward Narayan attraverso la Western Sydney University, School of Science and Health. Gli autori ringraziano Jack Nakhoul per l'assistenza nell'elaborazione dei campioni.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Provette da centrifugan/an/aPerle
acciaio al cromon/an/a3,2 mm x 3
Kit di cortisoloSaggi ArborK003-H1WProdotto nel Michigan USA
Kit di immunodosaggio enzimatico del cortisolo DetectXSaggi Arbor K003-H5Utilizzato per la prima volta per il test del cortisolo nella pelliccia di koala
Etanolon/an/aIsopropanolo di grado HPLC
n/an/a Metanologrado HPLC
n/an/agrado HPLC
n/an/an/a
setaccio di precisioneda0,5 mm
Radin/an/a Rondella
micropiastreBio Radin/an/a
Agitatore orbitaleBio Linen/an/a Pesatrice
plastica Barcan/an/an/a Sigillante
piastren/an/an/a Bilancia
precisionen/an/a n/a Miscelatore
vorticeEppendorfn/an/a
di da 1,5 mL di Micro pipetta di Bio per per per di a

Riferimenti

  1. Sandhu, H. S., Crossman, N. D., Smith, F. P. Ecosystem services and Australian agricultural enterprises. Ecological Economics. 74, 19-26 (2012).
  2. Martinez-Ramos, M., Ortiz-Rodriguez, I. A., Pinero, D., Dirzo, R., Sarukhan, J.

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Ristampe e permessi

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