Endpoint importanti e marcatori proliferativi per valutare piccole lesioni intestinali e adattamento utilizzando un modello murino di mucosite indotta dalla chemioterapia

Anna Billeschou; Jenna Hunt; Hannelouise Kissow

doi:10.3791/59236

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Articolo metodologico

Endpoint importanti e marcatori proliferativi per valutare piccole lesioni intestinali e adattamento utilizzando un modello murino di mucosite indotta dalla chemioterapia

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DOI:

10.3791/59236

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12 maggio 2019

Anna Billeschou¹ , Jenna Hunt¹ , Hannelouise Kissow¹^,²

¹Department of Biomedical Sciences, Faculty of Health and Medical Sciences, University of Copenhagen, ²Novo Nordisk Foundation Center of Basic Metabolic Research, Faculty of Health and Medical Sciences, University of Copenhagen

In questo articolo

Sommario

Qui, presentiamo un protocollo per stabilire importanti endpoint e marcatori proliferativi di piccole lesioni intestinali e iperproliferazione compensativa utilizzando un modello di mucotisi indotta dalla chemioterapia. Dimostriamo il rilevamento di cellule che proliferano usando un marcatore specifico del ciclo cellulare e usando un piccolo peso intestinale, la profondità della cripta e l'altezza del villus come endpoint.

Abstract

L'adattamento intestinale è il meccanismo compensativo naturale che si verifica quando l'intestino viene perso a causa di un trauma. Le risposte adattive, come la proliferazione delle cellule della cripta e l'aumento dell'assorbimento dei nutrienti, sono fondamentali nel recupero, ma poco comprese. Comprendere il meccanismo molecolare alla base delle risposte adattive è fondamentale per facilitare l'identificazione di sostanze nutritive o farmaci per migliorare l'adattamento. Diversi approcci e modelli sono stati descritti in tutta la letteratura, ma è necessario un modo descrittivo dettagliato per eseguire essenzialmente le procedure per ottenere dati riproducibili. Qui, descriviamo un metodo per stimare endpoint importanti e marcatori proliferativi di piccole lesioni intestinali e iperproliferazione compensativa utilizzando un modello di mucosite indotta dalla chemioterapia nei topi. Dimostriamo il rilevamento di cellule che proliferano usando un marcatore specifico del ciclo cellulare, così come utilizzando un piccolo peso intestinale, la profondità della cripta e l'altezza del villus come endpoint. Alcuni dei passaggi critici all'interno del metodo descritto sono la rimozione e la pesatura dell'intestino tenue e il sistema software piuttosto complesso suggerito per la misurazione di questa tecnica. Questi metodi hanno i vantaggi che non richiedono molto tempo e che sono convenienti e facili da realizzare e misurare.

Introduzione

L'adattamento intestinale è il meccanismo compensativo naturale che si verifica quando l'intestino viene perso a causa di malattia o chirurgia¹^,². Dopo il trauma, l'intestino subisce una risposta adattiva morfometrica e funzionale, caratterizzata da proliferazione delle cellule della cripta e aumento dell'assorbimento dei nutrienti³. Questo passaggio è fondamentale per il ripristino, ma poco compreso. Gli studi sperimentali della risposta adattiva intestinale si sono concentrati sui cambiamenti che si verificano dopo la resezione intestinale in topi, ratti e maiali, ma la comprensione d....