Esempio di metodo di preparazione del microscopio elettronico di scansione e trasmissione per le appendici di Woodboring Beetle

Summary

Per osservare l'ultrastruttura della sensilla degli insetti, nello studio è stata presentata la microscopia elettronica di scansione e trasmissione (rispettivamente SEM e TEM). Tween 20 è stato aggiunto nel fissativo per evitare la deformazione del campione nella microscopia seM.

Abstract

Questo rapporto ha descritto i metodi di preparazione dei campioni che la scansione e le osservazioni al microscopio elettronico a trasmissione, dimostrati preparando le appendici del coleottero legnoso, Chlorophorus caragana Xie & Wang (2012), per entrambi i tipi di microscopia elettronica. Il protocollo di preparazione del campione di microscopia elettronica a scansione (SEM) si è basato sulla fissazione chimica del campione, sulla disidratazione in una serie di bagni di etanolo, sull'essiccazione e sul rivestimento sputter. Aggiungendo Tween 20 (Polyoxyethylene sorbitan laurate) al fissativo e alla soluzione di lavaggio, la superficie del corpo dell'insetto dello scarabeo legnoso è stata lavata in modo più pulito in SEM. La preparazione del campione di microscopia elettronica a trasmissione (TEM) di questo studio ha comportato una serie di passaggi, tra cui fissazione, disidratazione dell'etanolo, incorporamento in resina, posizionamento mediante microscopia a fluorescenza, sezionamento e colorazione. Fissativo con Tween 20 ha permesso di penetrare la parete del corpo degli insetti di coleottero legnoso più facilmente di quanto lo sarebbe stato senza Tween 20, e successivamente tessuti e organi fissi migliori nel corpo, ha quindi prodotto osservazioni chiare al microscopio elettronico delle ultrastrutture della sensilla degli insetti. Il passo successivo di questa preparazione è stato determinare le posizioni della sensilla degli insetti nel campione incorporato nel blocco di resina utilizzando la microscopia a fluorescenza per aumentare la precisione del posizionamento della sensilla bersaglio. Questo ha migliorato la precisione di taglio.

Introduction

La microscopia elettronica a scansione è uno strumento importante in molti studi di morfologia, che SEM mostra le strutture superficiali^1,2. L'appeal della microscopia elettronica a trasmissione è che può essere utilizzata per studiare un'ampia gamma di strutture biologiche su scala nanometrica, dall'architettura delle cellule e l'ultrastruttura degli organelli, alla struttura dei complessi macromolecolari e delle proteine. TEM mostra le strutture interne^3,4,5.

Coleoptera è il più grande gr....

Protocol

INFORMATIVA: Consultare le schede tecniche di sicurezza dei materiali dei reagenti prima di utilizzarle. Molte delle sostanze chimiche utilizzate durante la preparazione del campione sono tossiche, mutageni, cancerogene e/o reprotossiche. Usa dispositivi di protezione personali (guanti, camice da laboratorio, pantaloni a figura intera e scarpe chiuse) e lavora sotto un cofano a fumi mentre maneggia il campione.

1. Preparazione e imaging dei campioni SEM

1. Correzione e pulizia dei campioni
   1. Lavorando in una zona in cui si verifica C. caragana, attirare gli adulti in trappole da campo esche con attrattivi vegetali, com....

Results

Utilizzando la soluzione di pulizia e fissativa con Tween 20, è stata osservata un'immagine SEM più pulita di quella senza Tween 20 (Figura 3). Tween 20 soluzione di fissaggio penetrato la soluzione di fissaggio glutaraldeide nel tessuto. La struttura dei microtubuli è stata chiaramente osservata. L'immagine TEM della struttura interna del campione è stata sfocata senza Tween 20 (Figura 4).

Discussion

In questo articolo, abbiamo presentato uno schema di preparazione dei campioni per la microscopia elettronica di scansione e trasmissione per coleottero che falegname. Utilizzando l'appendice degli insetti come soggetto di studio rappresentativo, abbiamo dimostrato diversi miglioramenti rispetto ai metodi tradizionali di preparazione dei campioni.

L'olio liquido staccato dalla superficie solida viene emulsionato in piccole goccioline, che possono essere ben disperse e sospese nel mezzo di lava.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Lente anatomica	Chongqing Auto Optical società a responsabilità limitata	1425277
Nastro adesivo in carbonio	SPI Supplies, Division of Structure Probes, Inc.	7311
Tetracloruro di carbonio	Sigma	56-23-5
Griglie in rame	GilderGrids	G300
Idrogeno fosfato disodico	Sinopharm group chemical reagent co., LTD	10039-32-4
Etanolo	J.T. Baker	64-17-5
Stampi per inclusione piatti	Hyde Venture (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.	70900
Microscopio a fluorescenza	LEICA	DM2500
Glutaraldeide	Sigma-Aldrich	111-30-8	Anidro
Isoforone	Sigma	78-59-1
Citrato di piombo	Sigma	512-26-5
Metanolo	Sigma	67-56-1
Fosfato di sodio monobasico	Its gruppo reagente chimico co., LTD	7558-80-7
Micrometro obiettivo	Olympus	0-001-034
Tetrossido di osmio	Sigma	541-09-3
Piastra di Petri	Aldrich	1998
Lama di rasoio	Gillette
Resina	Spurr	ERL4221
Bisturi	Lianhui	GB/ T19001-2008
SEM	Hitachi	S-3400
gel di silice essiccante	Suzhou Longhui essiccante Co., Ltd.	112926-00-8
Spazzola piccola	Martol	G1220
Idrossido di sodio	Sigma	1310-73-2
Strumento ionico Sputter	Hitachi Koki Co. Ltd., Tokyo, Giappone	E-1010
Stereomicroscopio	Leica	EZ4 HD
TEM	Hitachi	H-7500
Tween 20	Tianjin Damao Reagente chimico	9005-64-5
Ultramicrotomo	Leica	UC6
Pulitore ad ultrasuoni	GT Sonic	GT-X1
Acetato di uranile	Sigma	6159-44-0