Modello di matrice extracellulare tridimensionale dell'osso per Osteosarcoma

Summary

Il modello di matrice extracellulare (BEM) dell'osso per osteosarcoma (OS) è ben consolidata e mostrato qui. Può essere utilizzato come impalcatura adatta per che imita tumore primario crescita in vitro e fornendo un modello ideale per studiare l'eterogeneità istologica e cytogenic del sistema operativo.

Abstract

Osteosarcoma (OS) è il più comune e un tumore altamente aggressivo e primari dell'osso. È caratterizzato da variazioni anatomiche e istologiche assieme alle difficoltà diagnostica o prognostica. OS comprende cellule tumorali genotipico e fenotipico eterogenea. Elementi del microambiente dell'osso sono dimostrati di account per progressione di malattia e di eterogeneità del tumore. Matrice ossea extracellulare (BEM) conserva le matrici microstrutturali e componenti biochimici della matrice extracellulare nativa. Questa nicchia di tessuto-specifica fornisce un'impalcatura favorevole e a lungo termine per proliferazione e semina cellulare di OS. Questo articolo fornisce un protocollo per la preparazione del modello BEM e la sua ulteriore applicazione sperimentale. Le cellule OS possono crescere e differenziarsi in fenotipi più coerenti con la complessità istopatologica di campioni clinici di OS. Il modello consente inoltre la visualizzazione delle diverse morfologie e la loro associazione con alterazioni genetiche e meccanismi di regolazione sottostante. Come omologo umano OS, questo modello di BEM-OS possa essere sviluppato e applicato alla patologia e ricerca clinica del sistema operativo.

Introduction

Osteosarcoma (OS) si presenta solitamente in zone, le metafisi delle ossa lunghe, in attiva crescita durante l'adolescenza. Più dell'80% dei siti colpiti da OS hanno preferenza per la metafisi della tibia prossimale e Omero prossimale, nonché sia distale e prossimale di femore, corrispondente alla posizione della crescita piastra¹. OS comprende molteplici sottotipi di cellule con proprietà mesenchymal e considerevole diversità nelle caratteristiche istologiche e grado. Evidenze supportano le cellule staminali mesenchimali (MSCs), precursori impegnati osteoblasti e periciti come le cellule di origine^2,

Protocol

Uso e cura degli animali sono condotti secondo l'istituti nazionali di salute Guida per la cura e l'uso di animali da laboratorio (pubblicazione NIH No. 80-23, riveduta nel 1996), previa approvazione del Comitato etica animale di Sun Yat-sen University.

1. osso preparazione

1. Ottenere 4 ai topi BALB/c 6-settimana-vecchio (senza sesso-specifico requisito). Eutanasia di un mouse in modo asettico di dislocazione cervicale e tagliato di fresco perone, tibia e femore da un arto posteriore con forbici chirurgiche sterili. Staccare il tessuto epiteliale e quindi rimuovere tanto del tessuto molle possibili utilizzando forbici e pinzette.

Results

Dopo la demineralizzazione e decellularizzati, BEM sembra essere traslucido con maggiore resilienza e tenacia rispetto all'osso del mouse nativi. Un piccolo residuo di muscolo e lo spazio della cavità midollare può essere osservati chiaramente (Figura 1A, B). Per determinare l'effettiva decellularizzazione di BEM, BEM è inclusi in paraffina dopo la fissazione e quindi tagliata in 3 – 5 μm sezioni per la macchiatura dell'hematoxylin-eosina (H & E). La rimozione completa d.......

Discussion

In generale, OS possono essere classificati come osteoblastica, chondroblastic e fibroblastic i sottotipi a seconda della sua dominante componente istologica. Relativa prognosi dipende non solo dai parametri istologici ma anche sul suo sito anatomico. Può verificarsi all'interno delle ossa (nel intramidollare o vano intracortical), sulle superfici delle ossa e in siti extraosseous¹⁹. L'emersione e l'eterogeneità del sistema operativo può essere delucidate come una coniugazione di eventi oncogenici .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Provetta da centrifuga da 15 mL	Greiner	188271
Provetta da centrifuga da 50 mL	Greiner	227270
Piastra per coltura cellulare da 6 cm	Greiner	628160
Piastra a 6 pozzetti	Greiner	657160
Ampicillina	Sigma-Aldrich	A9393
C57-BL/6J topo	Sun Yat-sen Laboratorio universitario Centro
CO2 incubatore	SHEL LAB	SCO5A
Fosfato di sodio bibasico	Guangzhou Chemical Reagent Factory	BE14-GR-500G
DMEM/F12	Sigma-Aldrich	D0547
Siero fetale bovino	Hyclone	SH30084.03
Emocitometro	BLAU	717805
Kanamicina	Sigma-Aldrich	PHR1487
MG-63	Accademia cinese delle scienze, Banca		Linea cellulare di osteosarcoma umano
MNNG/HOS	Accademia cinese delle scienze, Banca		Linea cellulare di osteosarcoma umano
Fenolo rosso	Sigma-Aldrich	P4633	Una soluzione di rosso fenolo viene utilizzata come indicatore di pH: il suo colore mostra una transizione graduale dal giallo al rosso nell'intervallo di pH da 6,6 a 8,0.
Cloruro di potassio	Sangon Biotech	A100395
Fosfato di potassio monobasico	Sangon Biotech	A501211
Cloruro di sodio	Sangon Biotech	A501218