Qui, presentiamo un protocollo per valutare il risultato dell'applicazione di luce rossa sulla crescita di biofilm di Candida albicans . Un dispositivo di luce rossa non coerente con la lunghezza d'onda di 635 nm e densità di energia di 87,6 J·cm-2 è stato applicato durante la crescita di Candida albicans biofilm per 48 h.
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Articolo metodologico
Quotidiano fototerapia con luce rossa per sviluppo di Biofilm di regolare dei albicans del Candida
In questo articolo
Sommario
Abstract
Qui, presentiamo un protocollo per valutare gli esiti della diaria di luce rossa trattamento sulla crescita di biofilm di Candida albicans . Per aumentare la crescita planctonica di albicans del c. SN425, gli Inoculanti è cresciuto il lievito azoto Base media. Per la formazione di biofilm, RPMI 1640 media, che hanno alte concentrazioni di aminoacidi, sono state applicate per aiutare la crescita di biofilm. Biofilm di 48 h sono stati curati due volte al giorno per un periodo di 1 min con un dispositivo di luce non coerente (luce rossa; lunghezza d'onda = 635 nm; densità di energia = 87,6 J·cm-2). Come controllo positivo (PC), 0,12% clorexidina (CHX) è stato applicato e come controllo negativo (NC), 0,89% NaCl è stato applicato il biofilm. Unità formanti colonia (UFC), a secco-peso, solubili e insolubili esopolisaccaridi sono stati quantificati dopo i trattamenti. In breve, il protocollo presentato qui è semplice, riproducibile e fornisce risposte per quanto riguarda la redditività, gli importi di polisaccaride extracellulare e di peso a secco dopo trattamento luce rossa.
Introduzione
L'aumentata incidenza di diabete, terapia immunosopressiva applicazioni, l'infezione da HIV, epidemia di AIDS, procedure cliniche invasive e consumo di antibiotici ad ampio spettro, negli ultimi anni hanno aumentato l'incidenza di Candida albicans correlate a malattie1,2. Infezioni da c. albicans sono comunemente legati allo sviluppo di biofilm e può causare manifestazioni cliniche, quali la candidosi, o manifestazioni sistemiche, quali candidemia1,2. Uno dei fattori di virulenza più degno di nota della crescita di biofilm è l'istituz....
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Protocollo
1. preparazione di terreni di coltura
- Preparare il sabouraud agar destrosio (SDA). Sospendere 65g di SDA completato con cloramfenicolo (50 mg/L) in 1000 mL di acqua distillata. Far bollire per sciogliere completamente il mezzo. Sterilizzare in autoclave a 15 PSI (121° C) per 30 min. raffreddare a 45-50 ° C. Mescolare bene e versare 20 mL di SDA in piastre di Petri sterili (dimensioni: 100 x 15 mm).
- Preparare il lievito azoto base (YNB) supplementato con 100 millimetri di glucosio mescolando 6,7 g di YNB e 18 g di destrosio a 1.000 mL di acqua ultrapura. Mescolare con un agitatore e sterilizzare il mezzo utilizzando un sistema di vuoto filtro da 0,2....
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Risultati
Figura 2 Visualizza i risultati del registro10 CFU/mL di albicans del c. dopo trattamenti diaria con luce rossa per 1 min. luce rossa ha ridotto significativamente il Log10 UFC/mL rispetto al CN (p = 0,004). Figura 3 presenta i risultati della biomassa (mg) di c. albicans biofilms dopo trattamenti giornalieri. Tutti i gruppi hanno mostrati riduzione della biomassa rispetto al CN curati (p =.......
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Discussione
I passaggi più critici per la coltura di successo del biofilm di albicans del c. sono: 1) per fare il pre-inoculo e l'inoculo in mezzo YNB completato con 100 millimetri di glucosio; 2) ad aspettare 90 min per la fase di adesione e lavare accuratamente due volte i pozzetti con 0.89% NaCl per rimuovere le cellule non rispettato; e 3) per aggiungere il terreno RPMI alle cellule aderite per avviare la formazione di biofilm, poiché RPMI stimolerà la crescita di ife. Aneuploidi possono verificarsi quando la coltura di.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Ringraziamenti
Ringraziamo il Dr. Paula da Silveira, Dr. Cecília Atem Gonçalves de Araújo Costa, Shawn M. Maule, Shane M. Maule, Dr. N. Malvin Janal e Dr. Iriana Zanin per lo sviluppo di questo studio. Riconosciamo anche il Dr. Alexander D. Johnson (UCSF) per donare il ceppo analizzato in questo studio.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Cloresidina 20% | Sigma-Aldrich | C9394 | |
| Destrosio (D-glucosio) Anidro | Fisher Chemical | D16-500 | |
| Etanolo 200 proof | Decon Laboratories | DSP-MD.43 | |
| LumaCare LC-122 A | Gruppo medico LumaCare, Newport Beach, CA, Stati Uniti | ||
| NaCl | Fisher Chemical | S641-500 | |
| NaOH | Fisher Bioreagenti | BP 359-500 | |
| Fenolo 5% | Milipore Sigma | 843984 | |
| RPMI 1640 tamponato con 3-(N-morfinolino) | Sigma | R7755 | |
| Sabouraud destrosio agar integrato con cloramfenicolo | Acumedia | 7306A | |
| Acido solforico | Fisher Chemical | SA200-1 | |
| Lievito a base di azoto | Difco | DF0392-15-9 | |
| acido 3-(N-morfolino)propansolfonico MOPS | Sigma-Aldrich | M1254 | |
| Piastra in polistirene a 24 pozzetti | Falcon | 353935 |
Riferimenti
- Sardi, J. C. O., Scorzoni, L., Bernardi, T., Fusco-Almeida, A. M., Mendes Giannini, J. M. Candida species: current epidemiology, pathogenicity, biofilm formation, natural antifungal products and new therapeutic options. Journal of Medical Microbiology. 62 (Pt 1), 10-24 (2013).
- Harriott, M. M., Noverr, M. C.
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Ristampe e permessi
