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Articolo metodologico

Un modello di cancro endometriale ortotopico con retroperitoneale Lmphadenopatia fatta da cellule VX2 in vivo propagate e coltivate

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DOI:

10.3791/59340

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12 settembre 2019

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In questo articolo

Sommario

Questo protocollo presenta un metodo standardizzato per far crescere le cellule VX2 in coltura e per creare un modello ortotopico VX2 di cancro endometriale con metastasi di linfonodi retroperitoneali nei conigli. I modelli di cancro endometriali ortotopici sono importanti per lo studio preclinico di nuove modalità di imaging per la diagnosi delle metastasi dei linfonodi.

Abstract

Il cancro dell'endometrio è la malignità ginecologica più comune in Nord America e l'incidenza è in aumento in tutto il mondo. Il trattamento consiste in un intervento chirurgico con o senza terapia adiuvante a seconda del coinvolgimento del linfonodo determinato dalla linfadenectomia. La linfodenectomia è una procedura morbosa, che non è stata dimostrata avere un beneficio terapeutico in molti pazienti, e quindi è necessario un nuovo metodo per diagnosticare le metastasi dei linfonodi. Per testare nuovi agenti di imaging, è necessario un modello affidabile di cancro endometriale con metastasi di linfonodi retroperitoneali. Il modello di cancro endometriale VX2 è stato descritto frequentemente nella letteratura; tuttavia, esiste una variazione significativa rispetto al metodo di stabilimento del modello. Inoltre, non sono stati riportati studi sull'uso di cellule VX2 coltivate per creare questo modello in quanto solo le cellule propagate in vivo sono state utilizzate in precedenza. Qui, vi presentiamo un metodo chirurgico standardizzato e un metodo di monitoraggio post-operatorio per la creazione del modello di cancro endometriale VX2 e riferiamo sul primo utilizzo di cellule VX2 coltivate per creare questo modello.

Introduzione

Il cancro dell'endometrio, o cancro del rivestimento dell'utero, è la seconda malignità ginecologica più comune al mondo e la malignità più comune nelle nazioni sviluppate1. L'incidenza del cancro endometriale è aumentata costantemente, aumentando del 2,3% all'anno tra il 2005 e il 2013 con un corrispondente aumento del 2,2% della mortalità1,2,3. La diagnosi delle metastasi dei linfonodi è fondamentale in quanto la presenza di linfonodi positivi è un forte predittore negativo di sopravvivenza4,5

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Protocollo

Chiusura profonda della parete addominale: Identificare l'apice dell'incisione peritoneale e afferrare il peritoneo, il muscolo retto e la forza del tessuto della fascia. Tutti gli studi sugli animali sono stati condotti nelle strutture approvate dall'Animal Resource Center (ARC) dell'University Health Network e in conformità con i protocolli approvati per l'uso e la cura degli animali (AUP #3994/#4299). La linea cellulare VX2 è stata ottenuta dal Dr. Aken's Lab presso l'University Health Network.

1. Creazione della linea cellulare VX2 in vitro

  1. Raccogliere il tumore VX2 dal muscolo quadricep coniglio e la crescita nel fianco del t....

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Risultati

Ventotto conigli sono stati utilizzati per la creazione del modello di cancro dell'endometriale. I conigli avevano un peso medio di 2,83 kg (2,71-3,58 kg) al momento dell'esperimento. I tumori uterini sono cresciuti con successo in 21 conigli per un tasso di successo generale del modello del 75%. Prima dell'inclusione della sutura uterina nel protocollo, il tasso di successo era del 57% rispetto all'81% dopo l'aggiunta della sutura uterina. La sutura uterina è stata aggiunta al protocollo.......

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Discussione

Qui, abbiamo segnalato un metodo chirurgico standardizzato per la creazione di un modello di cancro dell'endometrio VX2 e riportato sul primo uso di cellule VX2 coltivate per creare questo modello. Il tumore prendere tasso di 75% è inferiore al 100% percentuale tasso precedentemente riportato nella letteratura35,37,53,56; tuttavia, il tasso del 90% di metastasi di linfonodi patologicamente conf.......

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Ringraziamenti

Questo studio è stato finanziato dal Terry Fox Research Institute (PPG-1075), dal Canadian Institute of Health Research (Foundation Grant #154326), dal Canadian Cancer Society Research Institute (704718), dal Natural Sciences and Engineering Research Council del Canada, Fondazione per l'Innovazione e Principessa Margaret Cancer Foundation.

Vorrei ringraziare il Dr. Marguerite Akens per aver fornito le cellule VX2 iniziali per la creazione del modello VX2 iniziale e i blocchi tumorali VX2 congelati. Vorrei ringraziare Marco DiGrappa per aver contribuito a eseguire esperimenti iniziali di coltura cellulare VX2 e Lili Ding per aver contribuito....

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Bisturi a 11 lame, sterile, monousoAspen Surgical (VWR)80094-086
Catetere venoso auricolare a 22 gagheCDMV14332
Sutura in polifilamento assorbibile 3-0 3-0 (Polysorb)Sutura assorbibile intrecciata Covidien356718
3-0 (Polysorb)cellulare Covidien356718
70uM, Confezionato singolarmente, NylonFalcon352350
Acepromazina (Atravet)CDMV1047
Sapone Betadine (Poviodone iodio 7,5%)CDMV4363
Soluzione Betadine (Poviodone iodio 10%)UHN Stores457955
BuprenorphineMcGill University
CefazolinUHN farmacia ospedalieraNo Cat # Needed
Soluzione di clorexidinaCDMV119872
Corning BioCoatCellware, Collagene di tipo I, piastre da 100 mmMarca Corning354450non importante
Corning BioCoatCellware, Collagene di tipo I, piastre a 24 pozzettiMarca Corning354408non importante
Corning BioCoatCellware, Collagene di tipo I, piastre a 6 pozzettiMarca Corning354400no importante
Corning Matrigel Basement Membrane Matrix, *LDEV-free, 10 mLCorning354234
DMEM/HAM F12 1:1Life Technologies11320marca non importante
DMSOCaledon Lab Chem1/10/4100
Enrofloxacina (Baytril iniettabile)CDMV11242
Falcon TubeCorning Centri-Star430828
Siero fetale bovino, qualificato, origine canadese, 500 mlLife Technologies12483020marca/fonte non importante
IsofluranoUHN farmacia ospedalieraNo Cat # Necessario
Contrasto isoesoloGE Healthcare407141210
Meloxicam (Metacam 0,5%)CDMV104674
Normal SalineHouse Brand (UofT Medstore)1011
PBSMulticell o Sigma331-010-CL o D8537-500mL
Penicillina/Streptomicina (100mL; 10000U Penicillina, 10000ug Streptomicina)Corning-CellgroCA45000-652
Soluzione salina bilanciata sterile per matasse (-Ca++, -Mg++, -Rosso fenolo)T.C.M.F (Dr Bristow)28-Gen-11
Colla chirurgica (adesivo per tessuti)3M Vetbond14695B
Tripsina (0,25%), Grado di proteomicaSigmaT-6567-5X20UG
Tripsina-EDTA, 0,05%, 100mlWisent Inc325-542-ELmarca non importante
Colino

Riferimenti

  1. Ferlay, J., et al. Cancer incidence and mortality worldwide: Sources, methods and major patterns in GLOBOCAN 2012. International Journal of Cancer. 136, E359-E386 (2015).
  2. Canada, S. Canadian Cancer Statistics Special topic: Pancreatic canc....

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Ristampe e permessi

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