Isolamento e quantificazione del virus zika da più organi in un mouse

James  D. Brien; Mariah Hassert; E. Taylor Stone; Elizabeth Geerling; Lillian Cruz-Orengo; Amelia K. Pinto

doi:10.3791/59632

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Articolo metodologico

Isolamento e quantificazione del virus zika da più organi in un mouse

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DOI:

10.3791/59632

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15 agosto 2019

James D. Brien^*¹ , Mariah Hassert^*¹ , E. Taylor Stone¹ , Elizabeth Geerling¹ , Lillian Cruz-Orengo² , Amelia K. Pinto¹

¹Department of Molecular Microbiology and Immunology, Saint Louis University, ²School of Veterinary Medicine University of California Davis

^* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

L'obiettivo del protocollo è quello di dimostrare le tecniche utilizzate per studiare la malattia virale isolando e quantificando il virus zoika, da più organi in un topo dopo l'infezione.

Abstract

I metodi presentati dimostrano le procedure di laboratorio per l'isolamento degli organi dagli animali infetti dal virus zika e la quantificazione del carico virale. Lo scopo della procedura è quello di quantificare i dispositivi virali nelle aree periferiche e del SNC del topo in diversi momenti dopo l'infezione o in diverse condizioni sperimentali per identificare i fattori virologici e immunologici che regolano l'infezione da virus zika. Le procedure di isolamento degli organi dimostrate consentono sia la quantificazione del saggio che la valutazione quantitativa della PCR dei titer virali. Le tecniche di isolamento rapido degli organi sono progettate per la conservazione del titro del virus. La quantificazione del titro virale per messa a fuoco formando il saggio consente la rapida valutazione della produttività del virus . Il vantaggio della formazione di analisi di fuoco è la valutazione del virus infettivo, la limitazione di questo saggio è il potenziale per la tossicità degli organi riducendo il limite di rilevamento. La valutazione del titro virale è combinata con la PCR quantitativa e l'utilizzo di un numero di copia virale del genoma del controllo dell'RNA ricombinante all'interno dell'organo viene valutato con un basso limite di rilevamento. Nel complesso, queste tecniche forniscono un metodo rapido ed accurato ad alto throughput rapido per l'analisi dei titoli virali di zika nella periferia e del SNC degli animali infetti del virus zika e possono essere applicati alla valutazione dei titoli virali negli organi degli animali infetti con la maggior parte agenti patogeni, tra cui il virus Dengue.

Introduzione

Il virus del virus zika è un arbovirus appartenente alla famiglia flaviviridae, che comprende importanti patogeni umani neuroinvasivi come il virus Powassan (POWV), il virus dell'encefalite giapponese (JEV) e il virus del Nilo occidentale (WNV)¹. A seguito del suo isolamento e della sua identificazione, sonostati periodici rapporti periodici di infezioni umane in Africa e Asia 2,³^,⁴^,^5,ed epidemie all'interno dell'America centrale e meridionale (riviste in riferimento⁶). Tuttavia, non è stato fi....