Qui, presentiamo protocolli di coltura del legamento parontale umano (PDL) sferoidi cellulari da pellicole chitosane. La coltura degli sferoidi cellulari tridimensionali (3D) fornisce un'alternativa al sistema di coltura del polistirolo (TCPS) della coltura dei tessuti convenzionale.
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Articolo metodologico
Formazione di spheroidcellule a celle di legamento parontale umano su Chitosan Films
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
Le cellule del legamento parodontale (PDL) sono molto promettenti per la rigenerazione del tessuto parodontale. Convenzionalmente, le cellule PDL sono coltivate su substrati bidimensionali (2D) come il polistirolo di coltura dei tessuti (TCPS). Tuttavia, sono stati osservati cambiamenti caratteristici delle cellule PDL durante la coltura in vitro. Questo fenomeno è probabilmente dovuto al fatto che il TCPS 2D differisce dal microambiente tridimensionale in vivo (3D). Rispetto alle cellule coltivate su substrati 2D, le cellule coltivate in un microambiente 3D presentano maggiori somiglianze con le cellule in vivo. Pertanto, i modelli di coltura cellulare 3D forniscono un'alternativa promettente per la coltura cellulare monostrato 2D convenzionale. Per migliorare i modelli convenzionali di coltura cellulare PDL, abbiamo recentemente sviluppato un metodo di coltura cellulare 3D, che si basa sulla formazione di sferoidi delle cellule PDL su pellicole chitosane. Qui, presentiamo protocolli dettagliati di coltura sferoide cellulare basati su pellicole chitosane. Il sistema di coltura 3D degli sferoidi cellulari PDL supera alcune delle limitazioni legate alla coltura convenzionale delle cellule monostrato 2D, e quindi può essere adatto per produrre cellule PDL con una maggiore efficacia terapeutica per la futura rigenerazione dei tessuti parodontali.
Introduzione
La parodontite, inizializzataprincipalmente dalla placca dentale 1, è caratterizzata dal danno dei tessuti parodontali tra cui legamento parontale (PDL), osso alveolar e cementum. Gli attuali trattamenti per la parodontite di solito riescono a prevenire il progresso della malattia attiva, ma la rigenerazione dei tessuti parodontali perduti rimane una sfida clinica. Recentemente, sono stati compiuti importanti progressi negli approcci basati sulle cellule per la rigenerazione del tessuto parodontale per superare gli inconvenienti dei trattamenti attuali2,3,4<....
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Protocollo
Il protocollo di studio è stato approvato dal Comitato Etico della Scuola e Ospedale di Stomatologia, Università di Tongji. Tutti i pazienti hanno fornito il consenso informato scritto.
1. Isolamento delle celle PDL
- Rendere il mezzo di proliferazione per la coltura delle cellule PDL: mezzo di z-MEM integrato con 10% FCS e 100 U/mL penna/strep.
- Preparare un contenitore con ghiaccio per trasferire i terzi molari isolati.
- Sterilizzare gli strumenti chirurgici utilizzando un'autoclave.
- Estrarre il normale impatto umano terzo molare da adulti (18-28 anni di età) presso la Clinica Dentale di Scuola e Ospeda....
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Risultati
Utilizzando l'attuale protocollo, sono stati formati con successo sferoidi cellulari PDL. La figura 1 ha mostrato che le cellule sospese o gli sferoidi invece delle cellule attaccate sono stati osservati principalmente sulle pellicole chitosane. Per la densità di semina di 0,5 x 104 cellule/cm2,le cellule PDL collegate sono state occasionalmente trovate il giorno 1 e 3, e gli sferoidi delle cellule PDL sono stati raramente osservati. Al .......
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Discussione
Il presente studio ha introdotto un sistema di coltura cellulare 3D per superare alcune limitazioni legate alla coltura convenzionale delle cellule monostrato 2D. Secondo il protocollo, gli sferoidi cellulari PDL sono stati formati con successo culcolando le cellule sui film chitosani. Il nostro studio precedente ha riferito che la formazione di sferoidi ha aumentato l'auto-rinnovamento e le capacità di differenziazione osteogenica delle cellule PDL14. Invece di utilizzare un enzima per raccoglier.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Questo studio è stato sponsorizzato dalla National Natural Science Foundation of China (NSFC 81700978), dai Fondi di Ricerca Fondamentali per le Università Centrali (1504219050), dalla Natural Science Foundation di Shanghai (17-R1432800) e dal Shanghai Medical Exploration Project ( 17411972600).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| α-MEM | Gibco | 11900-073 | |
| acido acetico | Sigma-Aldrich | 64197 | |
| Pallone per colture cellulari 25 cm2 | Corning | 430639 | |
| Pallone per colture cellulari 75 cm2 | Corning | 430641 | |
| Chitosan | Heppe Medical Chitosan GmbH | / | peso molecolare 500 kDa, grado di deacetilazione 85% |
| FCS | Gibco | 26140-079 | |
| Kit di vitalità/citotossicità viva/morto | molecolare Sonde | L3224 | |
| NaOH | Sigma-Aldrich | 1310732 | |
| PBS | KeyGen Biotech | ||
| penna/streptococco | Gibco | 15140-122 | |
| Tripsina/EDTA | KeyGen Biotech | ||
| 15 mL provetta da centrifuga conica | Corning | 430790 | |
| piastra a 24 pozzetti | Corning | 3524 |
Riferimenti
- Albandar, J. M. Epidemiology and risk factors of periodontal diseases. Dental Clinics of North America. 49 (3), 517-532 (2005).
- Bartold, P. M., McCulloch, C. A., Narayanan, A. S., Pitaru, S. Tissue engineering: a new paradigm for periodo....
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Ristampe e permessi
