L'analisi di tick emolinfa rappresenta un'importante fonte di informazioni su come alcuni patogeni causano malattie e come le zecche rispondono immunologicamente a questa infezione. Il presente studio dimostra come inoculare propagule fungine e raccogliere emolinfa da Rhipicephalus MicroPlus femmine gonfio.
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Articolo metodologico
Rivelare la raccolta di hemolymph e l'inoculo di Metarhizium blastospores in Rhipicephalus MicroPlus zecche verso gli studi di patologia degli invertebrati
In questo articolo
Sommario
Abstract
Le zecche sono ectoparassiti ematophagous obbligate e Rhipicephalus MicroPlus ha grande importanza nella medicina veterinaria perché provoca anemia, perdita di peso, deprezzamento della pelle degli animali e può anche fungere da vettore di diversi agenti patogeni. A causa dei costi esorbitanti per controllare questi parassiti, danni all'ambiente causati dall'uso improprio di acaricidi chimici, e la maggiore resistenza contro i parassiticidi tradizionali, il controllo alternativo delle zecche, con l'uso di funghi entomopatogeni, ad esempio, è stato considerato un approccio interessante. Tuttavia, pochi studi hanno dimostrato come il sistema immunitario del tick agisce per combattere questi entomopatogeni. Pertanto, questo protocollo dimostra due metodi utilizzati per l'inoculo entomopatogeno in femmine gonfio e due tecniche utilizzate per la raccolta di emolinfa e emociti raccolta. L'inoculo degli agenti patogeni all'inserimento delle gambe nel corpo della femmina di zecca consente la valutazione dei parametri biologici delle femmine a differenza dell'inoculo tra lo scutum e il capitulum, che danneggia frequentemente l'organo di Gené. La collezione di emolinfa dorsali ha prodotto un recupero di volume superiore rispetto alla raccolta attraverso le gambe. Alcune limitazioni di tick emolinfa raccolta ed elaborazione includono i) alti tassi di perturbazione degli emociti, II) contaminazione emolitiche con midgut interrotto, e III) recupero di volume di emolymph basso. Quando l'emolitia viene raccolta attraverso il taglio delle gambe, l'emolitico richiede tempo per accumularsi all'apertura della gamba, favorendo il processo di coagulazione. Inoltre, un minor numero di emociti si ottiene nella raccolta attraverso la gamba rispetto alla raccolta dorsale, anche se il primo metodo è considerato più facile da eseguire. Comprendere la risposta immunitaria nelle zecche mediate da agenti entomopatogeni aiuta a svelare la loro patogenesi e a sviluppare nuovi bersagli per il controllo delle zecche. I processi di inoculo qui descritti richiedono risorse tecnologiche molto basse e possono essere utilizzati non solo per esporre le zecche a microrganismi patogeni. Analogamente, la raccolta di tick emolinfa può rappresentare il primo passo per molti studi fisiologici.
Introduzione
La zecca del bestiame, Rhipicephalus MicroPlus, è un ematofago ectoparassite con un enorme impatto negativo sul bestiame nelle zone tropicali. Questo tick è il vettore di agenti patogeni come Babesia bovis, Babesia bigemina, e Anaplasma marginale che, combinato con il danno emofeeding diretto, può ridurre il latte e la produzione di carne, causare anemia e, infine, la morte. Le perdite causate da questo ectoparassite sono state stimate in 3,24 miliardi dollari all'anno in Brasile1. Sono richiesti metodi sostenibili e l'uso di agenti entomopatogeni è considerato un'alternativa promettente per ridurre l'uso di ....
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Protocollo
Le zecche utilizzate nel presente studio sono state ottenute da una colonia artificiale, mantenuto presso l'Università rurale federale di Rio de Janeiro, quali metodi sono stati approvati dalla Commissione per l'etica per l'uso di animali vertebrati (CEUA-IV/UFRRJ #037/2014).
1. Tick femmine inghiottite
- Dopo la raccolta di tick, lavare le femmine inghiottite utilizzando acqua di rubinetto e immergerli in 0,5% (v/v) soluzione di ipoclorito di sodio per 3 minuti in un 500 mL bicchiere di vetro ricevente, per l'igiene cuticola (Figura 1), quindi asciugare tutte le femmine utilizzando asciugamani di carta....
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Risultati
Questo articolo si avvicina metodi di raccolta di inoculo e emolinfa applicati alle zecche. Dopo l'inoculo tra la coscia della gamba e il corpo della femmina di zecca, alcuni fluidi (emolymph) possono essere seccato durante il processo; Tuttavia, è importante notare che quando l'inoculo è terminato, non sono stati presenti liquidi o tessuti nella punta dell'ago o nel sito di inoculo, assicurando che la sospensione fungina sia stata completamente inoculata. Quando il processo di inoculo è .......
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Discussione
L'inoculo dei patogeni è utile quando lo studio mira a indagare l'azione in vivo dei microrganismi nei modelli sperimentali di artropodi perché assicura che l'agente patogeno sia all'interno dell'ospite. La tecnica può essere applicata anche a molecole inoculare come l'interferenza dell'RNA (RNAi). L'inoculo tra lo scutum e il Capitulum è considerato più facile da eseguire ma spesso danneggia l'organo di Gené, compromettendo la vitalità delle uova12,13. Organo di.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Questo studio è stato finanziato in parte dal Coordenacão de aperfeiçoamento de pessoal de nível Superior (CAPES) dal Brasile, finanza Codice 001. CAPES ha fornito il dottorato di studio per A.F. Marciano. Ringraziamo il Consiglio nazionale per lo sviluppo scientifico e tecnologico (CNPq) del Brasile per aver fornito il dottorato di ricerca per J. Fiorotti. Questa ricerca è stata sostenuta anche da sovvenzioni della Fondazione Carlos Chagas Filho per la ricerca dello stato di Rio de Janeiro (FAPERJ) e CNPq. V.R.E.P. Bittencourt è un ricercatore CNPq.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Soluzione alcalina di ipoclorito | Sigma-Aldrich | A1727 | |
| D-(+)-Glucosio | Sigma-Aldrich | G8270-1KG | |
| EDTA | Synth | 2706 | |
| Siero fetale bovino | Gibco | 16000036 | |
| Gomma flessibile | BD | ||
| Giemsa colorante | Sigma-Aldrich | 48900-500ML-F | |
| Capillare in vetro | CTechGlass | CT95-02 | |
| Siringa da insulina (ago) | BD | SKU: 324910 | |
| KH2PO4 | Vetec | 60REAVET014512 | |
| Terreno di coltura L-15 di Leibovitz | Gibco | 11415-064 | |
| Metanolo | Sigma-Aldrich | 34860-1L-R | |
| Vetrini per microscopio | Kasvi | K5-7105 | |
| Microprovette | MARCA | Z336769-1PAK | |
| Na2HPO4 | Vetec | 60REAVET014593 | |
| NaCl | Sigma-Aldrich | S7653-1KG | |
| Camera di Neubauer | Kasvi | K5-0111 | |
| Penicillina | Gibco | 15140163 | |
| Cocktail di inibitori della proteasi | Sigma-Aldrich | P2714 | |
| Tween 80 | Vetec | 60REAVET003662 |
Riferimenti
- Grisi, L., et al. Reassessment of the potencial economic impact of cattle parasites in Brazil. Revista Brasileira de Parasitologia Veterinária. 23 (2), 150-156 (2014).
- Schrank, A., Vainstein, M. H. Metarhizium anisopliae enzymes and toxins. Toxicon<....
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Ristampe e permessi
