Articolo metodologico
Questo protocollo utilizzava un sistema miografo a pressione disponibile in commercio per eseguire test miografici di pressione sulla vagina murina e sulla cervice. Utilizzando i media con e senza calcio, i contributi del tono basale delle cellule muscolari lisce (SMC) e della matrice extracellulare passiva (ECM) sono stati isolati per gli organi in condizioni fisiologiche stimate.
Gli organi riproduttivi femminili, in particolare la vagina e la cervice, sono composti da vari componenti cellulari e da una matrice extracellulare unica (ECM). Le cellule muscolari lisce presentano una funzione contrattile all'interno delle pareti vaginali e cervicali. A seconda dell'ambiente biochimico e della distensione meccanica delle pareti dell'organo, le cellule muscolari lisce alterano le condizioni contrattili. Il contributo delle cellule muscolari lisce in condizioni fisiologiche al basale è classificato come un tono basale. Più specificamente, un tono basale è la costrizione parziale della linea di base delle cellule muscolari lisce in assenza di stimolazione ormonale e neurale. Inoltre, l'ECM fornisce supporto strutturale per le pareti degli organi e funziona come serbatoio per segnali biochimici. Questi segnali biochimici sono vitali per varie funzioni degli organi, come incitare la crescita e mantenere l'omeostasi. L'ECM di ogni organo è composto principalmente da fibre di collagene (per lo più tipi di collagene I, III e V), fibre elastiche e glicosaminoglicani/proteoglicani. La composizione e l'organizzazione dell'ECM dettano le proprietà meccaniche di ogni organo. Un cambiamento nella composizione ECM può portare allo sviluppo di patologie riproduttive, come prolasso dell'organo pelvico o rimodellamento cervicale prematuro. Inoltre, i cambiamenti nella microstruttura e rigidità dell'ECM possono alterare l'attività delle cellule muscolari lisce e il fenotipo, con conseguente perdita della forza contrattile.
In questo lavoro, i protocolli riportati vengono utilizzati per valutare il tono basale e le proprietà meccaniche passive della vagina murina non incinta e della cervice a 4-6 mesi di età in estro. Gli organi sono stati montati in un miografo a pressione disponibile in commercio ed è stato eseguito sia il diametro della pressione che i test di lunghezza della forza. Sono inclusi dati di esempio e tecniche di analisi dei dati per la caratterizzazione meccanica degli organi riproduttivi. Tali informazioni possono essere utili per la costruzione di modelli matematici e per progettare razionalmente interventi terapeutici per le patologie della salute delle donne.
La parete vaginale è composta da quattro strati, l'epitelio, la mina propria, muscularis, e l'avvento. L'epitelio è composto principalmente da cellule epiteliali. La propriala ha una grande quantità di fibre di collagene elastico e fibrillare. Il muscolo è anche composto da elastina e fibre di collagene, ma ha una maggiore quantità di cellule muscolari lisce. L'avventtia è costituita da elastina, collagene e fibroblasti, anche se in concentrazioni ridotte rispetto agli strati precedenti. Le cellule muscolari lisce sono di interesse per i gruppi di ricerca motivati biomeccanicamente in quanto svolgono un ruolo nella natura contrattile degli organi. Come tale, quantific....
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Nulliparous 4-6 mesi trici C57BL6J topi (29.4 - 6.8 grammi) a estrus sono stati utilizzati per questo studio. Tutte le procedure sono state approvate dall'Institute Animal Care and Use Committee della Tulane University. Dopo la consegna, i topi si sono acclimatati per una settimana prima dell'eutanasia e sono stati alloggiati in condizioni standard (cicli di luce/buio di 12 ore).
1. Sacrificio del topo a estrus
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Un'analisi efficace delle proprietà meccaniche degli organi riproduttivi femminili è subordinata a dissezione, cannolazione e test dell'organo appropriato. È imperativo espiantare le corna uterine alla vagina senza difetti (Figura 1). A seconda del tipo di organo, la dimensione della cannula varierà (Figura 2). La canonazione deve essere fatta in modo che l'organo non possa muoversi durante l'esperimento, ma non danneggiare anche la parete dell'organo durante la procedur.......
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Il protocollo fornito in questo articolo presenta un metodo per determinare le proprietà meccaniche della vagina murina e della cervice. Le proprietà meccaniche analizzate in questo protocollo includono sia le condizioni di tono passivo che basale degli organi. Le condizioni di tono passivo e basale sono indotte alterando l'ambiente biochimico in cui l'organo è sommerso. Per questo protocollo, i media coinvolti nei test basali contengono calcio. Testare la condizione del tono basale permette l'isolamento del contributo m.......
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Il lavoro è stato finanziato dalla borsa di #1751050 di premiazione NSF CAREER.
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| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Catetere 2F | Millar | SPR-320 | per misurare la pressione cervicale |
| 6-0 Sutura | Fine Science Tools | 18020-60 | lacci di sutura più grandi |
| CaCl2 (anidro) | VWR | 97062-590 | Concentrazione HBSS: 140 mg/ mL |
| CaCl2-2H20 | Fischer chimico | BDH9224-1KG | br/> Concentrazione KRB: 3,68 g/L |
| Destrosio (D-glucosio | )VWR | 101172-434 | Concentrazione HBSS: 1000 mg/mL Concentrazione KRB: 19,8 g/ |
| L Dumont #5/45 Forcipe | Fine Science Tools | 11251-35 | pinza curva |
| Dumont SS Forcipe | Fine Science Tools | 11203-25 | pinza diritta |
| Eclipse | Nikon | E200 | microscopio utilizzato per l'imaging |
| Misuratore di portata | danese MyoTechnologies | 161FM | all'interno dell'apparecchiatura di prova |
| Trasduttore di forza - 110P | Trasduttore di forza danese MyoTechnologies | 100079 | |
| ImageJ | SciJava | ImageJ1 | utilizzato per misurare il volume |
| Custodie per strumenti | Fine Science Tools | 20830-00 | involucro per contenere strumenti di dissezione |
| KCl | Fisher Chemical | 97061-566 | Concentrazione HBSS: 400 mg/ mL Concentrazione KRB: 3,5 g/L |
| KH2PO4 | G-Biosciences | 71003-454 | Concentrazione HBSS: 60 mg/ mL |
| MgCl2 | VWR | 97064-150 | Concentrazione KRB: 1,14 g/L |
| MgCl2-6H2O | VWR | BDH9244-500G | Concentrazione HBSS: 100 mg/ mL |
| MgSO4-7H20 | VWR | 97062-134 | Concentrazione HBSS: 48 mg/ mL |
| Programma di | 6278402 Microsoft | per il foglio di calcolo | |
| Na2HPO4 (bibasico anidro) | VWR | 97061-588 | Concentrazione HBSS: 48 mg/mL Concentrazione KRB: 1,44 g/L |
| NaCl | VWR | 97061-274 | Concentrazione HBSS: 8000 mg/mL Concentrazione KRB: 70,1 g/L |
| NaHCO3 | VWR | 97062-460 | Concentrazione HBSS: 350 mg/ mL Concentrazione KRB: 21,0 g/L |
| Sistemi | miografici a pressione Danesi MyoTechnologies | 110P e 120CP | Sistema miografo a pressione: prorgramma, dispositivo di incannulamento, e unità di controllo |
| Trasduttore di pressione | Danese MyoTechnologies | 100106 | trasduttore di pressione |
| Studente Dumont #5 Pinze | Strumenti per le scienze fini | 91150-20 | pinze diritte |
| Studente Vannas Spring Forbici | Fine Science Tools | 91500-09 | micro-forbici |
| Colorante per tessuti | Bradley Products | 1101-3 | inchiostro per misurare l'allungamento in vivo |
| Trasduttore a ultrasuoni | FujiFilm Visual | Sonics LZ-550 | trasduttore a ultrasuoni utilizzato; 256 elementi, frequenza centrale 40 MHz |
| VEVO2100 | FujiFilm Visual Sonics | VS-20035 | ultrasuoni utilizzati per l'imaging |
| Forbici di Wagner | Strumenti di scienza fine | 14069-12 | forbici più grandi |
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