Un modello di ipertensione oculare indotta da olio di silicone reversibile nei topi

Sommario

Qui, presentiamo un protocollo per indurre ipertensione oculare e neurodegenerazione glaucomatosa negli occhi del topo mediante iniezione intracamerale di olio di silicone e la procedura per la rimozione dell'olio di silicone dalla camera anteriore per restituire una pressione intraoculare elevata a Normale.

Abstract

L'elevata pressione intraoculare (IOP) è un fattore di rischio ben documentato per il glaucoma. Qui descriviamo un nuovo metodo efficace per indurre costantemente l'elevazione stabile dell'IOP nei topi che imita la complicazione post-operatoria dell'uso dell'olio di silicone (SO) come agente tamponamento nella chirurgia vitreoretinica umana. In questo protocollo, SO viene iniettato nella camera anteriore dell'occhio del mouse per bloccare la pupilla e prevenire l'afflusso di umorismo acquoso. La camera posteriore accumula umorismo acquoso e questo a sua volta aumenta l'IOP del segmento posteriore. Una singola iniezione di SO produce un'altitudine IOP affidabile, sufficiente e stabile, che induce una significativa neurodegenerazione glaucomatosa. Questo modello è una vera replica del glaucoma secondario nella clinica oculistica. Per imitare ulteriormente l'ambiente clinico, SO può essere rimosso dalla camera anteriore per riaprire il percorso di drenaggio e consentire l'afflusso di umorismo acquoso, che viene drenato attraverso la rete trabecolare (TM) all'angolo della camera anteriore. Poiché IOP torna rapidamente alla normalità, il modello può essere utilizzato per testare l'effetto dell'abbassamento di IOP sulle cellule gangliari della retina glaucomatous. Questo metodo è semplice, non richiede attrezzature speciali o procedure di ripetizione, simula da vicino situazioni cliniche e può essere applicabile a diverse specie animali. Tuttavia, potrebbero essere necessarie modifiche minori.

Introduzione

La progressiva perdita di cellule gangliari retiniche (RGC) e dei loro assoni è il segno distintivo del glaucoma, una malattia neurodegenerativa comune nella retina¹. Colpisce più di 100 milioni di individui di età superiore ai 40-80 anni entro il 2040². L'IOP rimane l'unico fattore di rischio modificabile nello sviluppo e nella progressione del glaucoma. Per esplorare la patogenesi, la progressione e i potenziali trattamenti del glaucoma, è imperativo un modello sperimentale affidabile, riproducibile e inducibile di ipertensione/glaucoma sperimentale.

IOP dipende dall'afflusso di umorismo acq....

Protocollo

Tutte le procedure sono state approvate dall'Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) della Stanford University.

1. Induzione dell'ipertensione oculare mediante iniezione intracamerale di SO

1. Preparare una micropipetta di vetro per l'iniezione intracamerale SO tirando un capillare di vetro con un tiratore pipetta per generare una micropipetta. Tagliare un'apertura sulla punta della micropipetta e affilare ulteriormente la punta con una macchina a sferzatura microgrinder per fare una sferzata di 35-40 gradi.
2. Polacco i bordi della svegliata e rimuovere tutti i detriti lavando con acqua. Autoclave la micropipetta ....

Risultati

Subito dopo l'iniezione possiamo facilmente identificare i topi che non producono ipertensione oculare stabile a causa delle goccioline SO troppo piccole (1,5 mm)¹³. Questi animali sono esclusi dai successivi esperimenti. Dopo le procedure di iniezione, più dell'80% dei topi so iniettati finisce con goccioline più grandi di 1,6 mm. Abbiamo misurato l'IOP di questi occhi del topo una volta alla settimana per 8 settimane dopo una singola iniezione SO. L'IOP dell'occhio che riceve SO è rimasto alto, .......

Discussione

Qui dimostriamo una procedura semplice ma efficace per indurre l'elevazione prolungata di IOP nell'occhio del mouse mediante iniezione intracamerale di SO. Questa procedura può essere appresa rapidamente da chiunque abbia esperienza nella microdissezione al microscopio. Il rischio potenziale primario di fallimento è la perdita di SO dall'incisione corneale. Tuttavia, uno dei vantaggi dell'utilizzo di SO è che, poiché la goccia d'olio è visibile e misurabile, possiamo facilmente identificare i topi che hanno ricevuto gocc.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
0,5% proparacaina cloridrato	Akorn, Somerset
10mL siinge	BD		Luer-Lok Tip
18G ago	BD		con smusso regolare, Lunghezza ago: 25,4 mm
2,2,2-Tribromoetanolo (Avertin)	Fisher Scientific	CAS# 75-80-9	50g
32G nano	BD	320122	BD Nano Ultra Fine Pen Needle-32G 4mm
Ago per ofalmologia 33G	TSK/ VWR	TSK3313/ 10147-200
Siinge da 5 ml	BD		Luer-Lok
Tip AnaSed Injection (xilazina)	Butler Schein		100 mg/ml, 50 ml
lacrime artificiali	Alcon Laboratories	300651431414	Systane Ultra Lubricant Eye Drops
BSS PLUS Soluzione irrigua	Alcon Laboratories
Estrattore per micropipette in vetro a doppio stadio	NARISHIGE	PC-10
EZ-7000 Sistema classico	Sistema EZ Sistema
Isoflurano	VetOne	502017	isoflurano, USP, 250 ml/flacone
IV Set di somministrazione	EXELint / Fisher	29081
KETAMINA CLORIDRATO INIEZIONE	VEDCO	50989-996-06	KETAVED 100mg/ml * 10ml
macchina per smussatura a micromacinazione	NARISHIGE	EG-401
Tubo EVA in miniatura	McMaster-Carr	1883T4	0,05" ID, 0,09" OD, 10 piedi di lunghezza
olio siliconico (SILIKON)	Alcon Laboratories	8065601185	1.000 mPa.s
Capillari in vetro standard	WPI/ Fisher	1B150-4	4 in. (100mm) OD 1.5mm ID 0.84mm
Tonometro TonoLab	Colonial Medical Supply, Finlandia
unguento antibiotico veterinario	Dechra Veterinary	1223RX	BNP unguento oftalmico, Vetropolycin

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