Valutazione delle cellule di aiuto follicolare T e della risposta del centro germinale durante l'infezione da virus influenzale A nei topi

Meng Wang; Yuanyuan Huang; Wangpeng Gu; Haikun Wang

doi:10.3791/60523

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Articolo metodologico

Valutazione delle cellule di aiuto follicolare T e della risposta del centro germinale durante l'infezione da virus influenzale A nei topi

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DOI:

10.3791/60523

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27 giugno 2020

Meng Wang^*¹ , Yuanyuan Huang^*¹ , Wangpeng Gu²^,³ , Haikun Wang¹

¹CAS Key Laboratory of Molecular Virology and Immunology, Institut Pasteur of Shanghai, Chinese Academy of Sciences, University of Chinese Academy of Sciences, ²School of Life Science, University of Science and Technology of China, ³State Key Laboratory of Cell Biology, CAS Center for Excellence in Molecular Cell Science, Shanghai Institute of Biochemistry and Cell Biology, Chinese Academy of Sciences, University of Chinese Academy of Sciences

^* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

Questo documento descrive i protocolli di valutazione della risposta Tfh e GC B nel modello di topo di infezione da virus influenzale.

Abstract

Le cellule T Follicular Helper (Tfh) sono un sottoinsieme indipendente di cellule CD4⁺T specializzato nel fornire aiuto per lo sviluppo del centro germinale (GC) e la generazione di anticorpi ad alta affinità. Nell'infezione da virus influenzale, le risposte robuste delle cellule Tfh e GC B sono indotte a facilitare un'efficace eradicazione del virus, che conferisce un modello di topo qualificato per lo studio associato a Tfh. In questo documento, abbiamo descritto i protocolli nel rilevamento della risposta immunitaria associata a Tfh di base durante l'infezione da virus influenzale nei topi. Questi protocolli includono: inoculazione intranasale del virus influenzale; colorazione citometrica a flusso e analisi di cellule Tfh policlonali e antigene specifiche, cellule GC B e cellule plasmatiche; individuazione dell'immunofluorescenza dei TC; saggio immunoassorbente legato all'enzima (ELISA) dell'anticorpo specifico del virus influenzale nel siero. Questi test quantificano fondamentalmente la differenziazione e la funzione delle cellule Tfh nell'infezione da virus influenzale, fornendo così aiuto per studi nel meccanismo di differenziazione e nella strategia di manipolazione.

Introduzione

Nell'ultimo decennio, numerosi studi si sono concentrati sul sottoinsieme di cellule CD4⁺ T appena identificato, sottoinsieme cellulare Tfh, per i suoi ruoli essenziali nello sviluppo del centro germinale (GC) B. Il linfoma a cellule B 6 (Bcl6), che è principalmente considerato come repressore genico, è il fattore che definisce il lignaggio delle cellule Tfh per la prova che l'espressione ectopica di Bcl6 è sufficiente per guidare la differenziazione Tfh mentre la carenza di Bcl6 si traduce in una differenziazione Tfh^{scomparsa 1}^,²^,³. A differenza di altri sottoinsi....