Viene presentato un protocollo per bloccare il flusso linfatico mediante sutura chirurgica di vasi linfatici afferenti.
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Articolo metodologico
Blocco del flusso linfatico mediante la sutura di vasi linfatici afferenti nei topi
In questo articolo
Sommario
Abstract
I vasi linfatici sono fondamentali per mantenere l'equilibrio dei fluidi tissutali e ottimizzare la protezione immunitaria trasportando antigeni, citochine e cellule ai linfonodi drenante (LN). L'interruzione del flusso linfatico è un metodo importante quando si studia la funzione dei vasi linfatici. I vasi linfatici afferenti dal pedana murina ai linfonodi poplitei (PLN) sono ben definiti come le uniche vie per il drenaggio linfatico nei PLN. Suturare questi vasi linfatici afferenti può prevenire selettivamente il flusso linfatico verso i PLAN. Questo metodo consente l'interferenza nel flusso linfatico con danni minimi alle cellule endoteliali linfatiche nel pLN drenante, nei vasi linfatici afferenti e in altri vasi linfatici intorno all'area. Questo metodo è stato utilizzato per studiare come la linfa influisce sulle alte venule endoteliali (HEV) e sull'espressione della chemiochina nella LN e su come la linfa fluisce attraverso il tessuto adiposo che circonda la LN in assenza di vasi linfatici funzionali. Con il crescente riconoscimento dell'importanza della funzione linfatica, questo metodo avrà applicazioni più ampie per svelare ulteriormente la funzione dei vasi linfatici nella regolazione del microambiente LN e delle risposte immunitarie.
Introduzione
L'organizzazione spaziale del sistema linfatico fornisce supporto strutturale e funzionale per rimuovere in modo efficiente il fluido extracellulare e trasportare antigeni e cellule che presentano antigeni (APC) nelle LN drenante. I vasi linfatici iniziali (chiamati anche capillari linfatici) sono altamente permeabili a causa delle loro giunzioni intercellulari discontinue, che facilitano l'efficace raccolta di fluidi, cellule e altri materiali dagli spazi extracellularicircostanti 1. I vasi linfatici iniziali si fondono nella raccolta di vasi linfatici, che hanno strette giunzioni intercellulari, una membrana basale continua e una copertura mu....
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Protocollo
Tutto il lavoro sugli animali deve essere approvato dal comitato istituzionale e governativo per l'etica e la gestione degli animali. Questo è un intervento di non sopravvivenza.
1. Preparazione dei materiali
- Preparare 100 mL di etanolo al 70% mescolando 70 mL di etanolo al 100% con 30 mL di acqua sterile. Autoclave tutti gli strumenti chirurgici prima dell'intervento chirurgico e mantenere gli strumenti in etanolo al 70% prima e durante l'intervento chirurgico per mantenere la sterilizzazione.
- Preparare un apparato di iniezione.
- Tagliare ~30 cm di tubi in polietilene (0,28 mm di diametro). Collegare la punta di....
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Risultati
La sutura linfatica dei vasi è stata utilizzata neglistudi precedenti 15,16,17,19, dove è servita come strumento importante per studiare la funzione del flusso linfatico prima che la biologia molecolare dei vasi linfatici fosse meglio compresa. Il blocco del flusso linfatico interrompe l'omeostasi LN, che porta gli HEV a perdere l'espressione genica critica necessaria per l'homing dei linfociti.......
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Discussione
Il blocco del flusso linfatico avrà ampie applicazioni nella manipolazione della somministrazione di antigeni alla LN in condizioni sane e mase. È possibile utilizzare questo metodo per controllare i tempi di erogazione dell'antigene al fine di studiare come il flusso linfatico continuo regola la risposta immunitaria nelle LN drenante. Questo metodo di interruzione del flusso linfatico può anche essere utilizzato per studiare come la linfa influisce sulla compartimentazione cellulare, l'attivazione cellulare, la migrazio.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno conflitti di interesse da rivelare.
Ringraziamenti
Gli autori ringraziano Ava Zardynezhad per la correzione del manoscritto. Questo lavoro è supportato dal Canadian Institute of Health Research (CIHR, PJT-156035) e dalla Canada Foundation for Innovation for SL (32930), e dalla National Natural Science Foundation of China per Yujia Lin (81901576).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| 0,9% di cloruro di sodio soluzione salina | Baxter | JB1323 | |
| 100% etanolo | Greenfield Servizi di distribuzione della Global | University of Calgary UN1170. | |
| Crema depilatoria | Nair | Nair Sensitive Formula Depilazione Crè me con Olio di Mandorle Dolci e Olio per Bambini, 200 ml. O prodotto simile. | |
| Colorante blu Evans | Sigma Life Science | E2129-10G | Per 1 ml di colorante blu Evans, aggiungere 0,1 g di blu Evans a 10 ml di PBS. La soluzione Evens Blue sarà filtrata attraverso filtri da 0,22 mm e mantenuta sterile in aliquote da 1 ml. |
| Isotiocianato di fluoresceina isotiocianato I (FITC) | Sigma Life Science | F7250-1G | |
| Forcipe Dumont #3 | WPI | 500337 | |
| Forcipe Dumont #5 | WPI | 500233 | |
| Apparecchio per iniezione | Collegare un'estremità del tubo in polietilene a 30G & volte; ½ ago. Collegare una siringa da 1 ml di TB all'ago. Sganciare l'asta dell'ago da un altro 30G & ½ ago. Inserire l'estremità smussata del 30G &volte; ½ l'albero dell'ago nell'altra estremità del tubo. Il diametro interno di questo tubo è di 0,28 mm. Pertanto, 1,6 cm di fluido nel tubo sono 1 μl. | ||
| Siringa per insulina | Becton Dickinson and Company (BD) | 329461 | |
| IRIS Forcep straight | WPI | 15914 | |
| IRIS scissors | WPI | 14218-G | |
| Ketamine | Narketan | DIN 02374994 | I fornitori di ketamina e xilazina sono solitamente soggetti a regolamentazione istituzionale e governativa. |
| Aghi (26Gx3/8) | Becton Dickinson and Company (BD) | 305110 | |
| Needles (30Gx1/2) | Becton Dickinson and Company (BD) | 305106 | |
| Porta aghi Paton | ROBOZ | RS6403 | Dritto, senza serratura; Soluzione |
| salina tamponata con fosfato (PBS)>< | Sigma Life Science | P4417-100TAB | |
| Tubo in polietilene | Becton Dickinson and Company (BD) | 427401 | |
| Nastro chirurgico (1,25 cm x 9,1 m) | Transpore | 1527-0 | |
| Nastro chirurgico (2,5 cm x 9,1 m) | Transpore | 1527-1 | |
| Suture | Davis and Geck CYANAMID Canada | 11/04 | 0.7 monofilamento metrico polipropilene |
| Siringa (1ml) | Becton Dickinson and Company (BD) | 309659 | |
| VANNAS forbici | World Precision Instruments (WPI) | 14122-G | |
| Xilazina | Rompun | DIN02169606 | I fornitori di ketamina e xilazina sono solitamente soggetti a regolamentazione istituzionale e governativa. |
| Equipment | |||
| Microscopio da dissezione | Olympus | Olympus S261 (522-STS OH141791) con sorgente luminosa: Olympus Highlight 3100 | |
| Microscopio confocale | Leica | SP8 |
Riferimenti
- Pflicke, H., Sixt, M. Preformed portals facilitate dendritic cell entry into afferent lymphatic vessels. The Journal of Experimental Medicine. 206, 2925-2935 (2009).
- Schmid-Schonbein, G. W. Microlymphatics and lymph flow. Physiological Reviews. 70
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Ristampe e permessi
