Abbiamo descritto in questo protocollo un modello di topo standardizzato di emorragia subarnoide (SAH) con una doppia iniezione di sangue intero autologo nella cisterna magna. L'elevato grado di standardizzazione della procedura a doppia iniezione rappresenta un modello medio-acuto di SAH con relativa sicurezza per quanto riguarda la mortalità.
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Articolo metodologico
Doppia iniezione diretta di sangue nella Cisterna Magna come modello di emorragia subarachnoide
In questo articolo
Sommario
Abstract
Tra i ictus, l'emorragia subaracnoidea (SAH) consecutiva alla rottura di un aneurisma arteriosa cerebrale rappresenta il 5-9%, ma è responsabile di circa il 30% della mortalità totale correlata all'ictus con un'importante morbilità in termini di esito neurologico. Un vasospasma cerebrale ritardato (CVS) può verificarsi più spesso in associazione con un'ischemia cerebrale ritardata. Diversi modelli animali di SAH sono ora utilizzati tra cui perforazione endovascolare e iniezione diretta di sangue nella cisterna magna o anche la cisterna prechiasmatica, ognuna con vantaggi e svantaggi distinti. In questo articolo, viene presentato un modello di topo standardizzato di SAH mediante doppia iniezione diretta di volumi determinati di sangue intero autologo nella cisterna magna. In breve, i topi sono stati pesati e poi anetiti con inalazione isoflurana. Poi, l'animale è stato posto in una posizione reclinata su una coperta riscaldata mantenendo una temperatura rettale di 37 gradi centigradi e posizionato in un telaio stereotattico con una curva cervicale di circa 30 gradi. Una volta in posizione, la punta di una micropipetta di vetro allungata riempita con il sangue arterioso omologato prelevato dall'arteria carotidea di un altro topo della stessa età e sesso (C57Bl/6J) è stata posizionata ad angolo retto a contatto con la membrana alanto-occipitale per mezzo di un micromanipolatore. Poi 60 L di sangue è stato iniettato nella cisterna magna seguita da un'inclinazione verso il basso di 30 gradi dell'animale per 2 minuti. La seconda infusione di 30 L di sangue nella cisterna magna è stata eseguita 24 h dopo la prima. Il follow-up individuale di ogni animale viene effettuato giornalmente (attenta valutazione del peso e del benessere). Questa procedura consente una distribuzione prevedibile e altamente riproducibile del sangue, probabilmente accompagnata da un'elevazione della pressione intratrattale che può essere imitata da un'iniezione equivalente di un fluido spinale cerebrale artificiale (CSF), e rappresenta un modello acuto a lieve di SAH che induce una bassa mortalità.
Introduzione
L'emorragia subarachnoide (SAH) rappresenta fino al 5% di tutti i casi di ictus e costituisce una patologia relativamente comune con un'incidenza di 7,2-9 pazienti ogni 100.000all'anno,con un tasso di mortalità del 20%-60% a seconda dello studio1,2,3 . Nella fase acuta, la mortalità è attribuibile alla gravità del sanguinamento, del sanguinamento, del vasospasmo cerebrale (CVS) e/o delle complicazioni mediche4. Nei sopravvissuti, la lesione cerebrale precoce (EBI) è associata all'estensione parenchimale dell'emorragia e al brusco aumento della pression....
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Protocollo
Tutte le procedure sono state eseguite sotto la supervisione di H. Castel in conformità con il Comitato etico francese e le linee guida della direttiva 2010/63/UE del Parlamento europeo e del Consiglio per la protezione degli animali utilizzati per scopi scientifici. Questo progetto è stato approvato dal CENOMEXA locale e dai comitati nazionali di etica per la ricerca e la sperimentazione sugli animali. I topi maschi C57Bl/6J Rj (Janvier), di età compresa tra 8 e 12 settimane, erano alloggiati in condizioni ambientali standard controllate: 22 gradi centigradi, 12 ore/12 ciclo di luce/scuro, e acqua e cibo disponibili al libitum.
1. Im....
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Risultati
Sequenza temporale sperimentale, procedura, follow-up e mortalità
Figura 1A e Figura 1B riepilogare il protocollo del modello SAH mediante doppia iniezione intracisterna di sangue. In breve, il primo giorno di induzione di SAH (D-1), 60 L di sangue prelevato da un topo omologa o 60 L di liquido cerebrospinale artificiale (aCSF) sono stati iniettati nella cisterna magna in SAH o condizioni di finzione, rispettivamente. Il giorno successivo (D0.......
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Discussione
Nonostante l'intensità della ricerca nel campo della SAH e lo sviluppo di strategie terapeutiche come le opzioni di trattamento endovascolare e farmacologico in aumento negli ultimi vent'anni, la mortalità rimane elevata entro la prima settimana di ricovero ospedaliero e raggiunge circa il 50% nei successivi 6 mesi24,25. Questo modello preclinico attuale da doppia iniezione giornaliera di sangue arterioso omologa nella cisterna magna è stato rico.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Ringraziamo la piattaforma PRIMACEN (Normandie Rouen University, Francia) per le apparecchiature di imaging e Arnaud Arabo, la signora Julie Maucotel e la signora Martine Dubois, per l'alloggio e la cura degli animali. Ringraziamo la signora Celeste Nicola per aver prestato la sua voce alle riprese del protocollo. Questo lavoro è stato sostenuto dal programma di maturazione Seinari Normandy, Fondation AVC sotto l'egida della FRM, Normandie Rouen University e Inserm. La regione della Normandia e l'Unione europea (progetto 3R). L'Europa è coinvolta in Normandia con il Fondo europeo di sviluppo regionale (ERDF).
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| emostatico riassorbibile | Ethicon | Surgicel | |
| filo di sutura riassorbibile | Ethicon | Vicryl 5.0 | |
| coperta elettrica autoregolata | Harvard Apparatus | 50-7087-F | |
| bluetack per fissaggio capillare | UHU | Patafix | |
| Denver Instrument | MXX-2001 | ||
| capillari in vetro | Harvard Apparatus | GC150F-15 | diametro interno 0,86 mm diametro esterno 1,5 mm |
| vaporizzatore isoflurano | Phymep | V100 | |
| estrattore per micropipette | Sutter Instrument Company | P-97 | |
| ago 26 G | BD microbilancia | 300300 | |
| filo di sutura non assorbibile | Peters surgical | Filapeau 4.0 | |
| telaio stereotassico | David Kopf strumenti | Modello 902 | |
| attrezzatura chirurgica | Kent scientific | clamp, microforbici, forbici | |
| siringa 20 mL TERUMO | Thermofisher | 11866071 |
Riferimenti
- Rincon, F., Rossenwasser, R. H., Dumont, A. The epidemiology of admissions of nontraumatic subarachnoid hemorrhage in the United States. Neurosurgery. 73 (2), 212-222 (2013).
- Sandvei, M. S., et al. Incidence and mortality....
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Ristampe e permessi
