In questo studio, un sistema di alimentazione per le fasi ninfe e larval di zecca dura è stato sviluppato utilizzando una capsula attaccata al topo di laboratorio. La capsula di alimentazione è realizzata con materiali flessibili e rimane saldamente attaccata al mouse per almeno una settimana e consente un comodo monitoraggio dell'alimentazione delle zecche.
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
Un modello basato su capsule per l'infestazione di fasi di zecche dure immature su topi di laboratorio
In questo articolo
Sommario
Abstract
Le zecche sono parassiti obbligatori dell'alimentazione del sangue in tutte le fasi dello sviluppo (tranne le uova) e sono riconosciute come vettori di vari agenti patogeni. L'uso di modelli murini nella ricerca sulle zecche è fondamentale per comprendere la loro biologia e le interazioni tra l'ospite-patogeno. Qui dimostriamo una tecnica non laboriosa per l'alimentazione di stadi immaturi di zecche dure su topi di laboratorio. Il vantaggio del metodo è la sua semplicità, breve durata, e la capacità di monitorare o raccogliere zecche in diversi punti di tempo di un esperimento. Inoltre, la tecnica consente l'attaccamento di due singole capsule sullo stesso topo, il che è utile per una varietà di esperimenti in cui sono necessari due diversi gruppi di zecche per nutrirsi dello stesso animale. La capsula non irritante e flessibile è realizzata con materiali facilmente accessibili e riduce al minimo il disagio degli animali sperimentali. Inoltre, l'eutanasia non è necessaria, i topi si riprendono completamente dopo l'esperimento e sono disponibili per il nuovo utilizzo.
Introduzione
Le zecche sono importanti vettori di diversi agenti patogeni e rappresentano un grave rischio per la salute animale e umana1. La creazione di un sistema di alimentazione efficace è fondamentale quando si studiano la loro biologia, le interazioni tra zecche-ospite-patogeno o per stabilire misure di controllo efficaci. Attualmente, diversi sistemi di alimentazione artificiale, che evitano l'uso di animali vivi sono disponibili per le zecche2,3,4 e questi dovrebbero essere utilizzati ogni volta che le condizioni sperimentali lo consentono. Tuttavia, in va....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Protocollo
Si prega di notare che questo protocollo può essere applicato solo quando tutte le misure di benessere e sicurezza sono soddisfatte in laboratorio. Questo protocollo ha ricevuto il permesso di utilizzare i topi per l'alimentazione con zecche dal Comitato Etico per gli esperimenti animaliComEth Anses/ENVA/UPEC, Permit Numbers E 94 046 08. Per l'endpoint, gli animali sono stati esposti a CO2 per 9 min in due fasi di 4 e 5 min ciascuna.
1. Preparazione della capsula
- Stick 2 mm di spessore EVA-foam e l'adesivo doppia schiuma appiccicosa insieme (Figura 1A).
- Utilizzando un foro in pell....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Risultati
Proponiamo il metodo dettagliato step-by step per alimentare le fasi di zecca dura immatura in capsule EVA-foam applicate alla schiena di un topo (Figura 2). Questo protocollo non laborioso è adatto per vari tipi di esperimenti quando è necessario un preciso monitoraggio e raccolta delle zecche. I principali vantaggi di questo metodo sono la sua semplicità, materiali facilmente convenienti e breve durata. Inoltre, siamo riusciti ad attaccare due capsule a un individuo topo (
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Discussione
Il passo più critico nel protocollo è l'incollaggio fermo della capsula alla pelle del topo. Pertanto, la colla in lattice deve essere applicata omogeneamente all'intera superficie EVA-foam della capsula e deve essere applicata una pressione costante per 3 minuti, soprattutto sul lato sinistro e destro della capsula. Si consiglia inoltre di posizionare la capsula il più in avanti possibile sul retro per evitare la sua rimozione dal mouse utilizzando le zampe posteriori. Nei nostri esperimenti, solo l'adesione della schif.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Riconosciamo l'assistenza tecnica di Alain Bernier French National Institute of Agricultural Research (INRAE), e Océane Le Bidel (ANSES). Lo studio è stato sostenuto dal DIM One Health - Région àle-de-France (acronimo del progetto: NeuroPaTick). I topi sono stati acquistati da ANSES. Il dottor Jeffrey L. Blair è riconosciuto per aver esaminato la versione precedente del manoscritto.
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Schiuma EVA 2 mm di spessore, (bassa densità) | Cosplay Shop | EVA-45kg (950/450/2 mm) | Può essere ordinato anche tramite Amazon (rif. n. B07BLMJDXD) |
| Tubo termorestringente Manicotto elettrico 31 mm/1,22 pollici | Amazon | B0848S3S6T | Diversi diametri di guaina termorestringente sono disponibili tramite Amazon. |
| Topi BALB/cByJ | Charles River | Ceppo codice 627 | |
| Topi C57BL/6 | Charles River | Ceppo codice 664 | |
| Colla al lattice non tossica | Tear riparder | Tessuto & Adesivo in pelle | Disponibile anche su Amazon (rif. n. B001RQCTUU) |
| Strumento di punzonatura Strumento artistico a mano | Amazon | B07QPWNGBF | Venduto da amazon come strumenti per la lavorazione della pelle 1-25 mm Taglierina in pelle rotonda in acciaio che lavora per la cinghia della cintura |
| Coperture per rilegatura in PVC Trasparente | Amazon | B078BNLSNP | Qualsiasi foglio di ticchettio in PVC trasparente tra 0,150 mm e 0,180 mm è adatto |
| Pad autoadesivo Spugna Nastro in schiuma biadesivo | Amazon | B07RHDZ35J | Venduto da amazon come 2 rotoli di nastro biadesivo in schiuma, nastro di montaggio bianco super resistente |
| Adesivi con guarnizione trasparente in schiuma (cerchi di diametro 20 mm) | Amazon | B01DAA6X66 |
Riferimenti
- Sonenshine, D. E., Roe, M. Biology of Ticks. , Oxford University Press. (2014).
- Kröber, T., Guerin, P. M. In vitro feeding assays for hard ticks. Trends in Parasitology. 23 (9), 445-449 (2007).
- Bonnet, S., et al.
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Ristampe e permessi
