Previsione dell'amputazione mediante cellule progenitrici mononucleari circolanti locali in pazienti trattati con angioplastica con ischemia degli arti critici

Summary

L'amputazione degli arti inferiori può verificarsi anche dopo l'angioplastica dei vasi ostruite nell'ischemia degli arti critici (CLI). Le cellule progenitrici mononucleari (MPC) riflettono la riparazione vascolare. Il presente protocollo descrive la quantificazione degli MPC dalla circolazione vicina all'angioplastica e la sua relazione con la disfunzione endoteliale e la previsione dell'amputazione degli arti inferiori.

Abstract

L'ischemia degli arti critici (CLI) rappresenta uno stadio avanzato della malattia arteriosa periferica. L'angioplastica migliora il flusso sanguigno all'arto inferiore; tuttavia, alcuni pazienti progrediscono irreversibilmente verso l'amputazione degli arti. L'entità del danno vascolare e i meccanismi di riparazione vascolare sono fattori che influenzano l'esito post-angioplastica. Le cellule progenitrici mononucleari (MPC) sono reattive ai danni vascolari e alla riparazione, con la capacità di riflettere le malattie vascolari. Il presente protocollo descrive la quantificazione degli MPC ottenuti dalla circolazione sanguigna dal vaso vicino al sito di angioplastica, così come la sua relazione con la disfunzione endoteliale e la sua capacità predittiva per l'amputazione degli arti nei prossimi 30 giorni dopo l'angioplastica nei pazienti con CLI.

Introduction

La malattia arteriosa periferica (PAD) è caratterizzata da un'ostruzione vascolare cronica e progressiva con limitazione dell'apporto di^{sangue 1}. Su scala globale, il PAD degli arti inferiori colpisce circa il 10% della popolazione anziana, mentre fino al 7% di questi casi sono sottoposti all'amputazione degli^{arti 2,3}.

Critical Limb Ischemia (CLI) rappresenta la presentazione più seria di PAD¹. I pazienti di solito provano dolore a riposo, ulcere o cancrena attribuibili a arterie occluse; mentre la prognosi clinica è sfavorevole e cara....

Protocol

Il comitato etico di ricerca istituzionale del Centro Médico Nacional "20 de Noviembre" ISSSTE ha approvato questo protocollo prospettico, tutti i pazienti iscritti hanno fornito il consenso informato scritto.

1. Valutazione del blocco vascolare dell'arto inferiore, prelievo del sangue e angioplastica del palloncino

NOTA: Il campione di studio utilizzato per questo esperimento comprendeva 20 pazienti diabetici, di età compresa tra 68 e 10 su 20 erano maschi. Metà del campione erano fumatori e le comorbilità più diffuse erano diabete mellito di tipo 2, ipertensione arteriosa sistemica e/o dislipidemia. Il campione d....

Results

Campioni di sangue provenienti da arterie bloccate, nel sito indirizzato per l'angioplastica, sono stati raccolti da 20 pazienti diabetici, di 68 anni e 10 su 20 erano maschi. Metà della popolazione campione era fumatore. Le lesioni vascolari sono state principalmente segnate come Classe VI di Rutherford; che i pazienti hanno mostrato una prevalenza più elevata di diabete mellito di tipo 2 (100%), ipertensione (70%) e dislipidemia (55%).

Un follow-up clinico di 30 giorni dopo l'angioplastica d.......

Discussion

La raccolta del sangue nel sito preciso del blocco vascolare può mostrare difficoltà tecniche; pertanto, abbiamo eseguito la raccolta del sangue in prossimità del blocco vascolare. Allo stesso modo, la quantità di MPC vicino alla placca vascolare sembra essere altamente dinamica e può originare variazioni prima e dopo l'angioplastica. Secondo le nostre osservazioni, si raccomanda di valutare i cambiamenti di basale e 30 minuti dopo l'angioplastica nel numero di MPC, poiché possono riflettere diversi processi fisiopatolog.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
BSA	Roche	10735086001	l'albumina sierica bovina (BSA) come agente tampone, stabilizzante, standard e per miscelazione.
Perle di calibrazione	Miltenyi Biotec / MACS	#130-093-607	Le perle di calibrazione MACQuant sono fornite in soluzione acquosa contenente lo 0,05% di azide di sodio. 3,5 ml per un massimo di 100 test
CD133/1 (AC133)-PE	Milteny Biotec / MACS	#130-080-801	Anticorpo coniugato a R-Ficoeritrina in tampone PBS/EDTA
CD184 (CXCR4)-PE-VIO770	Miltenyi Biotec / MACS	#130-103-798	Monoclonale, isotipo ricombinante umano IgG1, coniugato
CD309 (VEGFR-2/KDR)-APC	Miltenyi Biotec / MACS	#130-093-601	Anticorpo coniugato a R-Ficoeritrina in tampone PBS/EDTA
CD34-FITC	Miltenyi Biotec / MACS	#130-081-001	Il clone di anticorpo monoclonale AC136 rileva un epitopo di classe III del CD34
CD45- VioBlue	Miltenyi Biotec / MACS	#130-092-880	Anticorpo monoclonale CD45,
provette coniugate	Thermo SCIENTIFIC	#339651	Provette coniche da centrifuga da 15 ml
Provette per citometria	FALCON Corning Brand	#352052	mL Provetta a fondo tondo in polistirene. Stile 12x75. Sterile.
EDTA	BIO-RAD	#161-0729	Metalli pesanti, (come Pb) < 10 ppm, Fe< 0,01%, As< 1ppm, Insolubili< 0,005%
Neubauer migliorato	Senza marca	Senza numero di catalogo	Emocitometro per il conteggio delle cellule. (intervallo 0,1000 mm, 0,0025 mm2)
Provette per la raccolta del sangue K2 EDTA BD	Vacutainer	#367863	Provetta vacutainer in plastica lilla (K2E) 10,8 mg, 6 mL.
Lymphoprep	Stemcell Technologies	01-63-12-002-A	Sterile e controllato sulla presenza di endotossine. Densità: 1,077± 0,001g/mL
Paraformaldeide	SIGMA-ALDRICH		Fissazione di campioni biologici, (polvere, 95%)Trasferimento di
pipette 1,3mL	CRM Globe	PF1016, PF1015	La pipetta di trasferimento è uno strumento che facilita il trasferimento di liquidi con maggiore precisione.
Provette	KIMBLE CHASE	45060 13100	Provette resistenti al calore. DIMENSIONI/TAPPO 13 x 100 mm