I modelli tradizionali di ictus fototrombotico (PTS) inducono principalmente aggregati piastrinici densi con un'elevata resistenza al trattamento litico con attivatore tissutale del plasminogeno (tPA). Qui viene introdotto un modello PTS murino modificato co-iniettando trombina e colorante fotosensibile per la fotoattivazione. Il modello PTS potenziato con trombina produce coaguli misti piastrina:fibrina ed è altamente sensibile alla trombolisi tPA.
È richiesta un abbonamento a JoVE per visualizzare questo contenuto. Accedi o inizia la tua prova gratuita.
Articolo metodologico
Un modello di ictus fototrombotico arricchito di fibrina e sensibile al tPA
In questo articolo
Sommario
Abstract
Un modello ideale di ictus tromboembolico richiede determinate proprietà, tra cui procedure chirurgiche relativamente semplici con bassa mortalità, dimensioni e posizione dell'infarto coerenti, precipitazione di coaguli di sangue misto piastrino-fibrina simili a quelli dei pazienti e un'adeguata sensibilità al trattamento fibrinolitico. Il modello di ictus fototrombotico a base di colorante rosa bengala (RB) soddisfa i primi due requisiti, ma è altamente refrattario al trattamento litico mediato da tPA, presumibilmente a causa della sua composizione del coagulo ricca di piastrine, ma povera di fibrina. Ragioniamo che la combinazione di colorante RB (50 mg/kg) e una dose sub-trombotica di trombina (80 U/kg) per la fotoattivazione mirata al ramo prossimale dell'arteria cerebrale media (MCA) può produrre coaguli arricchiti di fibrina e sensibili al tPA. Infatti, il modello di fototrombosi combinato con trombina e RB (T+RB) ha innescato coaguli di sangue misti piastrina:fibrina, come dimostrato dall'immunocolorazione e dagli immunoblots, e ha mantenuto dimensioni e posizioni dell'infarto coerenti, oltre a una bassa mortalità. Inoltre, l'iniezione endovenosa di tPA (Alteplase, 10 mg/kg) entro 2 ore dalla fotoattivazione ha ridotto significativamente le dimensioni dell'infarto nella fototrombosi T+RB. Pertanto, il modello di ictus fototrombotico potenziato dalla trombina può essere un utile modello sperimentale per testare nuove terapie trombolitiche.
Introduzione
La trombectomia endovascolare e la trombolisi mediata da tPA sono le uniche due terapie approvate dalla Food and Drug Administration (FDA) degli Stati Uniti per l'ictus ischemico acuto, che affligge ~700.000 pazienti all'annonegli Stati Uniti. Poiché l'applicazione della trombectomia è limitata all'occlusione dei grandi vasi (LVO), mentre la trombolisi tPA può alleviare le occlusioni dei piccoli vasi, entrambe sono terapie preziose per l'ictus ischemico acuto2. Inoltre, la combinazione di entrambe le terapie (ad esempio, l'inizio della trombolisi tPA entro 4,5 ore dall'insorgenza dell'ictus, seguita da trombectomia) migl....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Protocollo
Questo protocollo è approvato dall'Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) dell'Università della Virginia e segue le linee guida del National Institutes of Health per la cura e l'uso degli animali da laboratorio. La Figura 1A delinea la sequenza delle procedure chirurgiche di questo protocollo.
1. Impostazione dell'intervento chirurgico
- Posizionare un tappetino riscaldante con temperatura impostata a 37 °C sull'adattatore per animali di piccola taglia almeno 15 minuti prima dell'intervento. Preparare un rotolo di clip per il naso per l'adattatore che consenta la rotazione della testa dell'....
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Risultati
In primo luogo, abbiamo confrontato il contenuto di fibrina in RB rispetto ai coaguli di sangue indotti dalla fototrombosi T+RB. I topi sono stati sacrificati mediante perfusione transcardica di fissativi a 2 ore dopo la fotoattivazione e i cervelli sono stati rimossi per la colorazione a immunofluorescenza del ramo MCA nei piani longitudinali e trasversali. Nella fototrombosi RB, il ramo MCA era densamente impacchettato con piastrine CD41+ e poca fibrina (Figura 2A,C
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Discussione
L'ictus fototrombotico RB tradizionale, introdotto nel 1985, è un modello interessante di ischemia cerebrale focale per semplici procedure chirurgiche, bassa mortalità e alta riproducibilità dell'infarto cerebrale. 5 In questo modello, il colorante fotodinamico RB attiva rapidamente le piastrine all'eccitazione della luce, portando a densi aggregati che occludono il vaso sanguigno 5,8,23. Tuttavia, la pic.......
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto dalle sovvenzioni del NIH (NS108763, NS100419, NS095064 e HD080429 a C.Y.K.; e NS106592 a Y.Y.S.).
....Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| 2,3,5-trifeniltetrazolio cloruro (TTC) | Sigma | T8877 | infarto |
| 4-0 Sutura monofilamento di nylon | LOOK | 766B | forniture chirurgiche |
| 5-0 sutura di seta | Harvard Apparatus | 624143 | forniture chirurgiche |
| Raggio laser 543nm | Melles Griot | 25-LGP-193-249 | fototrombosi |
| topi maschi adulti | Charles River | C57BL/6 | 10~14 settimane (22~30 g) |
| Barra per anestesia per | l'officina meccanica | configurazione chirurgica | |
| Avertin (2, 2, 2-tribromoetanolo) | Sigma | T48402 | eutanasia |
| Trapano odontoiatrico | Dentamerica | Rotex 782 | configurazione chirurgica |
| Microscopio digitale | Dino-Lite | AM2111 | imaging cerebrale |
| Dissezione microscopio | Olympus | SZ40 | configurazione chirurgica |
| Pinze curve fini (seghettate) | Strumento chirurgico | FST | 11370-31 |
| Pinze curve fini (lisce) | FST | 11373-12 | strumento chirurgico |
| capra anti-coniglio Alexa Fluro 488 | Invitrogen | A11008 | Immunoistochimica |
| Emostatici Halsted-Mosquito | FST | 13008-12 | strumento chirurgico |
| Pompa di calore con cuscinetto riscaldante | di | chirurgica Gaymar | TP700 |
| KD Scientific | 200 | trattamento trombolitico | |
| Siringa da insulina con ago da 31G | BD | 328291 | fototrombosi |
| Ketamina | CCM, | anestesia UVA | |
| Laser protettivo google 532nm | Fototrombosi | ||
| Ketoprofene | CCM, UVA | NSAID, analgesia | |
| micro portaaghi | FST | 12060-01 | chirurgico |
| 15000-03 | strumento chirurgico | ||
| MoorFLPI-2, imager del flusso sanguigno | Moor | sorgente laser da 780 nm | Speckle Contrast Imaging |
| , adattatore per mouse | RWD | 68014 | |
| Unguento Puralube Vet | Fisher | NC0138063 | prevenzione della secchezza oculare Punte |
| divaricatori | Kent Scientific | Surgi-5014-2 | configurazione chirurgica |
| Fototrombosi Rose Bengal | Sigma | 198250 | Fototrombosi |
| Trombina | Sigma | T7513 | |
| Colla tissutale | Abbott Laboratories | NC9855218 | forniture chirurgiche |
| tPA | Genetech | Cathflo activase 2mg | trattamento trombolitico |
| Vibratome | Stoelting | 51425 | TTC infacrt |
| xilazina | CCM, anestesia UVA |
Riferimenti
- Lyden, P. D. Thrombolytic Therapy for Acute Stroke. 3/e. , Springer. (2015).
- Linfante, I., Cipolla, M. J. Improving reperfusion therapies in the era of mechanical thrombectomy. Translational Stroke Research. 7 (4), 294-302 (2016).
- Campbell, B. C., et al.
Accesso limitato. Accedi o avvia una prova gratuita per visualizzare questo contenuto.
Ristampe e permessi
