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Articolo metodologico

Modello di occlusione tracheale fetale transuterina nei topi

3K visualizzazioni

DOI:

10.3791/61772

5 febbraio 2021

In questo articolo

Sommario

Vari modelli animali di ernia diaframmatica congenita e occlusione tracheale fetale presentano vantaggi e svantaggi per quanto riguarda questioni etiche, costi, difficoltà chirurgiche, dimensioni, tassi di sopravvivenza e disponibilità di strumenti genetici. Questo modello fornisce un nuovo strumento per studiare l'impatto sia dell'occlusione tracheale che dell'aumento della pressione luminare sullo sviluppo polmonare.

Abstract

L'occlusione tracheale fetale (TO), una modalità di trattamento consolidata, promuove la crescita polmonare fetale e la sopravvivenza in ernia diaframmatica congenita grave (CDH). Dopo TO, la ritenzione del liquido epiteliale secreto aumenta la pressione luminare e induce la crescita polmonare. Vari modelli animali sono stati definiti per comprendere la fisiopatologia di CDH e TO. Tutti hanno i loro vantaggi e svantaggi come la difficoltà della tecnica, le dimensioni dell'animale, il costo, alti tassi di mortalità e la disponibilità di strumenti genetici. Qui viene descritto un nuovo modello transuterino di TO fetale murino. I topi gravidi venivano anestetizzati e l'utero esposto attraverso una laparotomia mediana. La trachea di feti selezionati era legata con una singola sutura transuterina posta dietro la trachea, un'arteria carotide e una vena giugulare. La diga è stata chiusa e ha permesso di riprendersi. I feti venivano raccolti poco prima del parto. Il rapporto tra peso polmonare e corpo nei feti TO era superiore a quello dei feti di controllo. Questo modello fornisce ai ricercatori un nuovo strumento per studiare l'impatto sia del TO che dell'aumento della pressione luminare sullo sviluppo polmonare.

Introduzione

L'ernia diaframmatica congenita (CDH) si verifica in gravidanze 1:2500 e si traduce in ipoplasia polmonare e ipertensione polmonare neonatale1,2,3,4,5,6. L'occlusione tracheale fetale (TO) è una terapia prenatale stabilita nei pazienti affetti da CDH grave che coinvolge la fetoscopia nella settimanagestazionale 26-30 in cui un palloncino viene posizionato appena sopra la carena e quindi rimosso nella 32a settimana gestazionale. Questo TO temporaneo in....

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Protocollo

Tutti gli esperimenti sono stati conformi alla Guida nazionale degli istituti sanitari per la cura e l'uso degli animali da laboratorio (PUBBLICAZIONI N. 80023 del NIH, rivedute nel 1978). La procedura è stata approvata con il protocollo IACUC #2016-0068 dal Cincinnati Children's Research Foundation Institutional Animal Care and Use Committee.

1. Preparazione

  1. Per accoppiare topi C57BL/6 di tipo selvaggio abbinati all.m'età (WT), metterli nella stessa gabbia alle 18:00.m e separarli alle 9:00 del giorno successivo.
  2. Per determinare il giorno 0 embrionale (E0), guardare la spina vaginale, che ha una zona esterna omogenea at....

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Risultati

Questo studio ha esaminato 37 feti: 20 (54,1%) rispetto ai 17 (45,9%) come controllo. Poiché la trachea non poteva essere occlusa in 4 feti nel gruppo TO, sono stati esclusi dallo studio. Non c'era alcuna differenza significativa nella mortalità in entrambi i gruppi: 4 feti (25%) nel gruppo TO e 2 feti (12%) nel gruppo di controllo (p=0,334, odds ratio (OR) 2,5, intervallo di confidenza del 95% (CI) 0,39-16,05). Il peso corporeo medio, il peso polmonare e il rapporto peso polmonare/corpor.......

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Discussione

Questo metodo descrive una procedura chirurgica di occlusione tracheale fetale nei topi e il suo impatto sullo sviluppo polmonare. Ci sono alcuni passaggi critici nel protocollo che dovrebbero essere eseguiti con attenzione per avere successo. Il calore della piattaforma su cui avviene l'intervento chirurgico e la soluzione salina introdotta nella cavità peritoneale è fondamentale per la progressione della gravidanza. Inoltre, è necessario applicare una leggera pressione sulla testa dei cuccioli per garantire l'esposizio.......

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Dichiarazioni

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Ringraziamenti

Questa ricerca non ha ricevuto alcuna sovvenzione specifica dalle agenzie di finanziamento nei settori pubblico, commerciale o senza scopo di lucro. Tutti gli autori hanno dato contributi sostanziali all'ideazione e alla progettazione dello studio, all'acquisizione, all'analisi e all'interpretazione dei dati, redigendo l'articolo e rivederlo per importanti contenuti intellettuali e approvazione finale della versione da presentare. Gli autori ringraziano Can Sabuncuoğlu per i suoi gentili sforzi nella produzione dell'opera d'arte della tecnica chirurgica.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Buprenorfina Par PharmaceuticalNDC 42023-179-05Per anestesia regionale
Isoflurano   Halocarbon Life SciencesNDC 66794-017-25Per anestesia generale
Occhiali di ingrandimentoUSA Medico-chirurgicoSLR-250LBLKAlmeno 2,5x
Nikon 90i microscopioNikon3417Fluorescenza motorizzata
Nucleospin Tissue Kit Macherey-Nagel, Dü ren, Germania740952.5
Kit di analisi delle proteine Pierce BCA per l'isolamento del DNA Thermo Fisher, IL, USA23225Quantificazione delle proteine
Sutura in poliglactinaEthiconVCP451H4-0, 24 mm, taglio
di vetrini in polilisina VWR48382-117Vetrini di adesione per microscopio
Sutura in polipropileneEthiconY432H6-0, 13 mm 1/2c Taperpoint
RIPA tampone Sigma-Aldrich, Missouri, USAR0278-50mlIsolamento proteico
Sutura di setaEthiconVCP682G4-0, 24 mm, taglio
Trizol Invitrogen 15596026Isolamento dell'RNA

Riferimenti

  1. Wright, N. J. Global PaedSurg Research Collaboration. Management and outcomes of gastrointestinal congenital anomalies in low, middle and high income countries: protocol for a multicentre, international, prospective cohort study. BMJ Open. 9, 030452(2019).
  2. Aydin, E.

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Ristampe e permessi

Tag

Ernia diaframmatica congenitamodello transuterinosviluppo polmonarelegatura trachealerapporto tra peso del polmone e peso corporeoanalisi istologicaanalisi proteica e del DNAsezione al criostatocolorazione con ematossilina ed eosina