Articolo metodologico

Crioconservazione degli ovociti recuperati dal tessuto ovarico per ottimizzare la conservazione della fertilità nelle ragazze e nelle donne in età prepuberale

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DOI:

10.3791/61777

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23 ottobre 2020

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Développement Embryonnaire Précoce Humain et Pluripotence, Univ Montpellier, INSERM 1203, 2Département de Biologie de la Reproduction, Biologie de la Reproduction/DPI et CECOS, CHU Montpellier, Univ Montpellier, 3Centre d'AMP-CECOS, CHU Grenoble-Alpes, Univ Grenoble-Alpes

In questo articolo

Sommario

Proponiamo un protocollo per la preservazione della fertilità nelle ragazze in età prepuberale e nelle donne a rischio di insufficienza ovarica prematura. Combina il congelamento del tessuto ovarico e la crioconservazione degli ovociti recuperati dal tessuto ovarico. Questa strategia migliora la sicurezza e ottimizza il potenziale riproduttivo della conservazione della fertilità, massimizzando le possibilità di parto.

Abstract

La crioconservazione del tessuto ovarico umano (OTC) è sempre più utilizzata in tutto il mondo per preservare la fertilità femminile nelle ragazze in età prepuberale e nelle donne a rischio di insufficienza ovarica prematura (POI) nel contesto di trattamenti gonadotossici urgenti o di chirurgia ovarica. La preservazione della fertilità è impegnativa perché non c'è consenso sulla gestione del paziente, sulle strategie di preservazione della fertilità o persino sui protocolli tecnici di laboratorio, il che implica che ogni procedura deve essere adattata alle caratteristiche del profilo del paziente e al proprio rapporto rischio-beneficio. Durante l'OTC, gli ovociti maturi/immaturi possono essere aspirati direttamente da follicoli antrali grandi/piccoli all'interno di campioni di tessuto ovarico e/o essere rilasciati in terreni di coltura da follicoli in crescita durante la dissezione del tessuto ovarico in ragazze e donne in età prepuberale. In questo manoscritto, presentiamo un protocollo che combina il congelamento del tessuto ovarico con la crioconservazione di ovociti maturi/immaturi recuperati da campioni di tessuto ovarico, migliorando il potenziale riproduttivo della conservazione della fertilità. Verranno descritte la raccolta, la manipolazione e la conservazione appropriate del tessuto ovarico e degli ovociti prima, durante e dopo la crioconservazione. Verranno inoltre discussi il successivo utilizzo e la sicurezza di campioni di tessuto ovarico crioconservato/scongelato e di ovociti, nonché la tempistica ottimale per la maturazione in vitro di ovociti immaturi. Raccomandiamo l'uso sistematico di questo protocollo nella preservazione della fertilità delle ragazze e delle donne in età prepuberale in quanto aumenta l'intero potenziale riproduttivo della conservazione della fertilità (ad esempio, la vitrificazione degli ovociti in aggiunta all'OTC) e migliora anche la sicurezza e l'uso della conservazione della fertilità (ad esempio, lo scongelamento degli ovociti rispetto al trapianto ovarico), massimizzando le possibilità di successo del parto per le pazienti a rischio di POI.

Introduzione

Il campo della preservazione della fertilità è cresciuto negli ultimi due decenni a causa del crescente numero di pazienti a rischio di insufficienza ovarica prematura (POI)1,2,3. Le opzioni mediche attualmente disponibili per preservare la fertilità sono la crioconservazione del tessuto ovarico (OTC)4, il congelamento di ovociti/embrioni dopo stimolazione ovarica5, la somministrazione di analoghi del GnRH6 o la trasposizione ovarica7. L'OTC è un importante progresso per la conservazione della fertilità, in particolare nelle ragazze in età prepuberale, dove è l'unica opzione attualmente disponibile per preservare la fertilità e anche nelle donne che non possono ritardare l'inizio del loro trattamento gonadotossico 2,4.

L'OTC consente la conservazione di un numero elevato di follicoli primordiali, che si trovano nell'1 mm esterno della corteccia ovarica2. Il tessuto ovarico congelato/scongelato può essere successivamente utilizzato mediante trapianto (ortotopico o eterotopico, autologo o donatore) o coltivato in vitro per ottenere ovociti maturi2. È stato dimostrato che l'innesto di campioni di tessuto ovarico prepuberale congelato-scongelato induce la pubertà 8,9. Nelle donne, gli esiti riproduttivi dopo l'autotrapianto ortotopico della corteccia ovarica congelata-scongelata sono rassicuranti, con tassi di natalità che raggiungono il 57,5% dopo i concepimenti naturali10 e tra il 30% e il 70% dopo i concepimenti con tecniche di riproduzione assistita (ART)11. Dalla prima nascita viva da trapianto ortotopico di tessuto ovarico umano congelato/scongelato nel 200412, questa tecnica ha permesso la nascita di almeno 130 bambini in tutto il mondo2. Le funzioni ormonali e riproduttive del tessuto dell'innesto durano generalmente per diversi anni 11,13,14, confermando la sua funzionalità a lungo termine.

Tuttavia, l'autotrapianto di campioni di tessuto ovarico comporta un rischio teorico di reintroduzione di cellule maligne vitali in alcune pazienti 15,16,17,18, in particolare nelle sopravvissute alla leucemia 19. Ad oggi, non è stato riportato alcun caso di trasmissione del cancro attraverso l'innesto di corteccia ovarica congelata/scongelata in sopravvissute al cancrosane 11, suggerendo che la natura fibrosa avascolare della corteccia ovarica potrebbe rappresentare un microambiente inospitale per la disseminazione di cellule maligne. Tuttavia, l'innesto di tessuto ovarico rappresenta ancora una tecnica sperimentale e impegnativa, indicando che l'uso di ovociti dovrebbe essere attualmente considerato come un approccio più facile e sicuro rispetto all'innesto di tessuto ovarico per ripristinare la fertilità. È interessante notare che gli ovociti immaturi potrebbero essere facilmente recuperati dal tessuto ovarico durante l'OTC sia nelle ragazze in età prepuberale che nelle donnedi 16 anni, suggerendo che potrebbe rappresentare una fonte affidabile per massimizzare il potenziale di ripristino della fertilità oltre al congelamento del tessuto corticale ovarico. Questi ovociti potrebbero essere aspirati manualmente ex vivo nel laboratorio di PMA da follicoli antrali visibili o essere isolati da terreni esauriti dopo la dissezione del tessuto ovarico. Gli ovociti recuperati potrebbero quindi essere vitrificati direttamente in uno stadio immaturo o essere maturati prima della fase di vitrificazione utilizzando la maturazione in vitro (IVM)20,21.

In questo manoscritto, proponiamo un protocollo che combina la crioconservazione del tessuto ovarico con l'isolamento e la crioconservazione di ovociti maturi (ovociti allo stadio MII) e/o immaturi (ad esempio, ovociti allo stadio della vescicola germinale (GV) e della metafase I (MI)) recuperati dal tessuto ovarico. Questo protocollo delinea tutti i passaggi specifici necessari per massimizzare il potenziale di conservazione della fertilità sia nelle ragazze in età prepuberale che nelle donne.

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Protocollo

Tutte le donne (di età superiore ai 18 anni), così come tutte le ragazze minorenni e i loro genitori hanno firmato un modulo di consenso informato per preservare la fertilità del paziente a rischio di POI. Questo protocollo è considerato come una procedura di riproduzione assistita di routine nel nostro centro per la conservazione della fertilità. Segue le linee guida del comitato etico per la ricerca umana delle nostre istituzioni.

1. Controllo di qualità

  1. Includono donne di età ≤ 38 anni, contenenti una concentrazione di ormone antimulleriano circolante >1 ng/mL e che mostrino la presenza di un aumentato rischio di POI a causa del trattamento gonadotossico. Escludere le donne idonee alla vitrificazione degli ovociti per la procedura di preservazione della fertilità, le donne con una condizione che impedisce di dare un consenso pienamente informato o le donne con un alto rischio di complicanze da anestesia o chirurgia.
  2. Confermare la presenza di un consenso firmato del paziente prima di iniziare questa procedura.
  3. Identificare due posizioni libere all'interno di due distinti serbatoi di stoccaggio per crioconservazione. Metà delle crioprovette/paillettes sarà conservata nel primo serbatoio di stoccaggio, mentre l'altra metà delle crioprovette/cannucce sarà conservata nell'altro serbatoio per ridurre al minimo il rischio di una perdita totale dei campioni in caso di guasto del serbatoio.
  4. Verificare la disponibilità e la funzionalità di tutti i dispositivi medici richiesti in questo protocollo. Per la fase di dissezione si consigliano forbici da dissezione chirurgiche sterili con lame diritte affilate e punte finemente affilate, nonché pinze tissutali sterili atraumatiche.
  5. Verificare che tutte le fasi di controllo della qualità siano state rispettate per tutti i dispositivi medici (in particolare, convalida e controllo di routine dei processi di sterilizzazione, verifica della scadenza/numero di lotto e tracciabilità).
  6. Mantenere un ambiente asettico/sterile durante tutta la procedura e realizzare con cautela tutte le precauzioni di sicurezza.
  7. Utilizzare piatti, pipette e strumenti chirurgici diversi per ogni paziente.

2. Il giorno prima della conservazione

  1. Preparare una piastra di Petri sterile per fecondazione in vitro da 60 mm contenente un terreno di coltura in vitro ricoperto di olio minerale e incubare la piastra per una notte a 37 °C in un'atmosfera di 5% O2 e 5% CO2. Utilizzare questa capsula per raccogliere i complessi cumulo-ovociti (COC) che saranno potenzialmente recuperati dal tessuto (vedere paragrafo 7.2).
  2. Preparare una piastra di Petri sterile da 35 mm contenente terreno di fecondazione in vitro e incubare la piastra per una notte a 37 °C in un'atmosfera di 5% O2 e 5% CO2. Utilizzare questa capsula per la fase di denudazione degli ovociti (vedere paragrafo 9.1).
  3. Preparare una capsula di Petri sterile da 35 mm contenente terreno di fecondazione in vitro ricoperta di olio minerale e incubare la capsula per una notte a 37 °C in un'atmosfera di 5% O2 e 5% CO2. Utilizzare questa piastra per raccogliere gli ovociti dopo la fase di denudazione (vedere paragrafo 9.4).

3. Raccolta e trasporto del tessuto ovarico

  1. Eseguire l'intervento laparoscopico in anestesia generale utilizzando una porta da 10 mm posizionata all'ombelico e due porte da 5 mm, una posizionata al quadrante sinistro-inferiore e un'altra posizionata a destra.
  2. Eseguire un'ovariectomia unilaterale parziale o completa secondo la decisione consensuale dell'oncologo, del chirurgo e del personale medico dell'unità di ART in base alla riserva ovarica, alle dimensioni e all'aspetto macroscopico di entrambe le ovaie (Figura 1, A1-B1) e al protocollo gonadotossico pianificato. Eseguire l'ovariectomia con forbici affilate o una graffetta chirurgica. Non utilizzare alcun dispositivo di dissezione che possa indurre lesioni collaterali, elettriche o termiche al tessuto ovarico che deve essere preservato.
    NOTA: Un'ovariectomia unilaterale completa viene generalmente eseguita nelle ragazze in età prepuberale16,22, mentre un'ovariectomia unilaterale parziale potrebbe essere comunemente eseguita in pazienti adulte con ovaie grandi e/o un'elevata riserva ovarica.

Processo di dissezione e sezionamento delle ovaie; le immagini mostrano ovaio, pezzi di SAF, corteccia, midollo, CL.
Figura 1: Crioconservazione del tessuto ovarico. Crioconservazione del tessuto ovarico in una bambina in età prepuberale (A, paziente di 7 anni) e in una donna (B, paziente di 28 anni) entrambe affette da leucemia mieloide acuta. (A1-B1) Vista laparoscopica dell'ovaio. (A2-B2-B3) Dissezione del tessuto ovarico. (B4) Tessuto ovarico corticale. CL: corpo luteo. SAF: piccolo follicolo antrale. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

  1. Eseguire l'evacuazione del tessuto ovarico utilizzando una sacca per il recupero dei campioni laparoscopici fatta a mano o in commercio.
  2. Mettere il tessuto ovarico in una provetta sterile contenente terreno di coltura a 4 °C. Il tessuto deve essere completamente immerso nel terreno di coltura.
  3. Trasportare immediatamente il tessuto ovarico in una busta isolante a 4 °C al laboratorio ART per ottenere risultati ottimali.
    NOTA: Se necessario, il tessuto ovarico può essere trasportato a basse temperature (circa 4 °C) in laboratorio per un massimo di 26 ore dopo il prelievo senza compromettere la qualità del tessuto23.

4. Preparazione del tessuto ovarico

  1. Trasferire il tessuto ovarico in una piastra Petri sterile per fecondazione in vitro da 90 mm contenente 20 ml di terreno di coltura pre-raffreddato a 4 °C.
  2. Porre la capsula di Petri contenente il tessuto ovarico su una piastra fredda (a 4 °C) posta su un banco pulito a flusso laminare verticale per ridurre al minimo il rischio di contaminazione da microrganismi.

5. Aspirazione manuale dei follicoli da campioni di tessuto ovarico

  1. Aspirare i follicoli antrali visibili (se presenti sulla superficie del tessuto ovarico) con un ago per siringa da 21 G collegato a una siringa monouso da 1 mL.
    NOTA: Questo passaggio potrebbe essere complicato. Un'alternativa può essere quella di aprire delicatamente ogni follicolo antrale visibile con un bisturi e sciacquare l'interno di ciascun follicolo con terreni di fecondazione in vitro per rilasciare delicatamente i COC all'interno del terreno di dissezione.
  2. Lavare i liquidi follicolari raccolti in una piastra di Petri sterile da 60 mm contenente 5 ml di terreno di coltura per fecondazione in vitro a temperatura ambiente.
  3. Sciacquare la siringa con 1 ml di terreno di coltura per fecondazione in vitro a temperatura ambiente e sciacquare il liquido nella stessa piastra di Petri per fecondazione in vitro. Ripetere questo passaggio due volte.
  4. Identificare e isolare i COC al microscopio invertito (ingrandimento 50x-200x).
  5. Trasferire i COC sani con una pipetta in una nuova piastra di Petri sterile da 60 mm contenente terreno di fecondazione in vitro pre-bilanciato ricoperta di olio a 37 °C in un'atmosfera del 5% di O2 e del 5% di CO2.
    NOTA: I COC sani contengono un ovocita traslucido. Scartare le COC atretiche che presentano un ovocita di colore marrone.
  6. Conservare la capsula di Petri per la fecondazione in vitro nell'incubatrice a 37 °C in un'atmosfera del 5% di O2 e del 5% di CO2 fino alla fase di denudazione (vedere la fase 9).

6. Dissezione del tessuto ovarico

  1. Preparare la soluzione di congelamento fresca in una provetta sterile da 50 ml. La soluzione di congelamento contiene 1,5 M di dimetilsolfossido (DMSO) e il 10% di albumina sierica umana nel terreno di coltura IVF. Vortice dolce.
    NOTA: Deve essere preparato appena prima dell'uso.
  2. Tagliare il tessuto ovarico e rimuovere il midollo il più possibile (Figura 1, B4).
  3. Tagliare la corteccia ovarica in fette di 10 mm x 10 mm x 1 mm o 0,5 mm x 0,5 mm x 1 mm in caso di ovariectomia unilaterale completa o parziale, rispettivamente (Figura 1, A2-B2-B3). Il taglio viene eseguito con forbici chirurgiche sterili affilate e pinze atraumatiche.
    NOTA: Una fetta di tessuto ovarico viene mantenuta intatta con la corteccia ovarica e il midollo per ulteriori analisi istologiche (vedi passaggio 8).
  4. Dopo la dissezione, eseguire due fasi di lavaggio (o più, se necessario) per ciascun campione corticale ovarico in 1 ml di terreno di coltura IVF per rimuovere il sangue. Dopo il lavaggio, trasferire tutti i campioni di tessuto in una nuova piastra di Petri da 60 mm con terreno di coltura FIV fresco.
  5. Mettere ogni campione corticale ovarico in una crioprovetta contenente 1 mL di soluzione di congelamento.
    NOTA: La miscelazione non è necessaria. La fetta di tessuto ovarico conservata per ulteriori analisi istologiche non viene crioconservata (vedi passaggio 8).
  6. Conservare i campioni per 30 minuti a 4 °C per equilibrarli con la soluzione di congelamento.
  7. Crioconservare tutti i campioni con una tecnica di congelamento lento. La velocità di raffreddamento è di -2 °C/min da +4 °C a -9 °C, da -50 °C/min a -30 °C; mantenere la tenuta per 1 min, +4 °C/min fino a -15 °C, -2 °C/min fino a -40 °C; e infine -25 °C/min fino a -150 °C utilizzando un congelatore programmabile.
  8. Rimuovere immediatamente i criotubi e immergerli nell'azoto liquido a -196 °C.
  9. Posizionare metà delle crioprovette in un primo serbatoio di stoccaggio di azoto liquido e l'altra metà delle crioprovette in un secondo serbatoio di azoto liquido.

7. Isolamento manuale del COC dal terreno di dissezione esaurito

  1. Identificare i COC dal terreno di dissezione esaurito al microscopio (ingrandimento 50x-200x) (Figura 2).

Fasi di maturazione degli ovociti; Immagini al microscopio con cumulo marcato, corona radiata, ovociti atretici.
Figura 2: COC maturi e immaturi recuperati dal tessuto ovarico. COC maturi (A) e immaturi (B1-B3, C1-C2) recuperati dal tessuto ovarico. (A) COC maturo contenente un ovocita maturo (presenza del primo globulo polare, ovocita allo stadio di metafase II). (B1) COC immaturo sano contenente un ovocita immaturo (nessun globulo polare, ovocita allo stadio di metafase I). (B2-B3) COC immaturi sani contenenti ovociti immaturi allo stadio vescicolare germinale (senza globuli polari, ovociti allo stadio Prophase I). (C1-C2) COC malsani contenenti un ovocita atretico di colore marrone. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

  1. Trasferire i COC sani con una pipetta in una nuova piastra Petri sterile da 60 mm contenente terreno di fecondazione in vitro pre-bilanciato ricoperta di olio a 37°C in un'atmosfera del 5% di O2 e del 5% di CO2 (vedere il passaggio 2.1).
    NOTA: Scartare i COC atretici.
  2. Conservare la capsula di Petri per la fecondazione in vitro nell'incubatrice a 37 °C in un'atmosfera del 5% di O2 e del 5% di CO2 fino alla fase di denudazione (vedere la fase 9).

8. Analisi istologica del tessuto ovarico

  1. Fissare la fetta rimanente di tessuto ovarico (contenente sia la corteccia ovarica che il midollo) in una soluzione di formalina al 3% in un banco chimico pulito per l'esame istologico.
    NOTA: Dovrebbe essere eseguito solo una volta che i campioni corticali sono stati congelati e conservati con successo.
    ATTENZIONE: La soluzione di formalina è irritante, corrosiva e tossica. Questo passaggio deve essere eseguito con attenzione e al di fuori del laboratorio di fecondazione in vitro.
  2. Prescrivere un'analisi istologica completa di questo campione di tessuto ovarico con una valutazione della potenziale presenza di cellule maligne e una descrizione del numero e del tipo di follicoli ovarici (cioè follicoli primordiali, primari, secondari e antrali, rispettivamente).

9. Denudazione e selezione degli ovociti

  1. Eseguire la denudazione degli ovociti. Esporre brevemente i COC alla soluzione di ialuronidasi (80 UI/mL o concentrazione finale 0,1 mg/mL) con un pipettaggio delicato (aspirazione ed espulsione ripetute dei COC nella soluzione di denudazione) utilizzando un puntale per pipetta di grande diametro (volume 0,1-20 μL, lunghezza: 40,5 mm, diametro del cono di lavoro: 6 mm, diametro dell'apertura: 0,36 mm) per 30 s, immediatamente seguito da due fasi di lavaggio in terreno pre-bilanciato coperto di olio minerale per rimuovere l'enzima in eccesso (vedere passaggio 2.1).
  2. Ottimizzare la rimozione delle cellule del cumulo e della corona radiata mediante pipettaggio delicato utilizzando un puntale per pipetta da 150 μm in terreno di fecondazione in vitro pre-bilanciato (vedere il passaggio 2.1).
  3. Eseguire una fase di selezione degli ovociti sani utilizzando un microscopio invertito (ingrandimento 200x-400x). Lo stadio di maturazione degli ovociti sani potrebbe essere costituito da ovociti allo stadio GV, MI o MII (Figura 3). Gli ovociti sani hanno le seguenti caratteristiche morfologiche: un citoplasma intatto e rotondo, una dimensione compresa tra 100 e 150 μm e un colore pallido.
    NOTA: Scartare gli ovociti atretici e non sani (Figura 3, D1-D3).

Immagini al microscopio delle fasi di maturazione degli ovociti; vescicola germinale (GV) identificata in alcune cellule.
Figura 3: Ovociti maturi e immaturi recuperati dal tessuto ovarico. (A) Ovociti maturi (Ovocita allo stadio di metafase II: presenza del primo globulo polare (PB, freccia), nessun nucleo visibile), (B1-B2) Ovociti immaturi (Ovocita allo stadio di metafase I: nessun corpo polare, nessun nucleo visibile), (C1-C3) Ovociti immaturi (Ovociti allo stadio vescicolo germinale (VG): nessun corpo polare, presenza di un grande alone con nucleoli all'interno del citoplasma (freccia)). In C1, gli ovociti allo stadio vescicole germinale mostrano dimensioni eterogenee. (D1-D3) Ovociti atretici. PB: Corpo polare. GV: Vescicola germinale. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

  1. Incubare gli ovociti sani all'interno dell'incubatore a 37 °C, 5% O2 e 5% CO2 fino alla fase di vitrificazione (vedere passaggio 2.1).

10. Vitrificazione degli ovociti

  1. Confermare l'identificazione del paziente/campione.
  2. Eseguire una nuova fase di selezione degli ovociti sani utilizzando un microscopio invertito (ingrandimento 200x-400x).
    NOTA: Scartare gli ovociti atretici e non sani.
  3. Scatta una foto di ogni ovocita sano usando un microscopio invertito appena prima della fase di vitrificazione. Prendere nota dello stadio di maturazione di ciascun ovocita.
    NOTA: Allegare tutti questi dati (immagine, dimensioni, stadio di maturazione) nella cartella del paziente.
  4. Utilizzare numeri di identificazione diversi per paillette per differenziarli se si crioconserva più di una paillette per paziente.
  5. Crioconservare uno o due ovociti per pailette.
    NOTA: Gli ovociti vitali maturi e immaturi devono essere crioconservati separatamente. Quando si crioconservano due ovociti insieme nella stessa pailetta, si consiglia di selezionare ovociti con caratteristiche morfologiche simili.
  6. Crioconservare gli ovociti sani utilizzando un kit di vitrificazione secondo le istruzioni del produttore (vedi Tabella dei materiali).
  7. Caricare gli ovociti crioconservati su un dispositivo appropriato per la crioconservazione in azoto liquido secondo le istruzioni del produttore (vedi Tabella dei materiali).
  8. Mettere metà delle cannucce in un primo serbatoio di stoccaggio dell'azoto liquido e l'altra metà delle cannucce in un secondo serbatoio dell'azoto liquido.

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Risultati

Tra il 2007 e il 2020 sono stati eseguiti un totale di 81 OTC da 81 pazienti di sesso femminile, tra cui 43 ragazze in età prepuberale e 38 donne. L'età media delle pazienti di sesso femminile (ragazze e donne in età prepuberale) era di 14,21 ± 9,61 anni (errore medio ± standard). Il paziente più giovane aveva 5 mesi e il più anziano 33,6 anni (Tabella 1). L'età media delle ragazze e delle donne in età prepuberale era rispettivamente di 6,84 ± 4,81 anni (min-max: 0,5-15,1) e 22,76 ± 5,92 anni (min-max: 1...

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Discussione

Il presente manoscritto fornisce un protocollo che combina il congelamento del tessuto ovarico e la crioconservazione degli ovociti recuperati dal tessuto ovarico, aumentando il potenziale di fertilità nelle ragazze in età prepuberale e nelle donne a rischio di POI. Si consiglia vivamente di eseguire questo protocollo prima dell'inizio di qualsiasi terapia gonadotossica al fine di ottimizzare la quantità (cioè il numero di ovociti vitali) e la qualità (cioè l'integrità del DNA e la compe...

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Dichiarazioni

Nessuno degli autori ha interessi concorrenti.

Ringraziamenti

Ringraziamo tutti i membri dei nostri centri coinvolti nell'attività di preservazione della fertilità (ginecologi, biologi, oncologi e anatomopatologi). Lo studio è stato condotto nell'ambito delle procedure di routine per la conservazione della fertilità. Non è stato ricevuto alcun finanziamento.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Siringa monouso da 1 mlCDD1323101/7002655Possono essere adatti anche altri materiali e dimensioni
Ago per siringa calibro 21MerckZ192481Altri materiali e dimensioni possono essere adatti Piastra
di Petri per fecondazione in vitro da 35 mmNunc150255Possono essere adatti anche Altri materiali e dimensioni Piastra
Petri per fecondazione in vitro da 60 mmNunc150270Altri materiali e dimensioni possono anche essere adatto
90 mm FIVET Petri DishNunc150360Altri materiali e dimensioni possono essere adatti anche
Pinze atraumaticheMedlanePI 299 04Altri materiali e dimensioni possono essere adatti Anche
Coltura singola continua Completa di HSAIrvine Scientific90165Terreno di coltura FIV per la raccolta del liquido follicolare, l'incubazione dei COC, la denudazione degli ovociti e l'incubazione degli ovociti fino alla fase di vitrificazione.
CryotubeThermo Scientific368632Altri prodotti possono essere adatti anche
Dimetilsolfossido (DMSO)MILTENYI BIOTEC SAS170-076-303CryoMACS DMSO 10 (EP)
GT40Air Liquide1,13,517Serbatoio di stoccaggio
HSV Vitrificazione ad alta sicurezza StrawIrvine Scientific25251Paillettes di vitrificazione Albumina
sierica umanaVitrolife10064Possono essere adatti anche altri prodotti
Leibovitz L15 mediumEurobioCM1L15000UTerreno di coltura per la raccolta, il trasporto e la dissezione di tessuti ovarici
Leibovitz L15 mediumEurobioCM1L15000UTerreno di coltura per soluzione di congelamento
Mars-IVF Class II Workstation/L126 IVF DualCooperSurgicalWM1500/6-133-911-121Workstation
Congelatore programmabilePlanner KRYO 500Kryo 560-16Possono essere adatte anche altre attrezzature
Forbici con lame dritte affilate e punte finemente affilateMedlaneCI 034 03Possono essere adatti anche altri materiali e dimensioni
StripperCooperSurgicalMXL3-STR-CGRAltri prodotti possono essere adatti
Punte (150µ m) per StripperCooperSurgicalMXL3-150Altri prodotti possono essere adatti Kit
di VitrificazioneIrvine Scientific90133I protocolli sono disponibili all'indirizzo http://www.irvinesci.com/products/90133-so-vitrification-freeze-solutions. Altri prodotti possono essere adatti
di

Riferimenti

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