Analisi delle reti linfatiche e sanguigne durante l'obesità

Rafael  S Czepielewski; Alexandre Gallerand; Jérôme Gilleron; Narges Khedher; Gwendalyn  J. Randolph; Stoyan Ivanov

doi:10.3791/61814

Articolo metodologico

Analisi delle reti linfatiche e sanguigne durante l'obesità

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DOI:

10.3791/61814

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19 novembre 2020

Rafael S Czepielewski^*¹ , Alexandre Gallerand^*²^,³ , Jérôme Gilleron²^,⁴ , Narges Khedher²^,³ , Gwendalyn J. Randolph¹ , Stoyan Ivanov²^,³

¹Department of Pathology and Immunology, Washington University School of Medicine, ²Université Côte d'Azur, ³Mediterranean Center of Molecular Medicine C3M, Team 13, Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (Inserm) UMR1065, ⁴Mediterranean Center of Molecular Medicine C3M, Team 7, Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (Inserm) UMR1065

^* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

L'obesità è un problema di salute pubblica globale in crescita. È stato precedentemente associato a disfunzione linfatica, suggerendo un crosstalk vitale tra il tessuto adiposo e il sistema linfatico. Qui, proponiamo una metodologia accessibile che consente la marcatura distinta del sangue e dei vasi linfatici all'interno del tessuto adiposo sottocutaneo.

Abstract

I vasi riceventi linfatici e i linfonodi sono inevitabilmente incorporati nel tessuto adiposo. Il significato fisiologico di questa osservazione non è ancora stato chiarito. Tuttavia, l'obesità è caratterizzata da una funzione linfatica compromessa e da un aumento della permeabilità dei vasi. Al contrario, la disfunzione linfatica induce obesità nei topi, suggerendo una significativa interazione tra i vasi linfatici e il tessuto adiposo. Pertanto, la comprensione dei fattori che portano alla disfunzione linfatica potrebbe aprire nuove finestre terapeutiche per prevenire l'obesità e le comorbidità associate. Il primo passo di questo processo richiede una visualizzazione precisa e dettagliata della rete linfatica nel tessuto adiposo sano e infiammato. Qui descriviamo un metodo rapido, economico ed efficiente che consente di marcare e analizzare i vasi linfatici e sanguigni. Questo approccio sfrutta la localizzazione dei linfonodi brachiali drenanti della pelle all'interno del tessuto adiposo sottocutaneo. L'arborizzazione linfatica di questo tessuto può essere rivelata iniettando lectine coniugate con fluorocromo per via sottocutanea. Inoltre, l'approccio di marcatura in vivo fornisce un modo per valutare la densità e le funzioni dei vasi linfatici. Accoppiato alla colorazione dei vasi sanguigni, degli adipociti e delle cellule immunitarie, il protocollo consente la mappatura ad alta risoluzione del tessuto adiposo sottocutaneo mediante imaging 3D.

Introduzione

Il sistema circolatorio linfatico svolge un ruolo cruciale nel mantenimento dell'omeostasi tissutale e nell'induzione di risposte immunitarie efficienti. I vasi linfatici corrono paralleli ai vasi sanguigni e trasportano il liquido interstiziale, i metaboliti e le cellule immunitarie al linfonodo drenante locale (LN) e infine verso la circolazione venosa¹. Il drenaggio linfatico disfunzionale è stato osservato durante l'infezione, l'infiammazione e le malattie metaboliche 2,3,4,5. La....