Conservazione della fertilità attraverso la vitrificazione degli ovociti: prospettive cliniche e di laboratorio

Sommario

La crioconservazione degli ovociti è riconosciuta da diverse società scientifiche internazionali come il gold standard per la conservazione della fertilità nelle donne postpuberali. Adeguate strategie cliniche e di laboratorio garantiscono la massima efficacia, efficienza e sicurezza dei trattamenti di conservazione della fertilità.

Abstract

Preservare la fertilità femminile è fondamentale in un sistema sanitario multifunzionale che si prende cura della futura qualità della vita dei pazienti. La crioconservazione degli ovociti è riconosciuta da diverse società scientifiche internazionali come il gold standard per la conservazione della fertilità nelle donne postpuberali, sia per indicazioni mediche che non mediche. Le principali indicazioni mediche sono le malattie oncologiche, le malattie ginecologiche come l'endometriosi grave, le malattie sistemiche che compromettono la riserva ovarica e le condizioni genetiche che comportano la menopausa precoce. Questo documento descrive l'intero work-up clinico e di laboratorio di un trattamento di conservazione della fertilità delineando raccomandazioni per una consulenza obiettiva e basata sull'evidenza. Inoltre, si concentra sull'efficacia della procedura e descrive le strategie più appropriate per sfruttare appieno la riserva ovarica e massimizzare il numero di ovociti recuperati nel più breve tempo possibile. La valutazione della riserva ovarica, la definizione di un protocollo di stimolazione ideale, nonché le procedure di prelievo degli ovociti, denudazione e vitrificazione sono state dettagliate insieme agli approcci per massimizzarne l'efficacia, l'efficienza e la sicurezza.

Introduzione

Lo sviluppo e l'implementazione di un efficiente programma di crioconservazione per gli ovociti umani è stato un passo avanti significativo nella medicina riproduttiva. Secondo recenti evidenze, la vitrificazione è la strategia più efficace per crioconservare gli ovociti della metafase II (MII), in quanto si traduce in tassi di sopravvivenza statisticamente più elevati rispetto al congelamento lento, indipendentemente dalla popolazione di pazienti (pazienti infertili o programma di donazione di ovociti)^1,2,3. I notevoli risultati della vitrificazione degli ovociti hanno porta....

Protocollo

1. Work-up e consulenza clinica

NOTA: Nel caso di pazienti che richiedono la conservazione della fertilità per motivi oncologici, assicurarsi che non vi sia alcuna lista d'attesa per la pianificazione della consultazione e che l'appuntamento sia fornito il prima possibile.

1. Esaminare la storia medica e la documentazione precedente e valutare lo stato di salute generale del paziente.
2. Registrare tutte le informazioni (compresa l'approvazione dell'oncologo a sottoporsi a stimolazione ovarica in caso di pazienti oncologiche) in un database relazionale.
3. Fornire al paziente una consulenza specifica sulla fattibilità d....

Risultati

Panoramica del programma di conservazione della fertilità al centro

In un periodo di 12 anni (2008-2020), 285 donne sono state sottoposte ad almeno un prelievo di ovociti che ha comportato la vitrificazione dell'intera coorte di ovuli maturi raccolti. La maggior parte di queste donne (n = 250) ha subito un singolo recupero e 35 hanno subito più recuperi. Le ragioni per sottoporsi al prelievo di ovociti per la vitrificazione degli ovuli sono riassunte in 4 categorie: medico (ad.......

Discussione

Considerazioni cliniche

Sebbene siano state esplorate strategie emergenti, come la crioconservazione del tessuto ovarico e la maturazione in vitro, la vitrificazione degli ovociti dopo COS è la tecnica gold standard per la conservazione della fertilità. In questo scenario, il numero di ovociti recuperati e crioconservati dovrebbe essere massimizzato nel più breve tempo possibile poiché la maggior parte dei pazienti oncologici potrebbe beneficiare esclusivamente di un ciclo ov.......

Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo

Nome	Azienda	Numero di catalogo	Commenti
Collection
Equipment
Piastra calda	IVF TECH
Marcatori da laboratorio	Sigma Aldrich
Cappa a flusso laminare	IVF TECH		Stereomicroscopio a flusso d'aria di grado A
	Leica	Leica M80
Termometro
Provetta Scaldavivande
Tri-gas incubatore	Panasonic	MCO-5M-PE	02/CO2
Pompa per vuoto	Cook	K-MAR-5200
Materiali di consumo
CSCM (Coltura singola continua completa) medio	Fujifilm Irvine Scientific	90165	Terreno di coltura IVF integrato con olio minerale HSA
per coltura embrionale	Fujifilm Irvine Scientific	9305
Ago per aspirazione ovuli (lume singolo)	Cook	K-OSN-1730-B-60
Piatto Primaria	Corning	353803	Piatto Corning Primaria Piatto per coltura cellulare standard stile 100x20 mm
Tubi a fondo tondo	Falcon	352001	Falcon 14ml Provetta in polistirene a fondo tondo con tappo a scatto
Provette a fondo tondo	Falcon	352003	Provette per la raccolta degli ovociti/ Falcon 5ml 12x75 Provetta in polipropilene a fondo tondo con tappo a scatto
Bulbo in gomma	Sigma Aldrich	Z111589-12EA
Pipette sterili in vetro Pasteur	Hunter Scientific	PPB150-100PL	Pipetta Pasteur Cotonate, 150mm, MEA e CE
Denudation
Equipment
CO2 incubatore	Eppendorf	Galaxy 14S
Flexipet set di maniglie regolabili	Cook	G18674	Stripper  supporto
Gilson Pipetman	Gilson	66003	p20
Incubatore k-System	Coopersurgical	G210Invicell
Marcatori da laboratorio	Sigma Aldrich
Cappa a flusso laminare	IVF TECH		Stereomicroscopio a flusso d'aria di grado A
	Leica	Leica M80
Consumabili
Biopur epTIPS Rack	Eppendorf	30075331	Micropipette epTIPS Biopur 2-200 &; micro; l
Albumina sierica umana	thermoFisher Scietific	9988
Ialuronidasi	Fujifilm Irvine Scientific	90101	80 UI/mL di enzima ialuronidasi in
piastra di coltura per fecondazione in vitro HTF tamponata con HEPES (60 x 15 mm)	Corning	353802	Corning Primaria Falcon Dish 60X15mm TC Primaria piastra standard per coltura cellulare
Piastra per fecondazione in vitro Piastra a 4 pozzetti con coperchio scorrevole	ThermoFisher Scietific	176740	Multidish 4 pozzetti (Nunc)
IVF Piatto a un pozzetto	Falcon	353653	Falcon 60 x 15 mm TC trattato con pozzetto centrale
IVF Olio minerale per la coltura di embrioni	Fujifilm Irvine Scientific	9305
HTF modificato medio	Fujifilm Irvine Scientific	90126	HEPES-Buffered
medium Bulbo in gomma	Sigma Aldrich	Z111589-12EA	1 mL per Pipette Pasteur Pipette
sterili in vetro Pasteur	Scientific	PPB150-100PL	Pipetta Pasteur Cotonate, 150 mm, MEA e CE
stripping pipette  puntali (140 &; m)	Cook	K-FPIP-1140-10BS-6	PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING
stripping puntali per pipette (130 µ m )	Cook	K-FPIP-1130-10BS-7	PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING
stripping pipette tips (170 µ m)	Cook	K-FPIP-1170-10BS-5	PIPETTA FLEXIPETS PER DENUDING
strong>Vitrification
Equipment
Electronic Timer
Flexipet set di maniglie regolabili	Cook	G18674	Stripper  holder
Gilson Pipetman	Marcatori da laboratorio Gilson	F123601	p200
Cappa a flusso laminare	Sigma Aldrich
per rack di raffreddamento	Kitazato		Contenitore per azoto liquido per vetrificazione
Stereomicroscopio	Leica	M80
Materiali di consumo
Biopur epTIPS Rack	Eppendorf	30075331	Micropipette epTIPS Biopur 2-200 &; L
Albumina sierica umana	Fujifilm Irvine Scientific	9988
Piastra per coltura IVF (60 x 15 mm)	Corning	353802	Corning Primaria Falcon Dish 60 x 15 mm TC Primaria Piastra standard per coltura cellulare
Piastra per fecondazione in vitro a 6 pozzetti	Oosafe	OOPW-SW02	OOSAFE  PIATTO A 6 POZZETTI CON SUPPORTO PER CANNUCCIA
HTF MODIFICATO Medio	Fujifilm Irvine Scientific	90126	HEPES-Buffered
Puntali per pipette di stripping medio (170 & micro; m)	Cook	K-FPIP-1170-10BS-5	PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING
Kit di congelamento della vetrificazione	Fujifilm Irvine Scientific	90133-so	2 fiale di ES (soluzione di equilibrio, 2 x 1 mL) e 2 fiale di VS (soluzione di vetrificazione, 2 x 1 mL)
Vitrifit	Coopersurgical Origio	42782001A	VitriFit  Box
Warming
Equipment
Electronic Timer Flexipet
set di maniglie regolabili	Cook	G18674	Stripper  holder
Gilson Pipetman	Gilson	F123601	p200
Incubatore k-System	Coopersurgical	G210Invicell
Marcatori da laboratorio	Sigma Aldrich
Cappa a flusso laminare	IVF TECH		Flusso d'aria di grado A
Contenitore in acciaio inox per rack di raffreddamento	Kitazato		Contenitore di azoto liquido per vetrificazione
Stereomicroscopio	Leica	M80
Materiali di consumo
Biopur epTIPS Rack	Eppendorf	30075331	Micropipette epTIPS Biopur 2-200 &; L
Terreno CSCM (Continuos Single Colture Complete)	Fujifilm Irvine Scientific	90165	Terreno di coltura IVF integrato con
IVF (60 x 15 mm)	Corning	353802	Corning Primaria Falcon Dish 60X15mm TC Primaria piatto standard per coltura cellulare
Piatto IVF Piastra a 4 pozzetti con coperchio scorrevole	ThermoFisher Scietific	176740	Multidish 4 pozzetti (Nunc)
Piatto IVF Oosafe a 6 pozzetti		OOPW-SW02	OOSAFE®   PIATTO A 6 POZZETTI CON PORTA PAGLIA
Olio minerale per coltura embrionale	Fujifilm Irvine Scientific	9305
SApuntali per pipette a scatto (300µ m)	Cook	K-FPIP-1300-10BS-5	PIPETTA FLEXIPETS PER DENATURAZIONE
Kit di scongelamento Vitrificazione	Fujifilm Irvine Scientific	90137-so	4 Fiale di TS (Soluzione di scongelamento, 4 x 2 mL) + 1 Fiala di DS (Soluzione di diluizione, 1 x 2 mL) +1 Fiala di WS (Soluzione di lavaggio, 1 x 2 mL)

Hunter <IVF TECH Contenitore in acciaio inox per flusso d'aria di grado A piastra di coltura HSA