Qui presentiamo un protocollo che dimostra la tecnica e i controlli necessari per l'imaging perfusione Laser Doppler per misurare il flusso sanguigno nell'arto posteriore del topo.
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Articolo metodologico
Imaging perfusione Doppler laser nell'hindlimb del mouse
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il recupero del flusso sanguigno è una misura critica del risultato dopo ischemia hindlimb sperimentale o ischemia-riperfusione. L'imaging perfusione Laser Doppler (LDPI) è un metodo comune, non invasivo e ripetibile per valutare il recupero del flusso sanguigno. La tecnica calcola il flusso sanguigno complessivo nel tessuto campionato dallo spostamento doppler della frequenza causato quando un laser colpisce i globuli rossi in movimento. Le misurazioni sono espresse in unità di perfusione arbitrarie, quindi il controfilettale non intervenuto sulla gamba viene solitamente utilizzato per aiutare a controllare le misurazioni. La profondità di misura è dell'intervallo di 0,3-1 mm; per l'ischemia dell'arto posteriore, ciò significa che viene valutata la perfusione dermica. La perfusione dermica dipende da diversi fattori, in particolare la temperatura cutanea e l'agente anestetico, che devono essere attentamente controllati per ottenere letture affidabili. Inoltre, la pigmentazione dei capelli e della pelle può alterare la capacità del laser di raggiungere o penetrare nel derma. In questo articolo viene illustrata la tecnica dell'LDPI nell'hindlimb del mouse.
Introduzione
L'ulcerazione cutanea con una guarigione inadeguata delle ferite è una delle principali cause di amputazioni nei pazienti umani1. Un'adeguata guarigione delle ferite richiede livelli di perfusione arteriosa più elevati di quelli necessari per mantenere intatta la pelle, che è compromessa nei pazienti con malattia arteriosa periferica2,3,4. Molte altre condizioni reumatologiche e diabete possono anche portare a microcircolo cutaneo disturbato e inadeguato per guarire leferite 5,6. Molti pazienti....
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Protocollo
Gli esperimenti sugli animali sono stati eseguiti secondo un protocollo approvato dall'Institutional Animal Care and Use Committee dell'Università di Washington.
1. Preparazione dello scanner
- Regolare l'altezza dello scanner in modo che la distanza dal soggetto scansionato sia di circa 30 cm.
- Accendere l'imager e avviare il software associato.
- Aprire il programma di misurazione. Se il software comunica correttamente con lo scanner, verrà visualizzato l'avviso di accendemento del laser a infrarossi.
- Calibrare la macchina con gli standard forniti dal produttore (non mostrati nel video e....
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Risultati
Il successo dell'LDPI dovrebbe comportare scansioni coerenti ripetute, con non più di 100-150 variazioni dell'unità di perfusione (corrispondenti a circa il 10% della perfusione media abituale per il pedano del mouse) tra le tre scansioni(Figura 2). Come illustrato nella figura 2, le scansioni ripetute aiutano a determinare che il mouse è stato opportunamente equilibrato in modo che il rapporto ischemico/controllo rifletta al meglio il flusso sanguigno sottostan.......
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Discussione
Una tecnica coerente è fondamentale per ottenere risultati affidabili con LDPI. Lo stesso anestetico, le impostazioni di temperatura, la posizione del mouse e l'area di interesse devono essere utilizzati durante l'intero corso del tempo. Diversi agenti anestetici si tradurranno in valori di perfusione più o menoelevati 9. L'anestesia isoflurana è conveniente a causa della sua rapida insorgenza ed emergenza, nonché della sicurezza generale. Una percentuale costante di isoflurane deve essere utilizz.......
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Dichiarazioni
Il dottor Tang non ha conflitti di interesse da rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato svolto con l'utilizzo di strutture e risorse presso il VA Puget Sound Health Care Center. Il lavoro è quello dell'autore e non riflette necessariamente la posizione o la politica del Dipartimento degli Affari dei Veterani o del governo degli Stati Uniti. Il Dott. Tang è attualmente finanziato tramite l'AV (Merit 5 I01 BX004975-02).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| nero non riflettente | Negozio di tessuti, neoprene nero raccomandato dall'azienda | ||
| F/air cannuster | A.M. Bickford Inc | 80120 | |
| Coperta omeotermica con sonda metallica rigida | Apparato | Viene fornito anche con sonda flessibile, ma questo è meno durevole | |
| Macchina per anestesia isoflurano | Dräger | ||
| Camera di induzione dell'isoflurano | VetEquip | 941444 | Camera da 2 L |
| Imager di perfusione laser Doppler Moor | Instruments Moor | MoorLDI2-IR | Imager ad alta risoluzione (MoorLDI2-HIR) |
| Mouse Anesthesia nose cone | Produttori multipli | ||
| Nair | Nair | ||
| Bombola | Produttori vari | ||
| Surgilube | Distributori |
Riferimenti
- Varma, P., Stineman, M. G., Dillingham, T. R. Epidemiology of limb loss. Physical Medicine and Rehabilitation Clinics of North America. 25 (1), 1-8 (2014).
- Farber, A. Chronic Limb-Threatening Ischemia. New England Journal of Medicine. 379 (2), 171-180 (2018).
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Ristampe e permessi
