Rivelazione di sottili cambiamenti nella funzione cardiaca utilizzando l'ecocardiografia da stress transtoracica con dobutamina nei topi

Summary

La disfunzione ventricolare sinistra costituisce l'ultima via comune per una serie di disturbi cardiaci. Forniamo qui un protocollo dettagliato di approccio transtoracico all'ecocardiografia da stress con dobutamina per una valutazione completa della funzione ventricolare sinistra di modelli murini di malattia cardiaca e della fenotipizzazione cardiaca.

Abstract

La disfunzione ventricolare sinistra (LV) apre la strada finale a una moltitudine di disturbi cardiaci. Con l'ecocardiografia transtoracica da stress con dobutamina ad alta frequenza non invasiva nell'uomo, è diventato possibile un approccio di indagine riduzionista per smascherare sottili cambiamenti nella funzione cardiaca. Qui, forniamo un protocollo per l'utilizzo di questa tecnica nei topi per facilitare l'analisi estesa dell'architettura e della funzione del ventricolo sinistro in fisiologia e patologia, consentendo l'osservazione di alterazioni in modelli di malattia cardiaca nascosti in cuori non stressati. Questa indagine può essere eseguita in uno stesso animale e consente misurazioni sia basali che farmacologicamente indotte dallo stress. Delineiamo criteri dettagliati per un'anestesia appropriata, l'analisi LV basata sull'imaging, la considerazione della variabilità intra e interosservatore e l'ottenimento di una risposta inotropa positiva che può essere raggiunta nei topi dopo l'iniezione intraperitoneale di dobutamina in condizioni quasi fisiologiche. Per ricapitolare le caratteristiche della fisiologia umana e della malattia nei modelli di piccoli animali, evidenziamo le insidie critiche nella valutazione, ad esempio un pronunciato effetto Bowditch nei topi. Per raggiungere ulteriormente gli obiettivi traslazionali, confrontiamo gli effetti indotti dallo stress nell'uomo e nei topi. Quando viene utilizzato negli studi traslazionali, è necessario prestare attenzione alle differenze fisiologiche tra topi e uomo. Il rigore sperimentale impone che alcuni parametri valutati nei pazienti possano essere utilizzati solo con cautela a causa delle restrizioni nella risoluzione spaziale e temporale nei modelli murini.

Introduction

Il segno distintivo di molte malattie cardiache nell'uomo è una compromissione funzionale sistolica e/o diastolica del ventricolo sinistro (LV). Per l'individuazione di anomalie strutturali, la diagnosi e la gestione dell'insufficienza cardiaca sistolica, nonché la valutazione della funzione diastolica nei pazienti con sintomi di insufficienza cardiaca, l'ecocardiografia viene utilizzata come modalità di valutazione fondamentale.

Poiché i sintomi sono aspecifici e più di un terzo dei pazienti con la sindrome clinica da scommesso cardiaco può non soffrire dell'insufficienza cardiaca vera e propria, è importante trovare un correlato ecocardiografico oggettivo per la presentazione clinica del paziente¹. Inoltre, alcuni sintomi occulti nello stato di riposo o statico possono verificarsi in condizioni di attività o stress. Nei pazienti con malattia coronarica, cambiamenti già minori nella perfusione coronarica possono portare ad anomalie del movimento della parete regionale. Tuttavia, questi sottili cambiamenti non possono essere valutati utilizzando l'ecocardiografia convenzionale poiché le alterazioni della malattia cardiaca possono essere nascoste nei cuori non stressati. Per ottenere una comprensione più approfondita della fisiopatologia cardiaca, l'ecocardiografia da sforzo fornisce una valutazione dinamica della struttura e della funzione miocardica in condizioni di esercizio o stress farmacologico, consentendo di abbinare i sintomi con i reperti cardiaci². Inoltre, nei piccoli animali, questo metodo rappresenta uno strumento in-vivo affidabile e non invasivo ^3,4,5. In linea con l'uomo, la reazione allo stress del miocardio può essere indotta tramite agenti farmacologici nei topi e nei ratti. La dobutamina è un farmaco di uso frequente e l'ecocardiografia da stress con dobutamina è ampiamente eseguita nell'uomo ^6,7, ma solo a volte utilizzata in piccoli modelli animali per valutare la reazione cardiaca allo stress ^8,9,10,11. La dobutamina è una catecolamina sintetica con un effetto prevalentemente β1-agonistico che determina inotropia positiva e cronotropia del cuore. Per ottenere una corretta traduzione dall'uomo al topo, alla tecnologia e al quadro concettuale dell'ecocardiografia, devono essere prese in considerazione le limitazioni tecniche relative, ad esempio, alle piccole dimensioni e alla frequenza cardiaca rapida nel topo. La frequenza cardiaca target umana nell'ecocardiografia da stress con dobutamina è [(220-età) x 0,85] con un conseguente aumento medio della frequenza cardiaca di circa il 150 ± 10% in volontari sani^12,13. Per i topi, manca una formula del genere. Si dice che la frazione di eiezione (EF) sia aumentata dall'ecocardiografia da sforzo nell'uomo del 5-20%^12,14. La FE nei topi, a seconda della frequenza cardiaca, è riportata tra il 58 ± l'11% (< 450 bpm) e il 71 ± l'11% (≥ 450 bpm) e cambia di quasi il 20% con frequenze cardiache più elevate⁴. Il meccanismo principale nei topi per aumentare la gittata cardiaca è un aumento della frequenza cardiaca. Parte responsabile di questo meccanismo è l'effetto Bowditch o fenomeno della scala, una risposta cardiaca positiva-inotropa mediata dal calcio dipendente dalla frequenza, che è più pronunciata nei topi che nell'uomo ^15,16. Inoltre, l'ecocardiografia (da stress) è alla base della variabilità intra e interosservatore. Pertanto, una procedura altamente standardizzata è indispensabile^17,18.

Qui presentiamo la procedura dettagliata dell'ecocardiografia da stress con dobutamina per acquisire immagini standardizzate per svelare sottili cambiamenti nella funzione cardiaca nei topi in modelli di salute e malattia. I componenti chiave includono un'adeguata anestesia, un adeguato monitoraggio della frequenza cardiaca e possibili insidie nell'imaging indotto dallo stress nei topi. I parametri chiave sono la valutazione della funzione sistolica e diastolica, compresa la considerazione della LVEF. Poiché i topi sono resistenti alla disfunzione cardiaca indotta dal postcarico¹⁷, questo protocollo può aggiungere informazioni preziose per l'uso anche in modelli di cardiopatia valvolare.

Protocol

Tutti i metodi e le procedure sono stati eseguiti in conformità e nel rispetto di tutte le normative pertinenti ("Convenzione europea per la protezione degli animali vertebrati utilizzati a fini sperimentali e altri scopi scientifici" (Direttiva 2010/63/UE) e la cura degli animali è stata conforme alle linee guida istituzionali. I dati provenienti da soggetti umani sono stati analizzati in conformità con tutte le linee guida istituzionali, nazionali e internazionali per il benessere umano e sono stati approvati dal Comitato Etico Locale (20-9218-BO). Tutti gli esperimenti sono stati eseguiti con maschio C57BL/6JRj all'età di 12 settimane.

1. Preparazione dei materiali e delle attrezzature

NOTA: La Figura 1 mostra un esempio di postazione di lavoro ecografica per piccoli animali.

1. Assicurati di operare in un ambiente silenzioso e controllato con luce dimmerabile.
2. Preriscaldare il gel per ultrasuoni, ad esempio utilizzando uno scaldagel. Lasciare riscaldare il gel a 37 °C. L'operazione potrebbe richiedere del tempo.
3. Pulire tutti gli strumenti, compresa la piattaforma, con una salvietta disinfettante.
4. Accendere e preriscaldare la piattaforma a 37 °C.
5. Accendi l'ecografo. Inserisci l'ID dell'animale e l'ID del protocollo, nonché altre informazioni pertinenti. Utilizzare un trasduttore a ultrasuoni ad alta frequenza con una trasmissione centrale di 30 MHz per topi con circa 30 g di peso corporeo.
6. Assicurati di lavorare con un sistema di esaurimento del gas attivo.
   NOTA: Se si utilizza un filtro a carboni attivi per assorbire l'isoflurano nel flusso espirato, assicurarsi di controllare il peso e sostituire il filtro una volta raggiunto l'aumento di peso massimo indicato.
7. Se necessario, riempire il vaporizzatore con la quantità adeguata di isoflurano.
   ATTENZIONE: Non inalare anestetici volatili.
8. Preparare una soluzione di lavoro a base di dobutamina di 2,5 μg/μl mediante diluizione di una soluzione iniettabile pronta all'uso o sciogliendo la polvere di dobutamina cloridrato in soluzione fisiologica allo 0,9% secondo le istruzioni del produttore. La soluzione è stabile per almeno 24 ore se conservata a temperatura ambiente.

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Figura 1: Postazione di lavoro per ecografia cardiaca per piccoli animali. Un'impostazione ergonomica è indispensabile per l'ecocardiografia da sforzo di piccoli animali, poiché i tempi di esame devono rimanere brevi. La postazione di lavoro è composta da una macchina a ultrasuoni, un sistema di anestesia per piccoli animali con alimentazione di ossigeno e scarico attivo del gas, una piattaforma di ecocardiografia riscaldata con ECG incorporato e capacità di movimento tramite micromanipolatori come parte di un sistema ferroviario integrato e un'unità di monitoraggio fisiologico. Uno scaldagel per riscaldare il gel per ultrasuoni e una lampada termica sono aiuti utili. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

2. Preparazione del topo per l'imaging e l'induzione dell'anestesia

1. Riempire la camera di induzione con isoflurano al 3%-4% v/v in una miscela di gas arricchita di ossigeno (con 1 L/min 100% O₂).
2. Pesa il mouse. Prendi delicatamente il mouse per la coda e trasferiscilo nella camera di induzione. Assicurarsi che l'animale sia sedato entro pochi secondi osservando attentamente i movimenti dell'animale.
3. Se necessario, modificare il flusso di gas al cono nasale collegato al sistema di anestesia (1,0-1,5 vol% di isoflurano con 1 L/min 100% O₂ per mantenere una sedazione stabile). Rimuovere il mouse dalla camera di induzione e posizionarlo con cura sulla piattaforma preriscaldata. Assicurarsi che le zampe si trovino sui sensori ECG incorporati nella piattaforma.
4. Per prevenire l'essiccazione della sclera, applicare un gel unguento su entrambi gli occhi.
   NOTA: Le misurazioni dello stress richiederanno il loro tempo.
5. Applicare una piccolissima quantità di crema per elettrodi sui sensori ECG. Fissare delicatamente l'animale con del nastro adesivo su tutti e quattro gli arti. Usa una piccola parte di nastro adesivo per fissare la posizione della testa dell'animale nel cono del naso. L'ECG viene utilizzato per registrare la frequenza cardiaca durante l'acquisizione dell'immagine. Regolare il sistema di imaging fisiologico per un segnale ECG stabile e chiaro.
   NOTA: Una quantità eccessiva di crema per elettrodi può causare una cattiva qualità del segnale ECG.
6. Per proteggere l'animale dallo stress durante la procedura, controllare l'adeguata profondità della sedazione mantenendo l'intervallo di frequenza cardiaca a 400-450 bpm. La frequenza cardiaca è ottenuta dall'ECG. È accettabile una variazione di 50 bpm all'interno dell'intervallo.
   NOTA: I movimenti dell'animale possono indicare un livello di sedazione troppo stretto. L'anestesia non deve portare a cardiodepressione del topo. La sedazione può essere regolata per ottenere la frequenza cardiaca target sopra menzionata.
7. Utilizzando la lubrificazione, inserire delicatamente un termometro rettale per il monitoraggio continuo della temperatura corporea. Mantenere la temperatura nell'intervallo fisiologico (normalmente tra 36,5 °C e 37,5 °C a seconda del ceppo del topo e della configurazione sperimentale). In un laboratorio di ecografia cardiaca animale non controllato dal punto di vista ambientale, può essere preso in considerazione l'uso dell'illuminazione a infrarossi.
8. Usa una crema depilatoria chimica per rimuovere i peli del corpo dal petto. Usa un tovagliolo di carta umido pulito per pulire il torace. Assicurarsi di rimuovere tutti i componenti rimanenti della crema (Figura 2A).
   NOTA: È possibile utilizzare un tagliacapelli elettrico anche prima dell'applicazione depilatoria. L'animale è ora preparato per l'imaging. Poiché è fondamentale mantenere il tempo di imaging breve, l'intera preparazione prima dell'imaging dovrebbe richiedere meno di 3 minuti.

Figura 2: Posizionamento dell'animale e del trasduttore. (A) Il topo è fissato alla piattaforma riscaldata con tutti e quattro gli arti fissati sugli elettrodi ECG d'argento. Per la misurazione della temperatura corporea è inserito un termometro rettale. Il muso viene inserito delicatamente nel cono nasale del sistema di anestesia. (B) Orientamento della sonda per la vista parasternale dell'asse lungo (PSLAX); Vedere il passaggio 3.2. (C) Orientamento della sonda per la vista parasternale dell'asse corto (PSSAX); Vedere il passaggio 3.3. (D) Orientamento della sonda per la vista apicale a quattro camere (4CH); Vedere il passaggio 3.4. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.

3. Imaging cardiovascolare di base

NOTA: Le immagini possono essere acquisite utilizzando due posizioni di base del trasduttore (finestra ecografica parasternale e apicale) (Figura 2) e almeno tre modalità ecografiche (modalità B(destra), modalità M(ozione) e modalità Doppler (color doppler e doppler a onde pulsate (PW)) (Figura 3, Figura 4, Figura 5). Per le basi dell'imaging, fare riferimento agli articoli^16,18 pubblicati in precedenza. È fondamentale ottenere immagini chiare per il confronto con le immagini di stress acquisite successivamente.

1. Applicare il gel per ultrasuoni preriscaldato senza bolle sul petto.
   NOTA: Il gel per ultrasuoni non riscaldato provocherà una rapida perdita di temperatura corporea che influenzerà la frequenza cardiaca.
2. Eseguire la visualizzazione dell'asse lungo parasternale (PSLAX).
   NOTA: Il PSLAX viene eseguito per visualizzare il LV nel suo asse lungo. Con questo, ad esempio, è possibile ottenere le dimensioni della radice aortica e la dimensione dell'aorta prossimale, nonché la lunghezza del ventricolo sinistro.
   1. Con la testa rivolta lontano dallo sperimentatore, inclinare il tavolo di circa 10-20° a sinistra e di 5-10° in avanti per portare il cuore il più avanti possibile. Posizionare il trasduttore parasternalmente in linea con l'asse lungo del cuore con il marcatore (tacca) rivolto verso la spalla destra dell'animale (Figura 2B).
   2. Utilizzare i micromanipolatori per regolare la visuale ottimale. Utilizzare i controlli del pannello di controllo dell'immagine per ottimizzare l'immagine. Acquisire almeno un'immagine 2D in modalità B e un'immagine in modalità M a livello medioventricolare.
   3. Acquisisci eventuali immagini aggiuntive se necessario per la domanda specifica. Acquisisci almeno 100 fotogrammi e almeno 3 (-6) cicli cardiaci completi.
3. Eseguire la visualizzazione dell'asse corto parasternale (PSSAX).
   NOTA: Il PSSAX viene eseguito per visualizzare il LV nel suo asse corto. Da questa prospettiva, ad esempio, è possibile calcolare il volume telesistolico del ventricolo sinistro (LVESV), il volume telediastolico del ventricolo sinistro (LVEDV), la gittata sistolica (SV) e la gittata cardiaca (CO).
   1. Ruotare il trasduttore di 90° in senso orario senza modificare l'angolazione (l'indicatore ora punta verso la spalla sinistra dell'animale) (Figura 2C). Acquisire almeno un'immagine B-mode nella vista basale, medioventricolare (livello dei muscoli papillari) e apicale.
   2. Per definire la vista più basale e quella più apicale, scorrere lungo l'asse lungo fino ai punti più distanti, dove è ancora visibile l'intero ciclo cardiaco della camera ventricolare. Scattare immagini a livello medioventricolare approssimativamente in una posizione intermedia a livello dei muscoli papillari.
   3. Acquisire almeno un'immagine M-mode nella vista del ventricolo medio.
      NOTA: Alcuni ecografi forniscono preimpostazioni per le diverse visualizzazioni; Si consiglia di verificare la preimpostazione adeguata prima di acquisire le immagini.
4. Eseguire la vista apicale a quattro camere (4CH).
   NOTA: 4CH è importante perché può essere utilizzato principalmente per valutare la valvola mitrale utilizzando il PW doppler.
   1. Inclinare la piattaforma in modo che l'animale si trovi in una posizione di Trendelenburg modificata con la testa abbassata. Inclinare il trasduttore verso la testa del mouse, il marcatore rivolto verso il lato sinistro dell'animale (Figura 2D).
   2. Acquisire almeno un'immagine B-mode, nonché un'immagine color doppler e PW doppler della valvola mitrale e tricuspide. A seconda della domanda sperimentale, applicare il doppler tissutale nella vista 4CH.
      NOTA: Il modo più semplice per raggiungere la posizione apicale 4CH è inclinare il tavolo dalla vista PSAX e angolare il trasduttore. Fare attenzione a non esercitare troppa pressione sul torace in quanto ciò potrebbe interferire con le misurazioni, ad esempio, della funzione diastolica.

4. Imaging dello stress da dobutamina

NOTA: Una volta raggiunta la frequenza cardiaca target, è necessario acquisire visualizzazioni standardizzate purché la frequenza cardiaca target sia stabile. Ciò richiede in genere più di un passaggio tra PSLAX e PSSAX. Poiché il passaggio tra PSLAX e PSSAX richiede solo una rotazione di 90°, le viste possono essere facilmente visualizzate.

1. Eseguire il test da sforzo della dobutamina in uno stesso animale mantenendo la stessa anestesia per garantire la comparabilità. Assicurarsi che la frequenza cardiaca iniziale rimanga stabile nell'intervallo 400-450 bpm. Registra le letture ECG e salvale insieme e sulle immagini acquisite. Assicurati che il segnale ECG sia chiaro. In caso contrario, provare a fissare nuovamente tutti e quattro gli arti fino a quando non viene visualizzato un chiaro segnale ECG.
2. Anche in questo caso, eseguire la vista PSLAX (immagini in modalità B e M). Salva le immagini come immagine "di base". Assicurati di risparmiare e tieni a mente anche la frequenza cardiaca iniziale.
3. Preriempi la siringa e inietta 5 μg/g di dobutamina per via intraperitoneale utilizzando un ago da 27 G e una siringa da 1 mL. Osserva attentamente la frequenza cardiaca. Registrare le immagini ecocardiografiche fino al raggiungimento della frequenza cardiaca target e utilizzare l'aumento della frequenza cardiaca per un'analisi successiva. Un aumento significativo sostenibile della frequenza cardiaca indotto dalla dobutamina si raggiunge dopo un aumento del 15-30% dopo circa 1 minuto, a seconda della dose di dobutamina.
   NOTA: Utilizzare sempre aghi per iniezione sterili monouso per ogni animale per prevenire infezioni. La suscettibilità alla dobutamina e il carico (sub)massimale possono variare con il ceppo di topo e possono dipendere dalla configurazione sperimentale e devono essere definiti nei pre-esperimenti. Si raccomanda di adattare la dose di dobutamina alla configurazione sperimentale.
   ATTENZIONE: Seguire le linee guida istituzionali per l'uso di oggetti taglienti e potenzialmente infettivi. Smaltire sempre l'ago in un contenitore per rifiuti sanitari approvato!
4. Una volta raggiunta la frequenza cardiaca target che rimane stabile per circa 30 s, acquisire le immagini PSLAX B-mode e M-mode come descritto al punto 3.
5. Anche in questo caso, ruotare il trasduttore in senso orario per ottenere la vista PSSAX come descritto al punto 3. Qui, acquisisci immagini in modalità B del livello basale, medioventricolare (livello dei muscoli papillari) e apicale e immagini in modalità M del livello medioventricolare (livello dei muscoli papillari). Rassicurare che la frequenza cardiaca target rimanga stabile. In caso contrario, tornare alla posizione PSLAX e ricominciare l'imaging.
   NOTA: Poiché la frequenza cardiaca diminuirà senza l'infusione continua di dobutamina¹² (non trattata in questo articolo), le immagini dovrebbero essere acquisite entro due minuti. Le immagini PSLAX e PSSAX sono essenziali per la maggior parte delle misurazioni indotte dallo stress rilevanti (vedere la sezione "Risultati rappresentativi").
6. Ora, eseguire nuovamente la visualizzazione apicale 4CH (come spiegato nel passaggio 3.4.). Utilizzando il doppler PW, misurare i modelli di flusso di interesse (come spiegato nel passaggio 3.4.2.). In condizioni non stressate, due onde caratteristiche vengono misurate utilizzando il PW doppler, una che rappresenta il riempimento passivo del ventricolo (onda E(arly)) e una che rappresenta il riempimento attivo dopo la contrazione atriale (onda A(trial)). Con l'aumentare della frequenza cardiaca, queste onde tendono a fondersi e potrebbero non essere misurabili in modo distintivo sotto stress indotto da dobutamina.

5. Passaggi finali

1. Dopo circa 5 minuti, quando la frequenza cardiaca ricomincerà a diminuire, assicurarsi che tutte le viste siano state catturate.
2. Rimuovere delicatamente il gel per ultrasuoni dal torace utilizzando un tovagliolo di carta umido pulito. Rimuovere con cautela il fissaggio del nastro. Prestare particolare attenzione al nastro che fissa la testa dell'animale per evitare di strappare i baffi.
3. Spegnere l'anestesia. Se si utilizza uno scarico del gas attivo, assicurarsi di continuare lo scarico del gas. Metti l'animale su un tovagliolo di carta in una gabbia riscaldata separata durante il periodo di risveglio. Osserva attentamente l'animale. Non deve essere lasciato incustodito fino a quando non ha riacquistato sufficiente coscienza per mantenere la decubito sternale. Una volta sveglio e completamente recuperato, trasferisci l'animale nella sua gabbia.
   NOTA: A causa del carattere non definitivo di questa tecnica, l'animale può rimanere all'interno dell'esperimento in conformità con tutte le normative pertinenti.

6. Valutazione offline

1. Trasferire i dati dell'immagine al software di analisi offline su una stazione di lavoro per eseguire una valutazione dettagliata della funzione cardiaca. Presta particolare attenzione alla differenza tra funzione cardiaca non stressata e stressata. La frequenza cardiaca deve essere sempre registrata e presentata.
   NOTA: poiché l'analisi del software varia tra i diversi software, non è coperta da questo protocollo. Fare riferimento alle istruzioni del produttore.

Results

Un'immagine ecocardiografica fisiologica non stressata acquisita in PSLAX è mostrata nella Figura 3. Nella diastole, le pareti del ventricolo appaiono uniformemente (Figura 3A) e si ispessiscono in una certa misura (Figura 3B, C). L'iniezione di 5 μg/g di peso corporeo di dobutamina i.p. porta a un aumento significativo della frequenza cardiaca (effetto cronotropo positivo)

Discussion

La valutazione della funzione cardiaca indotta dallo stress è ampiamente utilizzata nell'uomo in ambito clinico utilizzando test da sforzo o test da sforzo farmacologico ^6,7. Poiché l'ecocardiografia post-esercizio immediata dei topi è molto limitata a causa della necessità di sedazione, è probabile che l'ecocardiografia da stress indotta da dobutamina sia il metodo più traslazionale per valutare la fisiopatologia cardiaca indott...

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Filtro a carboni attivi	UNO BV	180000140	http://www.unobv.com/Rest%20Gas%20Filters.html
Aquasonic 100 Gel per trasmissione ad ultrasuoni	Parker Laboratories	001-02	https://www.parkerlabs.com/aquasonic-100.asp
Lozione chimica per la depilazione	Fornitura	generale-Scambi
di cotone	Fornitura generale	-
ddH2O	General	Supply-Dobutamina
	Carinopharm	71685.00.00
https://www.carinopharm.de/stammsortiment/#103 Flussometro per anestesia animale da laboratorio	UNO BV	SF3	http://www.unobv.com/Flowmeters.html
Aspiratore di gas	UNO BV-http://www.unobv.com/Gas%20Exhaust%20Unit.html
Lampada	riscaldantePhilips-Induction
Box	UNO BV-http://www.unobv.com/Induction%20box.html
Contenitore per oggetti taglienti medici	BD	305626	https://legacy.bd.com/europe/safety/de/products/sharps/
Trasduttore a ultrasuoni MX400 (20-46 Mhz)	VisualSonics	MX400	https://www.visualsonics.com/product/transducers/mx-series-transducers
Octenisept disinfettante	Schuelke	173711	https://www.schuelke.com/de-de/produkte/octenisept.php
Siringa Omnican F con ago 1ml	B. Braun	9161502S	https://www.bbraun.de/de/products/b60/omnican-f.html
Asciugamani di carta	Supply-Signacreme
Electrode Cream	Parker Laboratories	017-05	https://www.parkerlabs.com/Signacreme.asp
Garze Standard	BeeSana Meditrade	4852728	https://www.meditrade.de/de/wundversorgung/verbandstoffe/beesana-mullkompresse/
Thermasonic Gel Warmer	Parker Laboratories	82-03-20 CE	https://www.parkerlabs.com/thermasonic_apta_sbp.asp
Nastro Transpore	3M	1527NP-0	https://www.3mdeutschland.de/3M/de_DE/unternehmen-de/produkte/~/3M-Transpore-Fixierpflaster/
Vaporizzatore Sigma Delta	UNO BV-http://www.unobv.com/Vaporizers.html
Vevo 3100 sistema di imaging ecografico preclinico ad alta frequenza	VisualSonics	Vevo3100	https://www.visualsonics.com/product/imaging-systems/vevo-3100 * pacchetto software richiesto: pacchetto cardiovascolare; Stazione di imaging Vevo in modalità B, M-mode, doppler a onde pulsate
con sistema di binari integrato, piattaforma riscaldata e unità di monitoraggio fisiologico			VisualSonics-https://www.visualsonics.com/product/accessories/imaging-stations
	VisualSonics	Vers. 3.2.5	https://www.visualsonics.com/product/software/vevo-lab *pacchetto software richiesto: Ceppo Vevo, analisi LV