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La funzione ovarica diminuisce progressivamente durante l'invecchiamento e in alcune condizioni fisiopatologiche tra cui anomalie del cariotipo, malattie autoimmuni, terapie chemio- e radiazioni, nonché interventi chirurgici ovarici. Nelle donne non sposate con grave disfunzione ovarica, la conservazione della fertilità è importante per le gravidanze future. Sebbene la crioconservazione degli ovociti sia un metodo stabilito per la conservazione della fertilità, questi pazienti potrebbero preservare solo un numero limitato di ovociti anche dopo l'iperstimolazione ovarica, portando a stimolazioni ripetute per garantire ovociti sufficienti a garantire la gravidanza futura. Per risolvere questo problema, abbiamo recentemente sviluppato una procedura di attivazione in vitro (IVA) senza farmaci, che ci consente di stimolare le prime fasi dei follicoli ovarico a svilupparsi allo stadio del follicolo preantrale. Questi follicoli preantrali possono rispondere al protocollo unico della stimolazione della gonadotropina, con conseguente aumento del numero di ovociti recuperati per stimolazione ovarica per la crioconservazione. L'IVA senza farmaci comprendeva l'approccio chirurgico e la stimolazione ovarica. Abbiamo rimosso una parte della corteccia da una o entrambe le ovaie da pazienti in chirurgia laparoscopica. I tessuti corticali ovarico sono stati tagliati a cubetti per interrompere la via di segnalazione dell'Ippopotamo e stimolare lo sviluppo dei follicoli allo stadio iniziale. Questi cubi sono stati innestati ortotropicamente nelle ovaie rimanenti e sotto il serosa di entrambe le tube di Falloppio. Abbiamo già pubblicato la procedura chirurgica dell'IVA senza farmaci e il protocollo di successiva stimolazione ovarica, ma qui presentiamo i dettagli dei metodi di laboratorio richiesti per l'IVA senza farmaci.