Il punteggio sistematico dell'infiammazione intestinale utilizzando un sistema assistito da computer gratuito è un potente strumento per confrontare quantitativamente i cambiamenti istopatologici nei modelli di colite caratterizzati dalla presenza di ulcere e cambiamenti infiammatori. La valutazione del punteggio della colite istologica rafforza le osservazioni cliniche e facilita l'interpretazione dei dati.
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Articolo metodologico
Analisi sistematica del punteggio per l'infiammazione intestinale in un modello di colite indotta da solfato di sodio di Murine
In questo articolo
Sommario
Abstract
I modelli di colite murina sono strumenti ampiamente utilizzati in studi incentrati sulla comprensione della patobiologia dei disturbi intestinali infiammatori. Tuttavia, restano da definire standard solidi per una quantificazione obiettiva e riproducibile della gravità della malattia. La maggior parte dei metodi di analisi della colite si basano su un punteggio istologico limitato di piccoli segmenti dell'intestino, portando ad analisi parziali o parziali. Qui, combiniamo l'acquisizione di immagini ad alta risoluzione e l'analisi longitudinale dell'intero colon per quantificare la lesione intestinale e l'ulcerazione nel modello indotto dal solfato di sodio di dextran (DSS) della colite murina. Questo protocollo consente la generazione di risultati oggettivi e riproducibili senza un'ampia formazione degli utenti. Qui, forniamo dettagli completi sulla preparazione del campione e sull'analisi delle immagini utilizzando esempi di dati della colite indotta da DSS. Questo metodo può essere facilmente adattato ad altri modelli di colite murina che hanno un'infiammazione significativa associata a lesioni della mucosa. Dimostriamo che la frazione di mucosa infiammata/ ferita e erosa / ulcerata rispetto alla lunghezza completa del colon è strettamente parallela ai risultati clinici come la perdita di peso in mezzo alla progressione della malattia indotta dal DSS. Questo protocollo istologico fornisce un aiuto affidabile in termini di tempo ed economico per standardizzare le analisi dell'attività della malattia in modo imparziale negli esperimenti di colite DSS.
Introduzione
La barriera epiteliale gastrointestinale svolge un ruolo fondamentale nel separare gli antigeni luminali e gli agenti patogeni dai compartimenti tissutalisottostanti 1. Lesioni epiteliali e ferite mucose osservate in condizioni patologiche come malattia infiammatoria intestinale (IBD), ischemia o lesioni chirurgiche sono associate a sintomi clinici che includono diarrea, perdita di peso, sangue nelle feci e dolore addominale. In risposta alle lesioni, le cellule epiteliali migrano e proliferano per er epitelializzare e riparare i difetti della barriera della mucosa. La risoluzione dell'infiammazione e la restituzione dell'integrità della mucosa....
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Protocollo
Tutti gli esperimenti sugli animali descritti sono stati approvati dal Comitato per l'uso e la cura degli animali dell'Università del Michigan.
1. Raccolta dei tessuti
- Eutanasia dei topi umanamente usando l'anestesia isoflurana seguita da lussazione cervicale, in conformità con i protocolli approvati. Per tutti gli esperimenti sugli animali, l'approvazione è stata ottenuta da un comitato di revisione certificato in conformità con le linee guida nazionali e istituzionali per la manipolazione degli animali.
- Posizionare il mouse su un cuscinetto di sezionamento in posizione supina. Immobilizzare le estremità del mouse utili....
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Risultati
Per illustrare l'affidabilità di questa analisi del punteggio della colite istologica nel contesto dei danni alla mucosa dopo la sfida DSS e il successivo recupero dalla colite, abbiamo somministrato il 2,5% di DSS nell'acqua potabile di otto topi maschi di tipo C57BL6 di 10 settimane per 5 giorni seguiti da un periodo di recupero con acqua regolare per 5 giorni. Non vi è stato alcun cambiamento nel peso corporeo durante la somministrazione acuta di DSS, dal giorno 0 al 5 (
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Discussione
Il nostro sistema di punteggio di colite istologica costituisce uno strumento affidabile per quantificare l'infiammazione e i danni dei tessuti nell'intestino. Questo approccio fornisce una migliore comprensione dello stato istopatologico dell'intero organo senza la tendenza a selezionare piccole aree o sezioni incomplete. Tra le fasi critiche per eseguire con successo questo protocollo ci sono la corretta preparazione dei rotoli svizzeri che consentono l'analisi di almeno il 90% della lunghezza dei due punti; orientamen.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Gli autori desiderano riconoscere il supporto del finanziamento NIH DK055679, DK089763, DK079392, DK061739, DK072564 e dell'Università del Michigan Pathology Slide Scanning Services.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Aperio AT2 – Scansione digitale ad alto volume di vetrini interi | Leica Biosystems | Aperio AT2 | |
| Underpads assorbenti con barriera all'umidità impermeabile | VWR International | 56616-032 | |
| American Line 66-0089 Lama a taglio singolo, 100 per confezione | Siringhe monouso GT Midwest | TL5837 | |
| BD Luer-Lok senza aghi | Fisher scientific | 14-823-2A | |
| Forbici per lo strabismo di Bonn - Strumenti per | scienze | 11103-09 | |
| Forbici per lo strabismo di Bonn - | Strumenti | 14084-09 | |
| Pinze Dumont #5 | Strumenti per le scienze fini | 11251-20 | |
| Soluzione di formalina, tamponata neutra, 10% | Sigma | HT501640-19L | |
| HistoPrep 70% Ea | Fisherbran | 70% alcool etilico denaturato | |
| ImageScope | Aperio | Versione 12.3.3.5039 | http://www.leicabiosystems.com/pathology-imaging/aperio-epathology/integrate/imagescope/ |
| LeakBuster Contenitori per campioni: | sterile Starplex Scientific | B120210 | |
| fosfato-tampone, senza calcio e magnesio | Corning | 21-040-CV | |
| Provette di alimentazione in plastica, 20 GA x 30 mm | Ago Instech | FTP2030 | |
| PrecisionGlide, dimensioni: 20 g x 1 1/2 pollici | BD (Becton, Dickinson and Company) | 305176 | |
| ago PrecisionGlide, dimensioni: 27 g x 1/2 pollici | BD (Becton, Dickinson and Company) | 305109 | |
| siringa, 10 ml | BD (Becton, Dickinson and Company) | 302995 | |
| cassette tissutali Unisette | Simport | M505-2 |
Riferimenti
- Kagnoff, M. F. The intestinal epithelium is an integral component of a communications network. Journal of Clinical Investigation. 124 (7), 2841-2843 (2014).
- Laukoetter, M. G., Nava, P., Nusrat, A. Role of the intestinal barrier in inflam....
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Ristampe e permessi
