Considerazioni sulla raccolta, l'elaborazione e la conservazione per la ricerca sui biomarcatori urinari

Summary

Questo protocollo mira a fornire considerazioni per la raccolta, l'elaborazione e la conservazione dei campioni di urina per gli studi sui biomarcatori di infezione del tratto urinario.

Abstract

Ci sono diverse proteine urinarie che si mostrano promettenti come nuovi marcatori di infezioni del tratto urinario. L'identificazione di un nuovo biomarcatore che ha una maggiore accuratezza predittiva rispetto agli attuali metodi diagnostici ha il potenziale per migliorare notevolmente la capacità di gestire i pazienti con infezioni del tratto urinario. Tuttavia, la raccolta, l'elaborazione e la conservazione dei campioni possono potenzialmente influire sui risultati della ricerca sui biomarcatori. Comprendere gli effetti di ciascuna di queste fasi sugli studi sui biomarcatori è necessario per informare la ricerca futura e di alta qualità in questo settore, nonché per rivedere criticamente altri studi in questo settore. Qui, lo studio esamina la letteratura relativa agli effetti di ciascuna fase dell'elaborazione del campione di urina e riporta gli effetti di varie condizioni sulle proteine urinarie. Il protocollo si concentrerà sulle tecniche di raccolta, sul tempo e sulla temperatura di conservazione, sulle tecniche di lavorazione, sull'uso dei reagenti e sul congelamento a lungo termine sulla stabilità dei biomarcatori. Si concentrerà sulle proteine, ma discuterà brevemente altri materiali che possono essere utilizzati nella ricerca sui biomarcatori. In tal modo, questo protocollo fornirà una guida ai futuri ricercatori per assistere nella progettazione di studi sui biomarcatori urinari.

Introduction

Le infezioni del tratto urinario (UTI) sono una delle infezioni batteriche più comuni sia nei bambini che negli adulti¹. Mentre la diagnosi di infezione delle vie urinarie in alcune popolazioni può essere semplice, può essere più complessa in altre, come quelle con vescica neuropatica². La capacità di diagnosticare con precisione le infezioni delle vie urinarie contribuirà a migliorare gli sforzi di gestione degli antibiotici diminuendo l'uso di antibiotici non necessari e potenzialmente aiuterà nella diagnosi precoce delle infezioni delle vie urinarie, diminuendo così il rischio di morb....

Protocol

Questo protocollo segue le linee guida del comitato etico per la ricerca umana dell'istituto. Assicurarsi che l'approvazione sia ottenuta dal comitato di revisione istituzionale (IRB) prima della raccolta e dell'utilizzo di campioni biologici per la ricerca.

1. Raccolta

1. Ottenere il campione di urina in una tazza per campioni sterile. Decidere il tipo di campione di urina, nonché i criteri specifici di inclusione ed esclusione, in base allo specifico disegno dello studio. Per gli studi sulle infezioni delle vie urinarie, utilizzare il metodo clean-catch o il cateterismo per evitare la contaminazi....

Results

La centrifugazione ha avuto un piccolo impatto sui livelli di NGAL. I campioni centrifugati conservati a -80 °C avevano livelli inferiori di NGAL rispetto ai campioni non centrifugati (2,17 ng/mL ± 0,32 ng/mL, 2,77 ng/mL ± 0,21 ng/mL). I cicli di congelamento hanno avuto un impatto anche sui livelli di NGAL dopo il terzo ciclo di congelamento-disgelo. (Figura 2). Tra le condizioni studiate (centrifugazione, cicli di gelo-disgelo e temperatura di stoccaggio), la temperatura di stoccaggio ha a.......

Discussion

L'importanza di produrre risultati coerenti e riproducibili non si limita al successo dei singoli studi, ma consentirà anche un migliore confronto dei risultati all'interno della letteratura⁹. La variazione tra gli studi nelle fasi procedurali chiave può introdurre distorsioni irreversibili che possono influenzare i segnali dei biomarcatori e la loro interpretazione, che possono essere responsabili di discrepanze tra diversi studi¹⁰. Ciò di.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Acido borico	Sigma-Aldrich	B6768	Da considerare per campioni che non possono essere processati rapidamente e congelati
Scatole per congelatore	Fisher Scientific	03-395-464
Provette per microcentrifuga	Thomas scientific	1149X93
NGAL ELISA Kit	R& D Systems	DLCN20	Utilizzato per creare risultati rappresentativi
Pipette e puntali	A seconda delle dimensioni della pipetta e del volume di liquido.
Sodio azide	Sigma-Aldrich	S2002	Da considerare per i campioni che non possono essere processati e congelati
rapidamente Tazze per la raccolta delle urine	Thermo Scientific	3122B03ORG	Tazze sterili non necessarie a meno che non siano necessarie per altri studi