Utilizzo di baseplating e un miniscopio preancorato con una lente obiettiva per la ricerca transitoria di calcio nei topi

Yi-Tse Hsiao; Angela Yu-Chi Wang; Ting-Yen Lee; Ching-Yuan Chang

doi:10.3791/62611

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Articolo metodologico

Utilizzo di baseplating e un miniscopio preancorato con una lente obiettiva per la ricerca transitoria di calcio nei topi

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DOI:

10.3791/62611

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5 giugno 2021

Yi-Tse Hsiao¹ , Angela Yu-Chi Wang¹ , Ting-Yen Lee¹ , Ching-Yuan Chang¹

¹Department of Veterinary Medicine, School of Veterinary Medicine, National Taiwan University

In questo articolo

Sommario

Il restringimento del cemento dentale durante la polimerizzazione sposta la piastra di base. Questo protocollo minimizza il problema creando una base iniziale del cemento dentale che lascia spazio per cementare la piastra di base. Settimane dopo, la piastra di base può essere cementata in posizione su questa impalcatura utilizzando poco nuovo cemento, riducendo così il restringimento.

Abstract

I neuroscienziati usano microscopi in miniatura (miniscopi) per osservare l'attività neuronale negli animali che si comportano liberamente. Il team Miniscope dell'Università della California, Los Angeles (UCLA) fornisce risorse aperte ai ricercatori per costruire miniscopi stessi. Il miniscope UCLA V3 è uno dei miniscope open source più popolari attualmente in uso. Permette l'imaging dei transitori di fluorescenza emessi da neuroni geneticamente modificati attraverso una lente obiettiva impiantata sulla corteccia superficiale (un sistema a una lente), o nelle aree cerebrali profonde attraverso una combinazione di una lente relè impiantata nel cervello profondo e una lente obiettiva che è preancorata nel miniscopio per osservare l'immagine trasmessa (un sistema a due lenti). Anche in condizioni ottimali (quando i neuroni esprimono indicatori di fluorescenza e la lente del relè è stata impiantata correttamente), una variazione di volume del cemento dentale tra la piastra di base e il suo attaccamento al cranio durante la polimerizzazione del cemento può causare disallineamento con una distanza alterata tra l'obiettivo e le lenti del relè, con conseguente scarsa qualità dell'immagine. Una piastra di base è una piastra che aiuta a montare il miniscopio sul cranio e fissa la distanza di lavoro tra l'obiettivo e le lenti del relè. Pertanto, i cambiamenti nel volume del cemento dentale attorno alla piastra di base alterano la distanza tra le lenti. Il presente protocollo mira a ridurre al minimo il problema del disallineamento causato dalle variazioni di volume nel cemento dentale. Il protocollo riduce il disallineamento costruendo una base iniziale di cemento dentale durante l'impianto della lente relè. Il tempo di convalescenza dopo l'impianto è sufficiente per la fondazione del cemento dentale per polimerizzare completamente la piastra di base, quindi la piastra di base può essere cementata su questa impalcatura usando il minor cemento nuovo possibile. Nel presente articolo, descriviamo le strategie per il baseplating nei topi per consentire l'imaging dell'attività neuronale con una lente obiettiva ancorata al miniscopio.

Introduzione

I reporter di attività fluorescente sono ideali per l'imaging dell'attività neuronale perché sono sensibili e hanno ampie gamme dinamiche ^1,2,3. Pertanto, un numero crescente di esperimenti utilizza la microscopia a fluorescenza per osservare direttamente l'attività neuronale 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15 ....