Questo articolo presenta un protocollo passo-passo per l'impianto diretto della cannula nella cisterna magna dei maiali.
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Articolo metodologico
Impianto diretto di cannule nella Cisterna Magna dei Suini
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il sistema glinfatico è un sistema di rimozione dei rifiuti nel cervello che si basa sul flusso di liquido cerebrospinale (CSF) negli spazi perivascolari legati agli astrociti ed è stato implicato nella clearance di peptidi neurotossici come l'amiloide-beta. La compromissione della funzione glinfatica aggrava la patologia della malattia in modelli animali di malattie neurodegenerative, come l'Alzheimer, il che evidenzia l'importanza di comprendere questo sistema di clearance. Il sistema glinfatico è spesso studiato da cisterna magna cannulations (CMc), dove i traccianti vengono consegnati direttamente nel liquido cerebrospinale (CSF). La maggior parte degli studi, tuttavia, sono stati condotti su roditori. Qui, dimostriamo un adattamento della tecnica CMc nei suini. Utilizzando CMc nei suini, il sistema glinfatico può essere studiato ad alta risoluzione ottica nel cervello vorencefalico e così facendo colma il divario di conoscenza tra roditori e glinfatici umani.
Introduzione
Il liquido cerebrospinale (CSF) è un ultrafiltrato di sangue che si trova all'interno e intorno al sistema nervoso centrale (SNC)1,2. Oltre a dare galleggiabilità al cervello o assorbire forze meccaniche dannose, il liquido cerebrospinale svolge anche un ruolo fondamentale nella rimozione dei rifiuti metabolici dal SNC3. La rimozione dei rifiuti è facilitata dal sistema glinfatico recentemente caratterizzato che consente il flusso convettivo del liquido cerebrospinale attraverso il parenchima cerebrale attraverso gli spazi perivascolari (PVS), che circondano le arterie penetranti3,4,5.<....
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Protocollo
Tutte le procedure sono state eseguite in conformità con la direttiva europea 2010/63/UE e sono state approvate dal comitato etico per la ricerca animale di Malmö-Lund (Dnr 5.8.18-05527/2019) e condotte secondo le linee guida CODEX del Consiglio svedese della ricerca.
1. Preparazione
- Tracciante
- Preparare il liquido cerebrospinale artificiale (126 mM NaCl, 2,5 mM KCl, 1,25 mM NaH2PO4, 2 mM MgCl2, 2 mM CaCl2, 10 mM glucosio, 26 mM NaHCO3; pH 7,4)
- A 500 μL di liquido cerebrospinale artificiale, aggiungere 10 mg di albumina da siero bovino (BSA) coniugato con Al....
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Risultati
Una volta che il maiale è incosciente, viene palpato e la sua anatomia superficiale è segnata, a partire dalla cresta occipitale (OC) e lavorando verso le vertebre toraciche (TV) e ogni base auricolare (EB). È lungo queste linee che vengono fatte le incisioni dermiche (Figura 1A). I tre strati muscolari trapezio, semispinalis capitus biventer e semispinalis capitus complexus sono resecati e tenuti aperti da due serie di riavvolgitori auto-trattenibili per esporre la cisterna magna (CM) (
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Discussione
Qui, è descritto, un protocollo dettagliato per eseguire la cannulazione diretta della cisterna magna nei suini, compresa la preparazione necessaria, la procedura chirurgica, l'infusione del tracciante e l'estrazione del cervello. Ciò richiede qualcuno con esperienza e certificazione per lavorare con animali di grandi dimensioni. Se eseguito correttamente, ciò consente la consegna delle molecole desiderate con certezza direttamente nel liquido cerebrospinale, dopo di che una serie di diverse modalità avanzate di imaging .......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto dalla Knut and Alice Wallenberg Foundations, Hjärnfonden, Wenner Gren Foundations e dalla Crafoord Foundations.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| 0,01% di azide in PBS | Sigmaaldrich | S2002 | |
| 18G ago | Mediq | ||
| 1ml siringa | FischerSci | 15849152 | |
| 20G cannula | Mediq | NA | |
| 22G cannula | Mediq | NA | |
| 4% paraformaldeide | Sigmaaldrich | P6148 | |
| Anatomico pinze | NA | NA | |
| Albumina sierica bovina Alexa-Fluor 647 Coniugato | ThermoFischer | A34785 | 2 fiale (10mg) |
| CaCl2 | Sigmaaldrich | C1016 | |
| Scalpello | ClasOhlson | 40-8870 | |
| Cemento dentale | Agnthos | 7508 | |
| sega compatta | ClasOhlson | 40-9517 | |
| Glucosio | Sigmaaldrich | G8270 | |
| Martello | ClasOhlson | 40-7694 | |
| Insta-Set CA Acceleratore | BSI-Inc | BSI-151 | |
| IV linea TAP, 3 VIE con estensione 10cm | Bbraun | NA | |
| KCl | Sigmaaldrich | P9333 | |
| Pennarello | NA | NA | |
| MgCl2 | Sigmaaldrich | M8266 | |
| MilliQ acqua | NA | NA | |
| NaCL | Sigmaaldrich | S7653 | |
| NaH2PO4 | Sigmaaldrich | S8282 | |
| NaHCO3 | Sigmaaldrich | S5761 | |
| Lama | per bisturi n. 20Agnthos | BB520 | |
| N. 21 Lama per bisturi | Agnthos | BB521 | |
| N. 4 Manico per bisturi | Agnthos | 10004-13 | |
| Soluzione salina | Mediq NA | ||
| Coltello per salmone | Fiskers | NA | |
| Divaricatori autobloccanti | NA | NA | |
| Supercolla | NA | NA | |
| Forbici curve chirurgiche | NA | NA | |
| Pinze chirurgiche | NA | NA | |
| Pinze per asciugamani chirurgici | NA | NA |
Riferimenti
- Redzic, Z. B., Segal, M. B. The structure of the choroid plexus and the physiology of the choroid plexus epithelium. Advanced Drug Delivery Reviews. 56 (12), 1695-1716 (2004).
- Sakka, L., Coll, G., Chazal, J. Anatomy....
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Ristampe e permessi
