Le strisce immunocromatografiche a flusso laterale a membrana (ICI) sono strumenti utili per l'autodiagnosi a basso costo e sono state applicate in modo efficiente alla rilevazione di tossine, indici fisiologici e biomarcatori clinici. In questo protocollo, forniamo una descrizione dettagliata dei passaggi per sviluppare un test immunologico a flusso laterale rapido, sensibile e quantitativo (utilizzando AuNP come marcatore e mAbs come sonda). La procedura descrive la preparazione e la caratterizzazione dell'oro colloidale, la sintesi del coniugato AuNP-mAb, l'assemblaggio della striscia immunocromatografica e l'indagine metodologica del saggio. I risultati hanno mostrato che le strisce finali possono essere ulteriormente utilizzate per l'autodiagnosi rapida e conveniente di una piccola molecola, che può fornire uno strumento alternativo nell'analisi rapida e precisa degli indici fisiologici e biologici.
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Articolo metodologico
Sviluppo di una striscia immunocromatografica a flusso laterale per la rilevazione rapida e quantitativa di composti di piccole molecole
* These authors contributed equally
In questo articolo
Abstract
Introduzione
Le strisce immunocromatografiche a flusso laterale (ICI) a membrana sono strumenti utili per il rilevamento rapido e a basso costo. La membrana di nitrocellulosa come vettore e l'oro colloidale come marcatori dei reagenti diagnostici rapidi per cromatografia immunitaria sono il metodo POCT (point of care testing) più comunemente usato e l'ambito di prova del progetto è più ampio. Dalla loro applicazione originale nel monitoraggio durante la gravidanza, il loro uso è stato esteso per monitorare lo stato di coagulazione del sangue1,2, danno miocardico3, medicina veterinaria
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Protocollo
Tutte le procedure eseguite in questo studio sono state approvate dal Comitato di revisione etica presso l'Università di Medicina Cinese di Pechino (numero di approvazione 2017BZYYL00120).
1. Preparazione e caratterizzazione dell'oro colloidale
NOTA: Per la sintesi dell'oro colloidale, poiché l'oro colloidale è facilmente adsorbito sulla parete interna del recipiente ed è soggetto a precipitazioni da parte di impurità, il recipiente per la sintesi e lo stoccaggio dell'oro colloidale deve essere accuratamente pulito e imbevuto di acido (40 ml di acqua distillata, 360 ml di acido solforico concentrat....
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Risultati
Caratterizzazione dell'oro colloidale
Le soluzioni di oro colloidale preparate erano rosso claret. Le analisi TEM sono state utilizzate per determinare la morfologia e la forma degli AuNP (Figura 2A-D). La Figura 2A e la Figura 2B rivelano che le particelle sono di forma poliedrica e uniformemente distribuite. Il diametro medio degli AuNP è risultato essere di circa 14 nm (Fi.......
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Discussione
In questo lavoro, presentiamo un protocollo per la preparazione di mAbs contro piccole molecole derivate da prodotti naturali. I passaggi essenziali e le questioni che richiedono attenzione nella procedura sono stati delineati e abbiamo dimostrato l'utilità di questo protocollo utilizzando l'SSD a piccola molecola come esempio. Spettri di esempio, immagini TEM, risultati quantitativi e indagini metodologiche sono mostrati in dati rappresentativi. Quindi, abbiamo dimostrato che la produzione di oro colloidale, la coniugaz.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto dai Fondi speciali per i fondi di ricerca fondamentale di istituti di istruzione superiore affiliati ai dipartimenti centrali. Apprezziamo il supporto del Classical Prescription Basic Research Team dell'Università di Medicina Cinese di Pechino.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Soluzione di acido cloroaurico (HAuCl4) | Tianjin Fu Chen Chemical Reagents Factory | JY-SJ102 | |
| albumina sierica bovina | AMRESCO | 332 | |
| provetta da centrifuga 15 mL | Corning | 430645 | |
| provetta da centrifuga 50 mL | Corning | 430828 | |
| piastre ELISA, 96 pozzetti | NUNC | 655101 | |
| Carta da filtro | Sinopharm | H5072 | |
| Membrane in fibra di vetro | Jieyi | XQ-Y6 | |
| capra-anti-topo IgG | anticorpo applygen | C1308 | |
| Membrane nitrocellulosiche | Millipore | milliporo 180 | |
| ovoalbumina | Pechino BIODEE | 5008-25g | |
| PEG20000 | Sigma Aldrich | ||
| Pipetta 10mL | COSTAR | 4488 | |
| Pipetta 25mL | FALCON | 357525 | |
| fogli in PVC semirigido | Jieyi | JY-C104 | |
| Citrato di sodio | Beijing Chemical Works | C1034 | |
| periodato di sodio | Sinopharm Chemical | BW-G0008 | |
| Sulfo-GMBS | Perbio Science Germania | 22324 | |
| TipOne Punte 1.000 µ L | Starlab | S1111-2021 | |
| Tris-HCl | Solarbio | 77-86-1 | |
| TWEEN 20 | Solarbio | 9005-64-5 |
Riferimenti
- Huang, X., et al. Membrane-based lateral flow immunochromatographic strip with nanoparticles as reporters for detection: A review. Biosensors and Bioelectronics. 75, 166-180 (2016).
- Chang, H. -F., Wang, J. -Q., Wang, B., Deng, A. -P.
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Ristampe e permessi
