Questo studio descrive la misurazione diretta della produzione epatica di glucosio in un modello murino di sindrome dell'ovaio policistico utilizzando un tracciante di glucosio isotopico stabile attraverso la vena della coda sia a digiuno che in stati ricchi di glucosio in tandem.
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Articolo metodologico
Valutazione della produzione epatica di glucosio in un modello murino di sindrome dell'ovaio policistico
In questo articolo
Sommario
Abstract
La sindrome dell'ovaio policistico (PCOS) è una malattia comune che provoca disturbi del metabolismo del glucosio, come l'insulino-resistenza e l'intolleranza al glucosio. Il metabolismo disregolato del glucosio è una manifestazione importante della malattia ed è la chiave della sua patogenesi. Pertanto, gli studi che coinvolgono la valutazione del metabolismo del glucosio nella PCOS sono della massima importanza. Pochissimi studi hanno quantificato la produzione di glucosio epatico direttamente in modelli PCOS utilizzando traccianti di glucosio non radioattivi. In questo studio, discutiamo le istruzioni passo-passo per la quantificazione del tasso di produzione di glucosio epatico in un modello murino PCOS misurando l'arricchimento M + 2 di [6,6-2H2] glucosio, un tracciante isotopico stabile del glucosio, tramite gascromatografia - spettrometria di massa (GCMS). Questa procedura prevede la creazione di una soluzione stabile di tracciante isotopico del glucosio, l'uso del posizionamento del catetere della vena della coda e l'infusione del tracciante del glucosio sia a digiuno che ricchi di glucosio nello stesso topo in tandem. L'arricchimento del glucosio [6,6-2H2] viene misurato utilizzando il derivato del pentaacetato in GCMS. Questa tecnica può essere applicata a un'ampia varietà di studi che coinvolgono la misurazione diretta del tasso di produzione epatica di glucosio.
Introduzione
La sindrome dell'ovaio policistico (PCOS) è una malattia comune che si verifica nel 12%-20% delle donne in età riproduttiva1,2. È una malattia complessa che provoca fenotipi variabili che coinvolgono ovaie policistiche, mestruazioni irregolari e prove cliniche o di laboratorio di iperandrogenemia, e viene tipicamente diagnosticata quando una donna soddisfa due dei tre criteri3. Un aspetto predominante della PCOS, e un fattore chiave nella sua patogenesi, sono gli squilibri metabolici che si trovano nelle donne che hanno la malattia. Le donne con PCOS hanno una maggiore incidenza di insu....
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Protocollo
Tutte le procedure per gli animali sono state approvate dall'Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) del Baylor College of Medicine.
1. Preparazione di [6,6-2H2]glucosio
- Un giorno prima della procedura, preparare il tracciante di glucosio isotopico stabile in soluzione salina normale. Per questo esperimento, il glucosio [6,6-2H2] è stato usato come tracciante per misurare il tasso di comparsa del glucosio plasmatico.
NOTA: In questo esperimento, è stata misurata la produzione di glucosio durante il digiuno e le condizioni ricche di glucosio, quindi l'isoto....
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Risultati
Utilizzando equazioni di diluizione isotopica precedentemente descritte, il tasso di glucosio plasmatico totale (glucoseRa) è stato calcolato dall'arricchimento M+2 di [6,6-2H2]glucosio in condizioni di digiuno e ricche di glucosio utilizzando il derivato pentaacetato21. In condizioni di stato stazionario, si presume che il tasso di comparsa del glucosio sia uguale al tasso di scomparsa del glucosio. Nel gruppo di controllo, il glugerba totale è stato di.......
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Discussione
L'iperglicemia e il metabolismo anormale del glucosio / omeostasi sono caratteristiche della PCOS. Il livello di glucosio nel sangue è mantenuto da una combinazione di glucosio dalla dieta e produzione di glucosio attraverso la glicogenolisi e la gluconeogenesi e la glicogenesi, sotto il controllo di ormoni ed enzimi. La produzione epatica di glucosio è soppressa dalla presenza di un aumento dei livelli di glucosio circolante. Nei disturbi del metabolismo anormale del glucosio, la regolazione della soppressione .......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato supportato da sovvenzioni di formazione dal Dipartimento di Ostetricia e Ginecologia, Baylor College of Medicine (ALG) e R-01 research grant (Grant # DK114689) per CSB, SC e JM dal National Institutes of Health.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Soluzione di cloruro di sodio allo 0,9% | McKesson | 275595 | |
| 10 mL Siringa BD con punta Luer-Lok | VWR | 75846-756 | Due siringhe per animale (una per la soluzione isotopica di glucosio, una per la soluzione isotopica ricca di glucosio) |
| Nastro traspore trasparente da 1 pollice | 3M | 70200400169 | |
| Nastro per etichettatura da 1 pollice | Fisher | GS07F161BA | Brand è un esempio |
| Siringa da 5 mL contenente soluzione salina eparanizzata | McKesson | 191-MIH-2235 | Si può anche preparare una soluzione di lavaggio con eparina (10 unità/mL di eparina in cloruro di sodio allo 0,9%) |
| 5 mm Medipoint Goldenrod lancette per animali | Fisher | Scientific NC9891620 | 5 mm se l'animale ha un'età compresa tra 2 e 6 mesi |
| Acetone | Sigma-Aldrich | 650501 | |
| Agitatore avanzato con piastra riscaldante | VWR | 97042-602 | Il marchio è l'esempio |
| Aghi BD calibro 27 da 0,5 pollici Health | Warehouse | A283952 | |
| Aghi da 0,5 pollici calibro BD 30 | Bicchiere Medvet | 305106 | |
| BD Intramedic 0,28 mm ID x 0,61 mm | VWR | 63019-004 | |
| BD Intramedic Tubo in polietilene (PE) 0,28 mm ID x 0,61 mm | VWR | 63019-004 | |
| Becher, 1000 ml | Qualsiasi marca | ||
| Pellet per gabbia Fiale | |||
| in vetro VOA trasparente con tappo chiuso | Fisher Scientific | 05-719-120 | Per la conservazione di campioni di acetone e prelievo di sangue |
| Morsetto a coccodrillo senza denti in rame per laccio emostatico | Amazon | Qualsiasi marca; clip a coccodrillo senza denti lisci in rame massiccio | |
| D-(+)-glucosio >99,5% | Sigma-Aldrich | G8270 | |
| D-glucosio (6,6-D2, 99%) | Cambridge Isotope Laboratories, Inc. | DLM-349-PK | |
| Dow Corning tubo silastico 0,3 mm ID x 0,64 mm OD | VWR | 62999-042 | |
| Lente d'ingrandimento | Amazon | Qualsiasi marca; simile a LANCOSC Lente d'ingrandimento con luce e supporto | |
| Microbalance | Ohaus Adventurer Pro | AV264C | È possibile utilizzare qualsiasi modello simile con precisione di 0,0001 g |
| Flacone Nalgene, 500 mL | Sigma-Aldrich | B0158-12EA | O qualsiasi marca simile; sega a metà (compreso il coperchio) e taglio della tacca delle dimensioni di una coda nella parte inferiore PHD |
| Ultra pompa multi-siringa | Harvard Apparatus | 70-3024A | |
| Foglio | Qualsiasi marca; per stabilizzare il topo durante l'inserimento del catetere | ||
| Fogli di plexiglass e divisori Qualsiasi | marca; utilizzato per ingabbiare i topi durante l'infusione |
Riferimenti
- March, W. A., et al. The prevalence of polycystic ovary syndrome in a community sample assessed under contrasting diagnostic criteria. Human Reproduction. 25 (2), 544-551 (2009).
- Yildiz, B. O., et al.
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Ristampe e permessi
