Una solida piattaforma di scoperta per l'identificazione di nuovi mediatori delle metastasi del melanoma

Arman Alberto Sorin Shadaloey; Alcida Karz; Rana S. Moubarak; Praveen Agrawal; Grace Levinson; Kevin Kleffman; Orlando Aristizabal; Iman Osman; Youssef Z. Wadghiri; Eva Hernando

doi:10.3791/63186

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Articolo metodologico

Una solida piattaforma di scoperta per l'identificazione di nuovi mediatori delle metastasi del melanoma

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DOI:

10.3791/63186

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8 marzo 2022

Arman Alberto Sorin Shadaloey¹^,² , Alcida Karz¹^,² , Rana S. Moubarak¹^,² , Praveen Agrawal¹^,² , Grace Levinson¹^,² , Kevin Kleffman¹^,² , Orlando Aristizabal³^,⁴ , Iman Osman²^,⁵ , Youssef Z. Wadghiri³^,⁴ , Eva Hernando¹^,²

¹Department of Pathology, NYU Grossman School of Medicine, ²Interdisciplinary Melanoma Cooperative Group, Perlmutter Cancer Center, ³Department of Radiology, NYU Grossman School of Medicine, ⁴Preclinical Imaging Core, NYU Grossman School of Medicine, ⁵Ronald Perelman Department of Dermatology, NYU Grossman School of Medicine

In questo articolo

Sommario

Questo articolo descrive un flusso di lavoro di tecniche impiegate per testare nuovi potenziali mediatori di metastasi del melanoma e i loro meccanismi d'azione.

Abstract

Le metastasi sono un processo complesso, che richiede alle cellule di superare barriere che sono solo modellate in modo incompleto da saggi in vitro . È stato stabilito un flusso di lavoro sistematico utilizzando modelli in vivo robusti e riproducibili e metodi standardizzati per identificare nuovi attori nelle metastasi del melanoma. Questo approccio consente l'inferenza dei dati in specifiche fasi sperimentali per caratterizzare con precisione il ruolo di un gene nelle metastasi. I modelli vengono stabiliti introducendo cellule di melanoma geneticamente modificate tramite iniezioni intracardiache, intradermiche o sottocutanee nei topi, seguite dal monitoraggio con imaging seriale in vivo . Una volta raggiunti gli endpoint prestabiliti, i tumori primari e/o gli organi portatori di metastasi vengono prelevati ed elaborati per varie analisi. Le cellule tumorali possono essere ordinate e sottoposte a una qualsiasi delle diverse piattaforme "omiche", incluso il sequenziamento dell'RNA a singola cellula. Gli organi vengono sottoposti ad imaging e analisi immunoistopatologiche per quantificare il carico complessivo delle metastasi e mappare la loro specifica posizione anatomica. Questa pipeline ottimizzata, compresi i protocolli standardizzati per l'attecchimento, il monitoraggio, la raccolta dei tessuti, l'elaborazione e l'analisi, può essere adottata per colture derivate dal paziente, a breve termine e linee cellulari umane e murine consolidate di vari tipi di cancro solido.

Introduzione

L'elevata mortalità associata al melanoma metastatico combinata con una crescente incidenza di melanoma in tutto il mondo¹ (un aumento stimato del 7,86% entro il 2025) richiede nuovi approcci terapeutici. I progressi nella scoperta del target dipendono da modelli riproducibili di metastasi, un processo altamente complesso. Durante le fasi della cascata metastatica, le cellule di melanoma devono superare innumerevoli barriere per raggiungere l'evasione del sistema immunitario e la colonizzazione di tessuti distanti². La resilienza e l'adattabilità delle cellule di melanoma derivano da una moltitudine di fattori, tra cui i....