Analisi della differenziazione cellulare, della morfogenesi e del pattern durante l'embriogenesi del pollo utilizzando il test Soaked-Bead

Summary

Il test del tallone imbevuto prevede la consegna mirata del reagente di prova in qualsiasi momento dello sviluppo per studiare la regolazione della differenziazione cellulare e della morfogenesi. Viene presentato un protocollo dettagliato, applicabile a qualsiasi modello animale sperimentale, per preparare tre diversi tipi di perline imbevute e impiantarle nell'interdigit di un embrione di pollo.

Abstract

Una moltitudine di programmi genetici viene attivata durante lo sviluppo embrionale che orchestra la differenziazione cellulare per generare una sorprendente diversità di cellule somatiche, tessuti e organi. L'attivazione precisa di questi programmi genetici è regolata dai morfogeni, molecole diffusibili che dirigono il destino cellulare a diverse soglie. Capire come l'attivazione genetica coordina la morfogenesi richiede lo studio delle interazioni locali innescate dai morfogeni durante lo sviluppo. L'uso di perline imbevute di proteine o farmaci impiantati in regioni distinte dell'embrione consente di studiare il ruolo di molecole specifiche nella creazione di dita e altri processi di sviluppo. Questa tecnica sperimentale fornisce informazioni sul controllo dell'induzione cellulare, del destino cellulare e della formazione del modello. Pertanto, questo test di perline imbevute è uno strumento sperimentale estremamente potente e prezioso applicabile ad altri modelli embrionali.

Introduction

Le scoperte nei meccanismi molecolari che controllano l'espressione genica durante lo sviluppo embrionale ci hanno permesso di capire come viene determinato il destino cellulare. L'impegno verso diverse linee cellulari si verifica una volta che le cellule iniziano l'espressione molecolare dei fattori di trascrizione¹. Questo modello di espressione è altamente coordinato nello spazio e nel tempo e quindi dirige la modellazione, il posizionamento e il pattern di cellule, tessuti e organi 1,2,3,4,5.

Protocol

Questa ricerca è stata esaminata e approvata dall'Institutional Review Board for the Care and Use of Laboratory Animals dell'Instituto de Investigaciones Biomédicas, Universidad Nacional Autónoma de México (UNAM, Città del Messico, Messico).

1. Incubazione dell'uovo e stadiazione dell'embrione

NOTA: Le uova di gallina fecondate possono essere ottenute da allevamenti locali. Le uova di gallina Livorno bianca fecondate sono più comunemente usate. Conservare le uova di gallina appena fecondate a 15 °C per un massimo di 1 settimana prima dell'incubazione.

1. Incubare le uova di gallina feconda....

Results

Utilizzo di perline imbevute per valutare il comportamento cellulare nell'arto embrionale del pulcino
Per garantire l'efficacia di questo test, il tallone deve essere posizionato in modo coerente e preciso nella posizione corretta; in questo caso, la maggior parte distale della terza interdigit sotto la cresta ectodermica apicale AER (Figura 1A). Questo posizionamento permette alla molecola in questione di diffondersi equamente in tutto il tessuto interdigitale. Inoltre, .......

Discussion

Il vantaggio principale dello strumento sperimentale dettagliato in questo protocollo è quello di poter controllare il tempo e la posizione dell'esposizione alle perline imbevute di una determinata molecola sperimentale. La combinazione del corretto posizionamento con tempi di sviluppo precisi offre enormi possibilità per studiare i processi di differenziazione cellulare. L'esecuzione di questi esperimenti nel tessuto indifferenziato consente di indagare i primi eventi cruciali nel lignaggio cellulare. Ad esempio, posizi.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Affi-Gel Blu Perline di gel	Bio-Rad	153-7302
Perline AG1-X2	Bio-Rad	1400123
Incubatrice per uova	Incumatic de Mexico	Incumatic 1000
Pinze chirurgiche fini	Fine Science Tools	9115-10
Perline di eparina sefarosio	Abcam	ab193268
Piastra di Petri	Nido
Stereomicroscopio	Zeiss	Stemi DV4
Nastro	NA	NA Ago
tungsteno	GoodFellow	E74-15096/01