Il test meccanico di evitamento dei conflitti viene utilizzato come lettura non riflessiva della sensibilità al dolore nei topi che può essere utilizzata per comprendere meglio le risposte affettivo-motivazionali in una varietà di modelli di dolore murino.
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Articolo metodologico
Saggio meccanico di prevenzione dei conflitti per misurare il comportamento del dolore nei topi
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il dolore comprende sia le dimensioni sensoriali (nocicettive) che affettive (spiacevoli). Nei modelli preclinici, il dolore è stato tradizionalmente valutato utilizzando test riflessivi che consentono inferenze riguardanti la componente nocicettiva del dolore, ma forniscono poche informazioni sulla componente affettiva o motivazionale del dolore. Lo sviluppo di test che catturino questi componenti del dolore è quindi importante dal punto di vista della traduzione. Quindi, i ricercatori devono utilizzare saggi comportamentali non riflessivi per studiare la percezione del dolore a quel livello. L'evitamento meccanico dei conflitti (MCA) è un test volontario di comportamento non riflessivo stabilito, per studiare le risposte motivazionali a uno stimolo meccanico nocivo in un paradigma a 3 camere. Un cambiamento nella preferenza di posizione di un topo, di fronte a stimoli nocivi concorrenti, viene utilizzato per dedurre la sgradevolezza percepita della luce intensa rispetto alla stimolazione tattile delle zampe. Questo protocollo delinea una versione modificata del test MCA che i ricercatori del dolore possono utilizzare per comprendere le risposte affettivo-motivazionali in una varietà di modelli di dolore murino. Sebbene non siano specificamente descritti qui, i nostri dati MCA di esempio utilizzano l'adiuvante di Freund completo intraplantarare (CFA), la lesione nervosa risparmiata (SNI) e un modello di frattura / fusione come modelli di dolore per illustrare la procedura MCA.
Introduzione
Il dolore è un'esperienza complessa con componenti sensoriali e affettive. Una riduzione della soglia di percezione del dolore e l'ipersensibilità agli stimoli termici e/o meccanici sono caratteristiche chiave di questa esperienza, che i test di comportamento del dolore evocati dallo stimolo possono catturare (come il test di sensibilità al calore di Hargreaves e il test di von Frey di sensibilità meccanica)1,2. Sebbene tali test forniscano risultati robusti e riproducibili, sono limitati dalla loro dipendenza dal ritiro riflessivo da uno stimolo nocivo percepito. Ciò ha messo in discussione una continua dipen....
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Protocollo
Tutti gli esperimenti che coinvolgono l'uso di topi e le procedure ivi seguite sono stati approvati dai comitati istituzionali per la cura e l'uso degli animali del MD Anderson Cancer Center e della Stanford University, in stretta conformità con la Guida del National Institutes of Health per la cura e l'uso degli animali da laboratorio.
1. Costruzione MCA
- Camera di costruzione 1 con le seguenti dimensioni: 125 mm x 125 mm x 125 mm (larghezza x profondità x altezza) da acrilico bianco opaco di 3 mm di spessore utilizzato per le pareti laterali, pavimento, soffitto. Utilizzare un acrilico trasparente di 3 m....
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Risultati
Il test MCA è stato utilizzato con successo con diversi modelli di dolore murino meccanicamente distinti. La Figura 2 mostra i dati in cui la misura del risultato scelta stava attraversando il punto medio della camera 2 (Figura 2A). I dati ottenuti utilizzando il punto intermedio rispetto alla fuga nella camera 3 sono molto simili, ~ 40 s per metà strada contro ~ 45 s per la fuga della camera 3 nel modello di danno nervoso risparmiato (SNI) del dolore neuropatic.......
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Discussione
Come per tutti i test comportamentali, la corretta gestione, randomizzazione e accecamento al trattamento degli animali è essenziale in tutto. Dati gli input multifattoriali in comportamenti complessi e processi decisionali, è imperativo che gli animali siano maneggiati, abituati e testati nel modo più coerente possibile, riducendo al minimo l'angoscia. Bisogna anche fare attenzione a riprodurre i tempi di posizionamento del mouse nella camera 1, accendendo le luci a LED e rimuovendo la barriera, poiché le differenze qui.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno conflitti di interesse rilevanti da divulgare.
Ringraziamenti
GM è supportato da una NDSEG Graduate Fellowship. Il VLT è supportato dal NIH NIGMS grant #GM137906 e dalla Rita Allen Foundation. AJS è supportato dalle sovvenzioni del Dipartimento della Difesa W81XWH-20-1-0277, W81XWH-21-1-0197 e dalla Rita Allen Foundation. Siamo grati al Dr. Alexxai Kravitz della Washington University School of Medicine per aver progettato e reso liberamente disponibili i file della stampante 3D per il pavimento della camera 2 e la piastra della sonda.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Strisce LED bianche sintonizzabili da 32,8 piedi 3000K-6000K, luci a nastro LED super luminose dimmerabili con 600 LED SMD 2835 | Lepro | SKU: 410087-DWW-US | Per la camera di illuminazione 1. https://www.lepro.com/32ft-dimmable-tunable-white-led-strip-lights.html |
| "letto a spillo" e "camera 2 pavimento" stampati in 3D | Shapeways | N/A | Opzionale, per sonde meccaniche in alternativa ai pin della mappa smussati. |
| 70% etanolo | Vari | N/A | Per pulire MCA tra i topi. |
| Acryl-Hinge 2 | TAP Plastics | N/A | per il fissaggio dei coperchi delle camere alle pareti posteriori. https://www.tapplastics.com/product/plastics/handles_hinges_latches/acryl_hinge_2/122 |
| Lastra acrilica Chemcast Cast, plastica TAP trasparente | N/A | 3 mm di spessore. Per la parete anteriore della camera 1. https://www.tapplastics.com/product/plastics/cut_to_size_plastic/acrylic_sheets_cast_clear/510 | |
| Chemcast Cast Acrilico Colorato Trasparente, Rosso Scuro Trasparente - 50% | Plastica TAP | N/A Spessore | 3mm. 50% di trasmissione della luce. Per pareti e coperchi delle camere 2 e 3. https://www.tapplastics.com/product/plastics/cut_to_size_plastic/acrylic_sheets_transparent_colors/519 |
| Chemcast Traslucido & Acrilico Cast Colorato Opaco, Insegna Bianco Opaco - 0,1% | Plastica TAP | N/A Spessore | 3mm. Per le pareti laterali e il coperchio della camera 1. https://www.tapplastics.com/product/plastics/cut_to_size_plastic/acrylic_sheets_color/341 |
| Disinfettante (ad es. Quatricida) | Laboratori di ricerca farmaceutica, Inc. | 65020F | Per disinfettare l'MCA al termine di una sessione di test. |
| Pennarelli cancellabili a secco e scheda | Vari | N/A | Per aggiungere informazioni sperimentali all'inizio del filmato. |
| Perni mappa | Vari | N/A | Opzionale, per sonde meccaniche. Usa la carta vetrata per smussare le punte acuminate prima dell'uso. Può essere utilizzato al posto delle parti stampate in 3D. |
| Asciugamani di carta | Vari | N/A | Per pulire/disinfettare MCA. |
| SCIGRIP Weld-On #3 Cemento acrilico | TAP Plastics | N/A | Per l'assemblaggio di lastre acriliche in camere e il fissaggio di cerniere. https://www.tapplastics.com/product/repair_products/plastic_adhesives/weld_on_3_cement/131 |
| Cronometro | Vari | N/A | Per registrare latenze/tempi di sosta in tempo reale o da video registrati. |
| Timer | Vari | N/A | Per garantire che l'accensione del LED, la rimozione della barriera e il completamento del test siano cronometrati in modo coerente. |
| Videocamera | Varie | HDRCX405 Videocamera Handycam | Per registrare il comportamento del mouse nel dispositivo MCA. Può essere sostituita con qualsiasi videocamera di livello consumer in grado di raggiungere una risoluzione di 1080p. |
| Treppiede | Famall | N/A | È accettabile qualsiasi treppiede in grado di tenere la telecamera all'altezza del banco per la registrazione di filmati MCA. |
Riferimenti
- Hargreaves, K., Dubner, R., Brown, F., Flores, C., Joris, J. A new and sensitive method for measuring thermal nociception in cutaneous hyperalgesia. Pain. 32 (1), 77-88 (1988).
- Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. Quantitative ....
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Ristampe e permessi
