Questo protocollo presenta una guida pratica sulla chirurgia per la creazione di rigurgito aortico (AR) nel topo. La valutazione del topo AR mediante ecocardiografia e misurazione emodinamica invasiva ricapitola le sue caratteristiche clinicamente rilevanti dell'ipertrofia eccentrica indotta da sovraccarico di volume, suggerendo la sua promettente applicazione nello studio dell'ipertrofia cardiaca.
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Articolo metodologico
Sovraccarico di volume cardiaco indotto chirurgicamente mediante rigurgito aortico nel topo
* These authors contributed equally
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il rigurgito aortico (AR) è una comune cardiopatia valvolare che esercita un sovraccarico di volume sul cuore e rappresenta un problema di salute pubblica globale. Sebbene i topi siano ampiamente utilizzati per far luce sui meccanismi delle malattie cardiovascolari, i modelli murini di AR, in particolare quelli indotti dalla chirurgia, sono ancora scarsi. Qui, è stato descritto in dettaglio un modello murino di AR che è indotto chirurgicamente dalla rottura delle valvole aortiche sotto ecocardiografia ad alta risoluzione. In accordo con il flusso sanguigno rigurgitato, i cuori di topo AR presentano un fenotipo di sovraccarico di volume distintivo e clinicamente rilevante, caratterizzato da ipertrofia eccentrica e disfunzione cardiaca, come evidenziato dalla valutazione ecocardiografica ed emodinamica invasiva. La nostra proposta, in modo affidabile e riproducibile, fornisce una guida pratica sulla creazione e la valutazione di un modello murino di AR per futuri studi sui meccanismi molecolari e sui bersagli terapeutici della cardiomiopatia da sovraccarico di volume.
Introduzione
In presenza di un aumento del sovraccarico di volume (precarico) o di pressione (postcarico), il cuore va incontro ad un ingrossamento, una condizione chiamata ipertrofia. Sebbene l'ipertrofia cardiaca sia una risposta compensatoria per mantenere la perfusione degli organi periferici prima dell'insufficienza cardiaca, è anche un fattore di rischio indipendente per i principali eventi cardiovascolari 1,2. Il sovraccarico di volume è una delle manifestazioni importanti dell'aumento delle sollecitazioni meccaniche. Il sovraccarico di volume si verifica durante la diastole cardiac....
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Protocollo
Questo protocollo ha ricevuto l'approvazione etica dal Comitato per la cura e l'uso degli animali dell'ospedale Zhongshan, Università di Fudan, e segue le raccomandazioni della Guida per la cura e l'uso degli animali da laboratorio (n. 85-23, rivista nel 2011; National Institutes of Health, Bethesda, MD, USA).
NOTA: Gli esperimenti sugli animali sono stati eseguiti su topi maschi C57BL/6J di >10 settimane di età. Il chirurgo in questo protocollo dovrebbe essere abile nella manipolazione dell'ecocardiografia murina, prima di eseguire l'operazione AR nel topo. Tuttavia, nella maggior parte degli istituti di r....
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Risultati
Per garantire il successo dell'AR, abbiamo convalidato il flusso sanguigno del rigurgito utilizzando l'ecocardiografia color Doppler e l'ecocardiografia Doppler a onde di polso. Nei topi con AR, lo spettro color Doppler dell'arco aortico mostrava un flusso di rigurgito (rosso) immediatamente dopo l'operazione, che era assente nei topi fittizi (nessun flusso nella diastole; Figura 3A). Coerentemente, il Doppler a onde pulsate ha dimostrato un flusso di rigurgito robustamente elevato nei topi .......
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Discussione
L'induzione chirurgica dell'AR nel topo è una tecnica nuova e tecnicamente impegnativa, ma ha una significativa rilevanza traslazionale. Per padroneggiare la tecnica, un chirurgo dovrebbe almeno avere familiarità in anticipo con l'anatomia cervicale e cardiaca murina, la manipolazione del topo e l'ecocardiografia. L'uso efficiente nella misurazione emodinamica invasiva è un vantaggio. Per il successo del funzionamento dell'AR, è necessario prestare particolare attenzione a diversi passag.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno conflitti di interesse da rivelare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato sostenuto dalla National Natural Science Foundation of China (81941002, 82170389, 82170255, 81730009, 81670228 e 81500191), dalla Laboratory Animal Science Foundation of Science and Technology Commission della Municipalità di Shanghai (201409004300 e 21140904400), dalla Health Science and Technology Project della Shanghai Pudong New Area Health Commission (PW2019A-13) e dal programma "Rising Sun" Excellent Young Medical Talents dello Shanghai East Hospital (2019xrrcjh03).
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Piastra di rame | JD.com Inc. | Personalizzato | 20 X 15 cm o più grande è prefeered |
| Pinze da legatura curve | 66 Tecnologia di visione | Codice: 53324A | per allungare e isolare muscoli, tessuti e vasi sanguigni |
| Termoforo | JD.com Inc. | Changzhi 55 | Scaldare la piastra di rame e il mouse a proposito |
| Pinze di legatura curve a mano lunga | MECHENICO | TS-15 | per allungare il vaso |
| Filo metallico (acciaio inossidabile) | JD.com Inc. | 0,18 mm di diametro | lavorare con un catetere di plastica per perforare le valvole aortiche |
| Porta aghi | Shanghai Jinzhong | 131110 | sutura della pelle |
| Catetere in plastica | Software Anilab & strumenti | PE-0402 | lavorare con un filo metallico per forare le valvole aortiche |
| Catetere a pressione | Strumenti Millar | SPR 835 | 1.4F di dimensioni |
| Dispositivo di acquisizione dati di pressione e convertitore analogico/digitale | Strumenti AD | Grafico di laboratorio 5 | collegato con catetere a pressione |
| Forbice | Suzhou Shiqiang | Più forte 13Cr | per tagliare la pelle |
| Forbici a pizzico piccolo | Shanghai Jinzhong | YBE030 | per tagliare il vaso |
| Stereomicroscopio | Società Olimpo | SMZ845 | per l'incisione e l'intubazione del vaso |
| Pinze da legatura diritte | 66 Tecnologia di visione | Codice: 53320A | per allungare e isolare muscoli, tessuti e vasi sanguigni |
| Detergente enzimatico Tergazyme | Alconox, Inc. | 13051.0 | Rimuove i materiali proteici, i tessuti e il sangue dal catetere |
| Pinze per pollice | Suzhou Shiqiang | 5307B | per bloccare e allungare la pelle e i muscoli |
| Gel per ultrasuoni | PARKER | Acquariofilico-100 | per trasferire il segnale ad ultrasuoni |
| Sistema di imaging a ultrasuoni | VisualSonics | 2100 | include B-mode, modello M, color Doppler e dopper a onde pulsate |
| Vaporizzatore | RWD Scienze della Vita | R540 | per anestesia |
Riferimenti
- You, J., et al. Differential cardiac hypertrophy and signaling pathways in pressure versus volume overload. American Journal of Physiology. Heart and Circulatory Physiology. 314 (3), 552-562 (2018).
- Wu, J., et al.
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Ristampe e permessi
