Articolo metodologico

Induzione e diversi indicatori di valutazione dell'encefalomielite autoimmune sperimentale

DOI:

10.3791/63866

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9 settembre 2022

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1Putuo People's Hospital, Shanghai Key Laboratory of Signaling and Disease Research, School of Life Sciences and Technology, Tongji University, 2National Laboratory of Biomacromolecules, CAS Center for Excellence in Biomacromolecules, Institute of Biophysics, Chinese Academy of Sciences, 3Department of Infectious Diseases, Shanghai Key Laboratory of Infectious Diseases and Biosafety Emergency Response, National Medical Center for Infectious Diseases, Huashan Hospital, Fudan University

* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

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Il presente protocollo descrive l'induzione dell'encefalomielite autoimmune sperimentale in un modello murino utilizzando glicoproteina oligodendrocitaria mielinica e monitorando il processo della malattia utilizzando un sistema di punteggio clinico. I sintomi sperimentali correlati all'encefalomielite autoimmune vengono analizzati utilizzando l'analisi della tomografia microcomputerizzata del femore di topo e il test in campo aperto per valutare il processo della malattia in modo completo.

Abstract

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La sclerosi multipla (SM) è una tipica malattia autoimmune del sistema nervoso centrale (SNC) caratterizzata da infiltrazione infiammatoria, demielinizzazione e danno assonale. Attualmente, non ci sono misure per curare completamente la SM, ma sono disponibili più terapie modificanti la malattia (DMT) per controllare e mitigare la progressione della malattia. Esistono somiglianze significative tra le caratteristiche patologiche del SNC dell'encefalomielite autoimmune sperimentale (EAE) e dei pazienti con SM. L'EAE è stato ampiamente utilizzato come modello rappresentativo per determinare l'efficacia dei farmaci per la SM ed esplorare lo sviluppo di nuove terapie per la malattia della SM. L'induzione attiva di EAE nei topi ha un effetto stabile e riproducibile ed è particolarmente indicata per studiare gli effetti di farmaci o geni sulla neuroinfiammazione autoimmune. Il metodo di immunizzazione dei topi C57BL/6J con glicoproteina oligodendrocitaria mielinica (MOG35-55) e la valutazione giornaliera dei sintomi della malattia utilizzando un sistema di punteggio clinico è principalmente condiviso. Data la complessa eziologia della SM con diverse manifestazioni cliniche, il sistema di punteggio clinico esistente non può soddisfare la valutazione del trattamento della malattia. Per evitare le carenze di un singolo intervento, vengono creati nuovi indicatori per valutare l'EAE sulla base delle manifestazioni cliniche di stati d'animo ansiosi e osteoporosi nei pazienti con SM per fornire una valutazione più completa del trattamento della SM.

Introduzione

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Le malattie autoimmuni sono uno spettro di disturbi causati dalla risposta immunitaria del sistema immunitario ai propri antigeni con conseguente danno o disfunzione tissutale1. La sclerosi multipla (SM) è una malattia autoimmune cronica della polineuropatia nel sistema nervoso centrale (SNC), caratterizzata da infiltrazione infiammatoria, demielinizzazione e degenerazione assonale neuronale 2,3. Attualmente, la SM ha colpito ben 2,5 milioni di persone in tutto il mondo, per lo più giovani e persone di mezza età di età compresa tra 20 e 40 anni, che sono spesso la spina dorsale delle lo....

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Protocollo

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Il Comitato per la cura degli animali dell'Università di Tongji ha approvato il presente lavoro e sono state seguite tutte le linee guida per la cura degli animali. Per gli esperimenti sono stati utilizzati topi maschi o femmine C57BL / 6J tra 8-12 settimane di età. È stato assicurato che l'età e il sesso fossero gli stessi nei gruppi sperimentali; Altrimenti, la suscettibilità alla malattia è stata influenzata. I topi sono stati alloggiati in un ambiente specifico privo di agenti patogeni con cicli alternati di luce e buio di 12 ore in condizioni costanti (temperatura ambiente 23 ± 1 °C, umidità 50% ± 10%), con libero accesso al cibo e all'acqua per topi.

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Risultati

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Dopo l'immunizzazione dei topi, il peso corporeo dei topi viene registrato quotidianamente e i loro sintomi clinici vengono valutati secondo il protocollo sopra descritto (fase 4). Nei topi C57BL/6J immunizzati con peptide MOG, poiché la posizione della lesione è principalmente limitata al midollo spinale, la patogenesi dei topi EAE si diffonde dalla coda alla testa. All'inizio della malattia, i topi EAE mostrano debolezza e abbassamento della coda, seguiti da debolezza degli arti posteriori, movimento scoordinato e para.......

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Discussione

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La SM è una malattia infiammatoria demielinizzante del SNC ed è uno dei disturbi neurologici più comuni che causano disabilità cronica nei giovani, imponendo un enorme onere alle famiglie e alla società 3,4. La SM è sempre stata classificata come una malattia autoimmune mediata dalle cellule T organo-specifiche, inducendo il sistema autoimmune a erodere lentamente il SNC, che coinvolgerà più sistemi in tutto il corpo27. I sintomi clinici t.......

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Dichiarazioni

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Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Ringraziamenti

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Gli autori riconoscono il sostegno della National Natural Science Foundation of China (32070768, 31871404, 31900658, 32270754) e dello State Key Laboratory of Drug Research.

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Materiali

Elenco dei materiali utilizzati in questo articolo
NomeAziendaNumero di catalogoCommenti
Siringa da 1 ml (con ago da 26 G)Shanghai Kindly Medical Instruments Co., Ltd60017031
provetta per microcentrifuga da 2 mlHAIKELASIKY-LXG2A
Ago da 22 GShanghai Kindly Medical Instruments Co., Ltd60017208
Freund' completo s AdjuvantSigmaF5881Conservato a 4 gradi; C, 1 mg di MTB inattivato a caldo (H37Ra) per mL
Sistema di preferenza del luogo condizionatoShanghai Jiliang Software Technology Co., LtdComportamento animale
EtanoloSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd10009218Conservato presso RT
Sistema di analisi video dell'attività di locomozione (campo aperto)Shanghai Jiliang Software Technology Co., LtdDigBehv-002 Comportamentoanimale
Peptide < sub>35-55< / sub>Gill Biochemical Co., LtdGLS-Y-M-03590Conservato a -20 ° C
Mycobacterium tuberculosis H37RaBD231141conservato a 4 gradi C
Camera di reazione a campo apertoShanghai Jiliang Software Technology Co., LtdComportamento animale
Tossina della pertosseCalbiochem516560Conservato a 4 gradi C
Soluzione salinaProdotto nel nostro laboratorio
ForbiceShanghai Medical Instrument (gruppo) Co., LtdJ21010
Pellicola sigillanteHeathrow ScientificHS 234526B
Sorvall Legend Micro 21R MicrocentrifugaThermo Scientific75002447 Sfera d'acciaio
QIAGEN69975
Pinzetta TissueLyser IIQIAGEN85300
Shanghai Medical Instrument (gruppo) Co., LtdJD1060
μ Scanner microCT da tavolo CT 35Scanco Medical AG, Bassersdorf, Svizzera
tamponata con fosfato

Riferimenti

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  1. Zhernakova, A., Withoff, S., Wijmenga, C. Clinical implications of shared genetics and pathogenesis in autoimmune diseases. Nature Reviews Endocrinology. 9 (11), 646-659 (2013).
  2. Filippi, M., et al. Multiple sclerosis. Nature Reviews Disease Primers. 4

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