Il presente protocollo descrive l'isolamento e la coltura di cellule staminali mesenchimali dalle arterie del cordone ombelicale, dalla vena e dalla gelatina di Wharton.
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Articolo metodologico
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Il presente protocollo descrive l'isolamento e la coltura di cellule staminali mesenchimali dalle arterie del cordone ombelicale, dalla vena e dalla gelatina di Wharton.
Le cellule staminali mesenchimali del cordone ombelicale (UC-MSC) sono un'importante fonte di cellule per la medicina rigenerativa. Le UC-MSC possono essere isolate dalla gelatina di Wharton del cordone ombelicale, così come dalle arterie ombelicali e dalla vena ombelicale. Sono conosciute come cellule staminali perivascolari ottenute dalle arterie ombelicali (UCA-PSC), cellule staminali perivascolari ottenute dalla vena ombelicale (UCV-PSCs) e cellule staminali mesenchimali ottenute dalla gelatina di Wharton (WJ-MSCs). UCA-PSC e UCV-PSC sono periciti derivati da regioni perivascolari che sono progenitori delle MSC. L'isolamento e la coltura dei tre tipi di cellule è una fonte importante per lo studio del trapianto e della riparazione di cellule staminali. Il presente protocollo si concentra sull'isolamento e la coltura di cellule attraverso la separazione meccanica, la coltura aderente e il crawling delle cellule. Attraverso questa tecnica, è possibile derivare i tre diversi tipi di cellule staminali. I marcatori della superficie cellulare sono stati rilevati mediante citometria a flusso. Le cellule staminali sono state rilevate per il potenziale di differenziazione multilineage mediante differenziazione adipogenica, osteogenica e neurale-simile, che è coerente con il fenotipo delle MSC. Questo protocollo sperimentale espande l'origine delle UC-MSC. Inoltre, il metodo di isolamento cellulare fornisce una base per ulteriori studi sulla medicina rigenerativa e altre applicazioni.
Le cellule staminali mesenchimali del cordone ombelicale umano (UC-MSC) sono ampiamente utilizzate nella medicina rigenerativa a causa del loro funzionamento non invasivo, della bassa immunogenicità e dell'assenza di controversie etiche1. In molti studi, le UC-MSC isolate dalla gelatina di Wharton (WJ) possono attaccarsi alla parete, subire una multi-differenziazione ed esprimere marcatori di cellule staminali mesenchimali (MSC)2. Tuttavia, quasi tutte le MSC originano dalla regione perivascolare3. I periciti, come sottoinsieme delle cellule perivascolari, sono ce....
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Tutte le procedure sperimentali sono state approvate dal Comitato Etico per la Ricerca Clinica, Terzo Ospedale Affiliato, Università di Soochow. Il consenso informato scritto è stato ottenuto dai soggetti umani. Gli individui con parto vaginale a termine o taglio cesareo sono stati inclusi nel presente studio per ottenere il cordone ombelicale. Il cordone ombelicale proviene da neonati sani senza pregiudizi di genere. Il neonato aveva un punteggio di Apgar di 8-10. Il punteggio di Apgar è un test rapido per i neonati somministrato subito dopo la nascita. Questo test controlla il tono muscolare, la frequenza cardiaca e altri segni del ....
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Isolamento e coltura di UCA-PSC, UCV-PSC e WJ-MSC dal cordone ombelicale
Le arterie ombelicali, la vena ombelicale e la gelatina di Wharton sono state separate meccanicamente dal cordone ombelicale e tagliate in pezzi di 2-3cm. La distanza tra le arterie, la vena o i blocchi di tessuto gelatinoso di Wharton era di circa 1 cm, disposti a forma di quinconce (Figura 1A-C). I tre tipi di cellule staminali sono stati isolati con un .......
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Questo studio ha isolato tre diversi tipi di cellule dalle arterie del cordone ombelicale, dalla vena e dalla gelatina di Wharton. Il cordone ombelicale era uno scarto di consegna e il suo utilizzo era semplice, sicuro e senza controversie etiche5. Le UC-MSC sono originali e hanno una forte capacità di differenziazione1. Studi precedenti hanno dimostrato che la quantità di UC-MSC isolate dal cordone ombelicale con il metodo di digestione de.......
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Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Gli autori desiderano riconoscere il sostegno del Progetto di ricerca di base dell'Ufficio per la scienza e la tecnologia di Changzhou nell'ambito della sovvenzione numero CJ20200110 (a YJY), della National Nature Science Foundation of China (82001629, XQS), del Youth Program of Natural Science Foundation della provincia di Jiangsu (BK20200116, XQS) e del Jiangsu Province Postdoctoral Research Funding (2021K277B, XQS).
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| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Kit di differenziazione adipogenica | Gibco | A1007001 | Differenziazione multidirezionale |
| Soluzione di colorazione rossa di alizarina | Sigma | A5533 | Differenziazione multidirezionale |
| Anticorpo contro CD13 | Thermo Fisher Scientific | MA1-12034 | Analisi del flusso |
| Anticorpo contro CD34 | BD Biosciences | del | flusso |
| Anticorpo contro CD45 | BD Biosciences | 561865 | analisi del flusso |
| Anticorpo contro CD73 | BD Biosciences | analisi del | flusso |
| 940294 Anticorpo contro HLA-DR | BD Biosciences | 555560 | analisi del flusso |
| Agente estinguente anti-fluorescenza | Abcam | AB103748 | Immunofluorescenza |
| Anti-IgG di topo H& L (Alexa Fluor 488) | abcam | ab150113 | Differenziazione multidirezionale |
| ATRA | STEMCELL Technologies | 302-79-4 | coltura cellulare |
| bFGF | Gibco | 13256029 | Differenziazione multidirezionale |
| BSA | Sigma | V900933 | Immunofluorescenza |
| Incubatore cellulare | Thermo Fisher Scientific | HERAcell 240i | coltura cellulare |
| Kit conteggio cellule-8 | Dojindo | CK04 | proliferazione cellulare |
| Centrifuga | Thermo Fisher Scientific | Sorvall™ Coltura cellulare MTX-150 | |
| DAPI | Sigma | 10236276001 | Immunofluorescenza |
| DMSO | Sigma | D1435 | Coltura cellulare |
| FBS | Gibco | 10099141 | Coltura cellulare |
| FITC Topo Anti-Human IgG | BD Biosciences | Analisi | flusso |
| Citometro a flusso | Thermo Fisher Scientific | A24864 | del flusso |
| Microscopio a fluorescenza | Thermo Fisher Scientific | IM-5 | analisi del flusso |
| Gelatina | Sigma | 48722 | Differenziazione multidirezionale |
| Leica Microscopio | Leica | DM500 | Differenziazione multidirezionale |
| LG-DMEM medium | Gibco | 11-885-084 | Lettore di |
| micropiastre | Thermo Fisher Scientific | Proliferazione cellulare | A51119500C |
| Induzione neurogena | Gibco | A1647801 | Differenziazione multidirezionale Soluzione |
| di O rosso olio | Sigma | O1516 | Differenziazione multidirezionale |
| Induzione osteogenica | Cyagen | HUXXC-90021 | Differenziazione multidirezionale |
| Paraformaldeide | Sangon Biotech | 30525-89-4 | Pipetta Pasteur in immunofluorescenza |
| Biosharp | BS-XG-03L | coltura cellulare | |
| PBS (soluzione salina tamponata con fosfato) | Coltura cellulare | di SH30256.LS | iclone |
| Penicillina streptomicina | Coltura cellulare | di SV30010 Hyclone | |
| Anticorpo primario contro NSE | Santa Cruz Biotechnology | sc-292097 | Differenziazione |
| multidirezionaleSPSS 22.0 | IBM | SPSS 22.0 | Analisi statistica |
| I fogli rampicanti cellulari | CITOTEST Scientific | 80346-0910 | Differenziazione multidirezionale |
| TritonX-100 | Sangon Biotech | 9002-93-1 | Immunofluorescenza |
| Tripsina | Gibco | 25300120 coltura cellulare |
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