Una strategia per lo studio delle cellule linfoidi produttrici di IL-9 nel modello di infezione da Nippostrongylus brasiliensis

Ofelia Muñoz-Paleta; Enrique Olguín-Martínez; Blanca Estela Ruiz-Medina; Alejandra Alonso-Quintana; Ma Cleofas Marcial-Medina; Paula Licona-Limón

doi:10.3791/64075

Articolo metodologico

Una strategia per lo studio delle cellule linfoidi produttrici di IL-9 nel modello di infezione da Nippostrongylus brasiliensis

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DOI:

10.3791/64075

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3 marzo 2023

Ofelia Muñoz-Paleta^*¹ , Enrique Olguín-Martínez^*¹ , Blanca Estela Ruiz-Medina^*¹ , Alejandra Alonso-Quintana¹ , Ma Cleofas Marcial-Medina¹ , Paula Licona-Limón¹

¹Departamento de Biología Celular y del Desarrollo, Instituto de Fisiología Celular, Universidad Nacional Autónoma de México

^* These authors contributed equally

In questo articolo

Sommario

Le cellule T e ILC2 che esprimono IL-9 sono indotte durante l'infezione da N. brasiliensis , ma la loro caratterizzazione è stata ampiamente trascurata nell'intestino infetto a causa della loro bassa frequenza e cinetica differenziale. Questo protocollo descrive l'isolamento di queste cellule da diversi organi bersaglio e la conferma della loro identità tramite citometria a flusso in diversi stadi di infezione.

Abstract

IL-9 è una citochina pleiotropica associata a vari processi, tra cui l'immunità antitumorale, l'induzione di patologie allergiche e la risposta immunitaria contro le infezioni da elminti, dove svolge un ruolo importante nell'espulsione del parassita. In un modello murino di infezione da Nippostrongylus brasiliensis, IL-9 è prodotta principalmente dai linfociti T CD4 + e dalle cellule linfoidi innate presenti nel polmone, nell'intestino tenue e nei linfonodi drenanti. Date le difficoltà tecniche coinvolte nella colorazione intracellulare di IL-9, così come la complessità di isolare le cellule ematopoietiche dall'intestino tenue dopo l'infezione, vi è una pressante necessità di un protocollo completo ma semplice per analizzare l'espressione di IL-9 in diversi tessuti linfoidi e non linfoidi in questo modello. Il protocollo qui descritto delinea la cinetica di IL-9 prodotta dalle cellule T CD4+ e dalle cellule linfoidi innate nel polmone e nell'intestino tenue, i principali organi bersaglio di N. brasiliensis, nonché nei linfonodi mediastinici e mesenterici, durante l'infezione. Inoltre, descrive in dettaglio il numero di larve necessarie per l'infezione, a seconda del tipo di cellula e dell'organo di interesse. Questo protocollo mira ad assistere nella standardizzazione dei saggi per risparmiare tempo e risorse offrendo l'opportunità di concentrarsi sulle cellule, gli organi e gli stadi specifici della malattia di interesse nel modello di infezione da N. brasiliensis.

Introduzione

Gli anchilostomi sono parassiti intestinali che infettano circa 700 milioni di persone in tutto il mondo, soprattutto nelle aree tropicali dei paesi sottosviluppati. Le infezioni ad alta intensità da Ancylostoma duodenale e Necator americanus, i parassiti anchilostomi più comuni nell'uomo, causano anemia e carenza proteica che possono causare ritardo della crescita e dello sviluppo mentale¹. N. americanus e il parassita dei roditori Nippostrongylus brasiliensis inducono una risposta immunitaria prototipica di tipo 2 nel loro ospite e condividono somiglianze nel loro ciclo vitale. Quindi, l'infezione dei topi ....